簡介：分子生物學(xué)分子生物學(xué)2014年復(fù)習(xí)題年復(fù)習(xí)題第二章題目第二章題目一、單選題一、單選題17小題小題共18分1對DS元件描述錯誤的是。A是自主轉(zhuǎn)座元件B是染色體斷裂的位點C與AC元件相似D內(nèi)部有缺失2對非復(fù)制轉(zhuǎn)座描述錯誤的是。A要求有解離酶B移動元件到一個新的位點，在原位點上不留元件C要求有轉(zhuǎn)座酶D涉及保守的復(fù)制，在這個過程中轉(zhuǎn)座子序列不發(fā)生改變3細菌的錯配修復(fù)機制可以識別復(fù)制時新舊DNA鏈之間錯誤配對的堿基，這是因為。A新DNA鏈含有錯誤的堿基B舊DNA鏈更傾向于含有錯誤堿基C舊DNA鏈在特殊位點含有甲基化基團D新DNA鏈在特殊位點含有甲基化基團4下面敘述哪些是正確的AC值與生物體的形態(tài)復(fù)雜性呈正相關(guān)BC值與生物體的形態(tài)復(fù)雜性呈負相關(guān)C每個門的最大C值與生物體形態(tài)復(fù)雜性是大致相關(guān)的D每個門的最小C值與生物體形態(tài)復(fù)雜性是大致相關(guān)的5DNA在10M纖絲中壓縮多少倍。A6倍B10倍C40倍D240倍6下列有關(guān)TATA盒HOGNESSBOX的敘述哪個是正確的（）A它位于第一個結(jié)構(gòu)基因處B它和RNA聚合酶結(jié)合C它編碼阻遏蛋白D它和反密碼子結(jié)合7理論上自發(fā)突變是隨機發(fā)生的，并均勻分布于基因組中。然而，精細分析表明，DNA中的某些位點較其他位點更易發(fā)生突變。這些“熱點”突變是由于。A存在可被進一步修飾如脫氨基的已修飾堿基如甲基化，導(dǎo)致堿基轉(zhuǎn)換并通過復(fù)制產(chǎn)生突變BDNA的空間結(jié)構(gòu)選擇性地使部分DNA暴露在誘變因子的作用下C被修飾如甲基化堿基的存在，易于發(fā)生錯配復(fù)制并因此產(chǎn)生突變DDNA中富含AT區(qū)域的存在，使得自發(fā)解鏈及錯配堿基的摻入8一個復(fù)制子是。A任何自發(fā)復(fù)制的DNA序列它與復(fù)制起點相連B復(fù)制的DNA片段和在此過程中所需的酶和蛋白質(zhì)C任何給定的復(fù)制機制的產(chǎn)物如單環(huán)D復(fù)制起點和復(fù)制叉之間的DNA片段9最常見的DNA修飾是甲基化，在原核細胞中，下列敘述錯誤的是A鑒別需修復(fù)的損傷DNA。B區(qū)別復(fù)制后的核酸鏈和允許／不允許繼續(xù)復(fù)制。C鑒別在重組中插入到基因組中的甲基化的外源DNA。D保護自身DNA免受內(nèi)切核酸酶作用，而不保護外源DNA。10原核生物中，后隨鏈的引物是被（）清除的。A3′至5′外切核酸酶BDNA連接酶CDNA聚合酶IDDNA聚合酶Ⅲ11真核復(fù)制子有下列哪些特征A由于存在終止序列，所以比原核復(fù)制子要短的多。B由于基因組較大，所以比原核復(fù)制子要長的多。C常是雙向復(fù)制，且能融合。D全部立即激活，確保S期中整條染色體被復(fù)制12分子生物學(xué)檢測證實DNA序列可在之間轉(zhuǎn)移。A線粒體DNA與核DNAB葉綠體DNA與線粒體DNAC不同的葉綠體分子D以上都對13通過突變分析最終將“基因”確定為遺傳單位后，就必須從分子水平評價基因的功能。這一問題的成功解決是由于發(fā)現(xiàn)了。A顯性等位基因上的突變使其表型類似隱性基因B突變基因不能編碼產(chǎn)生存在于野生型個體中的蛋白質(zhì)C突變基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物與野生型基因的產(chǎn)物有差別D營養(yǎng)缺陷型細菌只有經(jīng)過致突變劑處理后才能在基本培養(yǎng)基上生長14以下哪一個在260NM波長下具有最大的單位質(zhì)量吸收（）1132ΜG／ML濃度的DNA溶液的A260值是_____________12DNA修復(fù)包括三個步驟_____對DNA鏈上不正常堿基的識別與切除，________對已切除區(qū)域的重新合成，_____對剩下切口的修補。13___________途徑可以切去任何造成DNA雙螺旋大片段改變的DNA損傷；大腸桿菌中，任何由于DNA損傷造成的DNA復(fù)制障礙都會誘導(dǎo)____________的信號，即允許跨過障礙進行復(fù)制，給細胞一個生存的機會。14只有真核DNA聚合酶_________和_____顯示________外切核酸酶活性。五、簡答題五、簡答題8小題小題共30分1請描述C值矛盾，并舉一個例子說明。2RECA蛋白是怎樣調(diào)節(jié)SOS反應(yīng)的3哪些條件可促使DNA復(fù)性退火5大腸桿菌染色體的分子質(zhì)量大約是25X109DA，核苷酸的平均分子質(zhì)量是330DA，兩個鄰近核苷酸對之間的距離是034NM，雙螺旋每一轉(zhuǎn)的高度即螺距是34NM，請問1該分子有多長2該DNA有多少轉(zhuǎn)6一個基因組有兩個序列。一個是A，另一個是B各有2000BP長，其中一個是由400BP的序列重復(fù)5次而成，另一個則由50BP的序列重復(fù)40次而成，問1這個基因組的大小怎樣2這個基因組的復(fù)雜性如何答案部分，答案部分，一、單選題一、單選題17小題小題共4分1A2A3C4D5A6B7A8A9C10C11B12Ｄ13C14B16A17A二、名詞解釋二、名詞解釋1小題小題共4分1超螺旋如果固定DNA分子的兩端，或者本身是共價閉合環(huán)狀DNA或與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA分子，DNA分子兩條鏈不能自由轉(zhuǎn)動，額外的張力不能釋放，DNA分子就會發(fā)生扭曲，用以抵消張力。這種扭曲稱為超螺旋，是雙螺旋的螺旋。三、判斷題三、判斷題13小題小題共4分1錯2錯3對4錯5錯6對7錯8錯9錯10對11對12對13對四、填空題四、填空題14小題小題共4分1變性2磷酸二酯鍵3先導(dǎo)鏈，后隨鏈4RNA引物，DNA引發(fā)酶5拓撲異構(gòu)酶Ⅱ，解旋酶，聚合酶Ⅲ6480圈16327RECA蛋白，交叉鏈互換，HOLLIDAY連接8Θ復(fù)制滾環(huán)復(fù)制正超螺旋負超螺旋9高度重復(fù)序列，中度重復(fù)序列，單拷貝序列。10基因突變，位點專一的1106412DNA修復(fù)核酸酶，DNA聚合酶，DNA連接酶13核苷酸切除修復(fù)，SOS反應(yīng)14ΔΕ3’→5’五、簡答題五、簡答題8小題小題共4分1對高等真核生物而言，生物體基因組的大小與其復(fù)雜性并沒有直接的聯(lián)系。親緣關(guān)系相近的生物體的DNA含量可能相差很大。例如，一些兩棲類動物比其他的兩棲類動物的DNA含量多100倍，但它們的進化地位并不因此而更高。2RECA蛋白識別損傷DNA，引發(fā)LEXA蛋白的自身催化切割。LEXA蛋白的失活，可以除去那些含有編碼修復(fù)與防御蛋白質(zhì)基因如RECA、UVRAB和UMUC的操縱子上的阻抑蛋白。由于LEXA的表達是自我調(diào)節(jié)的，所以SOS反應(yīng)會在產(chǎn)生必須修復(fù)功能的同時，也會產(chǎn)生中止反應(yīng)的產(chǎn)物，使反應(yīng)恢復(fù)正常狀態(tài)。產(chǎn)生這些產(chǎn)物的操縱子也受LEXA蛋白的阻抑。3降低溫度、PH和增加鹽濃度可以促進DNA復(fù)性退火。

簡介：實驗實驗三感受感受態(tài)的制的制備及轉(zhuǎn)化一、一、實驗實驗?zāi)康哪康?了解了解質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化原理化原理2熟悉感受熟悉感受態(tài)細態(tài)細菌的制菌的制備和轉(zhuǎn)化步化步驟二、二、實驗實驗原理原理1感受感受態(tài)細態(tài)細胞與胞與轉(zhuǎn)化感受感受態(tài)指受體（或者宿主）最易接受外源指受體（或者宿主）最易接受外源DNA片段并片段并實現(xiàn)實現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的，它是由受體菌的遺傳遺傳性狀所決定的，同性狀所決定的，同時也受菌也受菌齡、外界、外界環(huán)境因子的影響。境因子的影響。CAMP可以使感受可以使感受態(tài)水平提高一萬倍，而水平提高一萬倍，而CA2也可大大促也可大大促進轉(zhuǎn)進轉(zhuǎn)化的作用。化的作用。細胞的感受胞的感受態(tài)一般出一般出現(xiàn)在對數(shù)生數(shù)生長期，期，新鮮幼嫩的幼嫩的細胞是制胞是制備感受感受態(tài)細態(tài)細胞和胞和進行成功行成功轉(zhuǎn)化的關(guān)化的關(guān)鍵。制。制備出的出的感受感受態(tài)細態(tài)細胞暫時暫時不用不用時，可加入占，可加入占總體積15的無菌甘油或的無菌甘油或70℃保存（有效期存（有效期6個月）。個月）。轉(zhuǎn)化特指將化特指將質(zhì)粒DNA或以其或以其為載為載體構(gòu)建的重體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細菌體內(nèi)，使之體內(nèi)，使之獲得新的得新的遺傳遺傳特性的一種方法。受體特性的一種方法。受體細胞經(jīng)過經(jīng)過一些特殊方一些特殊方法（如法（如電擊電擊法，法，CACL2等化學(xué)等化學(xué)試劑試劑法）法）處理后，使理后，使細胞膜的通透性胞膜的通透性發(fā)生變化，成化，成為能容能容許外源外源DNA分子通分子通過的感受的感受態(tài)細態(tài)細胞。胞。進入細胞的胞的DNA分子通分子通過復(fù)制、表達復(fù)制、表達實現(xiàn)遺傳實現(xiàn)遺傳信息的信息的轉(zhuǎn)移，使受體移，使受體細胞出胞出現(xiàn)新的遺傳遺傳性狀。性狀。大腸桿菌的桿菌的轉(zhuǎn)化常用化學(xué)法（化常用化學(xué)法（CACL2法），法），該法最先是由法最先是由COHEN于1972年發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)的。其原理是的。其原理是細菌處于0℃，CACL2的低滲溶液中，菌的低滲溶液中，菌細胞中，是外源性中，是外源性DNA的插入位點。的插入位點。雖然使用然使用藍白篩選篩選的工程菌因的工程菌因為缺失了缺失了N端得端得146個氨基酸個氨基酸而不具有生物活性，但如果而不具有生物活性，但如果該菌株含有菌株含有帶有LACZ，的質(zhì)粒以后粒以后，則質(zhì)則質(zhì)粒表達的粒表達的N146個氨基酸和菌株染色體個氨基酸和菌株染色體DNA表達的缺乏表達的缺乏N端146個氨基酸的氨基酸的Β半乳糖苷半乳糖苷酶突變體互體互補，具有與完整的，具有與完整的Β半乳糖苷半乳糖苷酶相似的作用，能將似的作用，能將XGAL分解分解為藍為藍色物色物質(zhì)。

簡介：1醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料小結(jié)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料小結(jié)1、質(zhì)粒、質(zhì)粒是細菌細胞內(nèi)攜帶的染色體外的DNA分子，是共價閉合的環(huán)狀DNA分子，能獨立進行復(fù)制。質(zhì)粒只有在宿主細胞內(nèi)才能夠完成自己的復(fù)制。2、基因、基因指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列及表達這些信息所需的全部核苷酸序列，是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位。3、癌基因、癌基因是細胞內(nèi)控制細胞生長和分化的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細胞惡性轉(zhuǎn)化的特性，它的結(jié)構(gòu)異?；虮磉_異常，可以引起細胞癌變。4、基因克隆、基因克隆是指把一個生物體的遺傳信息（基因片段）轉(zhuǎn)入另一個生物體內(nèi)進行無性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又稱DNA克隆。5、抑癌基因、抑癌基因是指存在于正常細胞內(nèi)的一大類可抑制細胞生長并具有潛在抑癌作用的基因，當這類基因在發(fā)生突變、缺失或失活時可引起細胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。6、基因診斷、基因診斷是以DNA和RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、缺陷或表達異常，對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。7、管家基因、管家基因是在生命過程都是必需的，是在一個生物個體的幾乎所有細胞中持續(xù)表達的基因，它較少受環(huán)境因素的影響，其表達方式為組成性基因表達。8、KLENOW片段片段亦稱DNA聚合酶1大片段，為DNA聚合酶I經(jīng)枯草桿菌蛋白酶裂解后產(chǎn)生的大片段，它除了保留5′→3′聚合酶活性及3′→5′外切酶活性外，失去了5′→3′外切酶活性，它具有的3′→5′外切酶活性能保證DNA復(fù)制的準確性，把DNA合成過程中錯誤配對的堿基去除，再把正確的核苷酸接上去。9、核蛋白體、核蛋白體系TRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合生成的一種復(fù)合體，是蛋白質(zhì)生物合成的場所。10、限制性內(nèi)切核酸酶、限制性內(nèi)切核酸酶能識別DNA的特異序列，并在識別位點或其附近切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切核酸酶，是基因克隆中最重要的工具酶，通常所說的限制酶是指2型酶。主要從原核細胞中提取，大多數(shù)限制性內(nèi)切酶是錯位切割雙鏈DNA，產(chǎn)生粘性末端，部分酶則沿對稱軸切割DNA而產(chǎn)生平端。11、TM值DNA變性是在一個相當窄的溫度范圍內(nèi)完成的，在這一范圍內(nèi)，紫外吸收值達到最大值的50時的溫度稱為DNA的解鏈溫度，又稱融解溫度（TM），其大小與GC含量成正比。或雙鏈DNA變性一半所需要的溫度叫DNA的融解溫度12、DNA的甲基化的甲基化是指DNA的一級結(jié)構(gòu)中，有一些堿基可以通過加上一個甲基而被修飾，其作用是對自身DNA產(chǎn)生保護作用。13、原位雜交、原位雜交是核酸保持在細胞或組織切片中，經(jīng)適當方法處理細胞或組織后，將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交的方法。1414、DNADNA微陳列微陳列系直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面所組成的微陳列（基因芯片）稱為DNA微陳列。15、順序作用元件、順序作用元件是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達調(diào)控相關(guān)，能被基因調(diào)控蛋白異性識別和結(jié)合的DNA序列抱括啟動子上游啟動子元件增強子加尾信號和一些反應(yīng)元件。16轉(zhuǎn)位因子是指能夠在一個DNA分子內(nèi)或2個DNA分子之間移動的DNA片段。17、基因治療是指通過在特定靶細胞中表達該細胞本來不表達的基因，或采用特定方式關(guān)閉和抑制異常表達基因，達到治療疾病目的的治療方法。二、綜合內(nèi)容3命中起重要作用、含短的高度重復(fù)序列。其主要功能有保護線性DNA的完整復(fù)制、保護染色體末端、決定細胞的壽命。6、DNA聚合酶（聚合酶（DNAPOL）①作用是催化DNA合成，其活性需要MG2的存在。大腸桿菌DNA聚合酶有III、II3種（即原核生物DNA聚合酶）。②DNAPOLI的功能有A、聚合作用，使DNA鏈沿5′→3′方向延伸，B、3′→5′外切酶活性，即能從DNA鏈3′端開始沿3′→5′進行水解反應(yīng)，產(chǎn)生5′單核苷酸，糾正復(fù)制過程中的錯誤，保證DNA復(fù)制的正確性，因而具有校對功能；C、5′→3′外切酶活性，參與RNA生物的切除、填補岡崎片段間的空隙以及DNA損傷的修復(fù)。③DNAPOLII具有5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切核酸酶活性，可能參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)。④DNAPOLIIΑ亞基具有催化合成DNA的功能；Ε亞基具有3′→5′外切酶活性及編輯和校對功能，Θ則為裝配所必需，是原核生物復(fù)制延長中真正起催化作用的酶。DNA聚合酶的共同性質(zhì)是需要DNA模板；RNA或DNA作為引物；ATP與MG2的參與；以DNTP作底物；DNA合成的方向是5′→3′。反應(yīng)特點新生鏈的延伸方向為5→3；半保留方式合成子代DNA雙鏈；反應(yīng)需要DNA引物。共同具有的酶活性5→3聚合酶活性；3→5核酸外切酶活性。7、RNA聚合酶聚合酶①RNA聚合酶也稱依賴DNA的RNA聚合酶，能以DNA為模板，四種核苷三磷酸為底物，按照堿基配對原則，從5′→3′方向延長RNA鏈。②原核生物的RNA聚合酶只有一種，是由四種亞基Α2ΒΒΣ組成的五聚體蛋白質(zhì)，稱為全酶。去掉Σ亞基后，剩下的Α2ΒΒ’稱為核心酶?；罴毎霓D(zhuǎn)錄起始，需要全酶；而核心酶負責(zé)催化RNA鏈的延伸。③真核生物RNA聚合酶有三種，即RNA聚合酶I、II、III。RNA聚合酶I定位在核仁，主要轉(zhuǎn)錄58S、18S、28SRRNA基因；酶II定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄編碼蛋白質(zhì)的基因，即主要轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生MRNA；酶III定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄TRNA和5SRRNA基因。④RNA聚合酶催化聚合反應(yīng)時需要有MG2或MN2的存在，無3’→5’外切酶海性，無校對功能。8、密碼子分為、密碼子分為起始密碼和終止密碼，起始密碼為AUG，終止密碼為UAA、UAG和UGA，共有64種不同的密碼?？勺鳛樵松锲鹗济艽a的是AUGGUGUUG。9、遺傳密碼具有以下特點、遺傳密碼具有以下特點A、連續(xù)性兩個密碼子之間沒有任何核苷酸加以分隔，即密碼是無標點的。B、方向性MRNA中密碼子的排列是有方向性的，即起始密碼子總是位于編碼區(qū)5’末端，而終止密碼子位于3’末端。每個密碼子的三個核苷酸也是5’→3’方向閱讀，不能倒讀。C、簡并性是指遺傳密碼中除色氨酸和甲硫氨酸僅有一個密碼子外，其余氨基酸有2～6個密碼子為其編碼。D、通用性從最簡單的病毒、原核生物、直至人類，都使用同一套遺傳密碼。E、擺動性翻譯過程中，氨基酸的正確加入，要靠MRNA上的密碼子與TRNA上的反密碼子相辯認。密碼子與反密碼子配對辯認時，有時不完全遵守堿基互補規(guī)律，即使不嚴格互補也能辯認配對，這種現(xiàn)象稱為擺動。1010、轉(zhuǎn)錄的過程及特點、轉(zhuǎn)錄的過程及特點①轉(zhuǎn)錄是以DNA為模板，以4種NTP為原料，依堿基配對規(guī)律，在DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶催化下合成RNA的過程，其過程包括起始、延長和終止三個階段。②轉(zhuǎn)錄的特點A、對于一個基因組來說，轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部分基因，而且每個基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對獨立的控制。B、轉(zhuǎn)錄是不對稱的。C、轉(zhuǎn)錄時不需要引物，而且RNA鏈的合成是連續(xù)的。D、轉(zhuǎn)錄的單向性，即RNA生物合成時，只能向一個方向進行聚合，所依賴的模板DNA鏈的方向為3’→5’，而RNA鏈的合成方向為5’→3’。E、有特定的起始和終止位點。參與轉(zhuǎn)錄終止的因素為Ρ因子或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3端發(fā)夾結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄終止的修飾點AATAAAGT序列。

簡介：1天水師范學(xué)院生化學(xué)院天水師范學(xué)院生化學(xué)院2010201020112011學(xué)年度學(xué)年度第二學(xué)期生物技術(shù)專業(yè)2008級考試試題（參考答案）（A卷）科目分子生物學(xué)題目一二三四五六七總分得分一名詞解釋（每題2分，共10分）1SHINEDALGARNOSEQUENCE原核生物起始密碼子AUG和其上游311個核苷酸處一段39個核苷酸序列，是16SRRNA結(jié)合的位點。2GENEFAMILY由于真核細胞的DNA都是單順反子，許多相關(guān)的基因常常按功能成套組合，一套基因就是一個基因家族。家族中各成員的表達水平和酶活性可以很不相同，但通常是密切相關(guān)的。通常分為簡單多基因家族、復(fù)雜多基因家族和發(fā)育調(diào)控的復(fù)雜多基因家族。3RENATURATION熱變性的DNA緩慢冷卻，已分開的互補鏈按原有堿基排列順序借助于氫鍵重新配對結(jié)合，致使DNA分子的許多天然性狀得以恢復(fù)的特性，稱為DNA的復(fù)性（RENATURATION），也稱退火ANNEALING。4RNAINTERFERENCE指用雙鏈RNA去抑制特定MRNA的翻譯而使該基因編碼的蛋白不被表達從而使研究物種出現(xiàn)一定的表征PHENOTYPE。5CDNALIBRARY利用純化的總MRNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成互補的DNA即CDNA，再按構(gòu)建基因文庫的類似方法對CDNA進行克隆，由此獲得的克隆總稱為CDNA文庫。二、填空（每題2分，共10分）1紫外線引起的DNA損傷最容易形成的是TT二聚體，這類損傷可用可見光進行修復(fù)，這種修復(fù)方式屬回復(fù)修復(fù)。2細菌的應(yīng)急反應(yīng)主要是由于氨基酸的合成全面匱乏引起，實施這一應(yīng)急反應(yīng)的信號是PPGPP或PPGPPP，產(chǎn)生這一物質(zhì)的誘導(dǎo)物是空載的TRNA。3在瓊脂糖凝膠電泳中，加入的指示劑有溴酚藍和二甲苯腈藍，其中溴酚藍的分子量相當于300BP的DSDNA，二甲苯腈藍的分子量相當于4KBP的DSDNA。3D都是環(huán)狀雙鏈DNA分子E都有篩選標志7RNA電泳轉(zhuǎn)移后與探針雜交叫作（B）ASOUTHERNBLOTBNTHERNBLOTCWESTERNBLOTDDOTBLOTESITUBLOT8一個MRNA的部分順序和密碼的編號是B140141142143144145146CAGCUCCGGUAGUAAAACAGC以此MRNA為模板，經(jīng)翻譯生成多肽鏈含有的氨基酸為A141B142C143D1449真核生物基因組中沒有（C）A內(nèi)含子B外顯子C轉(zhuǎn)錄因子D插入序列E高度重復(fù)序列10真核生物中有3種RNA聚合酶，分別叫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。主要根據(jù)對Α鵝膏蕈堿（ΑAMANITINE）的敏感性不同來區(qū)別。其中對Α鵝膏蕈堿最為敏感的是（B）。ARNA聚合酶ⅠBRNA聚合酶ⅡCRNA聚合酶ⅢDRNA聚合酶Ⅱ和酶Ⅲ五、寫出下列簡寫或單詞的中文名稱（每題1分，共10分）1EXON外顯子2PSEUDOGENE假基因3SV40猿猴病毒404COS粘粒5DENATURATION變性6EXCISIONREPAIR切除修復(fù)7INCLUSIONBODY包涵體8ANTISENSESTR反義鏈9MONOCISTRONICMRNA單順反子MRNA10DELETION缺失六、簡答題（每題10分，共30分）1全長為100KBP的DSDNA，將5ˊ末端標記后，經(jīng)不完全水解得到4個

簡介：生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)名詞解釋名詞解釋1結(jié)構(gòu)域指一些較大的蛋白質(zhì)分子，其三級結(jié)構(gòu)中具有兩個或多個在空間上可明顯區(qū)別的局部區(qū)域。其特點結(jié)構(gòu)域與分子整體以共價鍵相連；具有相對獨立的空間結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能；同一蛋白質(zhì)中的結(jié)構(gòu)域可以相同或不同，不同蛋白質(zhì)中的結(jié)構(gòu)域也可以相同或不同。2等電點指氨基酸或蛋白質(zhì)在溶液中解離呈陽離子和陰離子的趨勢和程度相等，成為兼性離子，呈電中性，這時溶液的PH稱為該氨基酸或蛋白質(zhì)的等電點。3蛋白質(zhì)變性指在某些理化因素的作用下，蛋白質(zhì)特定的空間結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)、生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)變性的本質(zhì)是空間結(jié)構(gòu)被破壞，不涉及一級結(jié)構(gòu)的改變。4TMDNA熱變形過程中，紫外線光吸收值增加達到最大值一半時所對應(yīng)的溫度稱為該DNA的熔點或融解溫度，即TM。5KM即米氏常數(shù)，是酶的特征性常數(shù)，數(shù)值上等于酶促反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度。6酶的競爭性抑制作用抑制劑與酶的底物結(jié)構(gòu)相似，抑制劑可與底物競爭結(jié)合酶的活性中心，從而阻礙酶與底物結(jié)合形成中間產(chǎn)物的抑制作用。7變構(gòu)調(diào)節(jié)小分子的變構(gòu)效應(yīng)劑與酶蛋白分子活性中心以外的某一部位特異結(jié)合，引起酶蛋白質(zhì)分子構(gòu)象變化，進而改變酶活性，這種對酶活性的調(diào)節(jié)稱為酶的變構(gòu)調(diào)節(jié)。變構(gòu)效應(yīng)劑有變構(gòu)激活劑和變構(gòu)抑制劑。8共價修飾酶蛋白肽鏈上的一些基團可與某種化學(xué)基團發(fā)生可逆的共價結(jié)合，從而改變酶的活性，這一過程稱為酶的化學(xué)修飾。脫羧和一次底物磷酸化后，乙?；粡氐追纸庋趸蒗Ｒ宜岬靡栽偕倪^程。19乳酸循環(huán)在肌肉中葡萄糖經(jīng)糖無氧氧化生成乳酸，乳酸經(jīng)血液運至肝臟，肝臟將乳酸異生成葡萄糖，葡萄糖釋放至血液又被肌肉攝取，這種循環(huán)進行的代謝途徑叫做乳酸循環(huán)。生理意義是可以使乳酸再利用；防止因乳酸堆積引起酸中毒。19糖有氧氧化葡萄糖在有氧條件下徹底氧化分解生成CO2和H2O，同時釋放大量能量合成ATP的過程。20脂肪動員儲存在脂肪細胞中的脂肪，經(jīng)脂肪酶逐步水解為游離脂酸和甘油并釋放入血，通過血液運輸至其他組織氧化利用的過程稱脂肪動員。21酮體酮體是脂酸在肝臟氧化分解時產(chǎn)生的特有中間代謝物，包括乙酰乙酸、Β羥丁酸和丙酮。肝臟合成酮體，經(jīng)血液運輸?shù)礁瓮饨M織氧化利用。酮體是肝輸出能源的一種形式。22血漿脂蛋白血漿脂蛋白是脂質(zhì)和載脂蛋白結(jié)合形成的球形復(fù)合體，是血漿脂質(zhì)的運輸和代謝形式。球形復(fù)合體的表面為載脂蛋白、磷脂、游離膽固醇的親水基團，這些化合物的疏水基團朝向球內(nèi)，球形復(fù)合體的內(nèi)核為甘油三酯、膽固醇酯等疏水脂質(zhì)。23必需脂肪酸維持機體生命活動必需，但機體自生不能合成，必須由食物供給的脂酸稱必須脂肪酸。人體必需脂肪酸是一些多不飽和脂肪酸，包括亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸。24Β氧化脂酸在胞液中活化為脂酰COA，經(jīng)肉堿轉(zhuǎn)運進入線粒體基質(zhì)后，在脂酸Β氧化多酶復(fù)合體的有序催化下，從脂?；摩⑻荚娱_始，經(jīng)脫氫、加水、再脫氫和硫解四部連續(xù)的反應(yīng)，生成1分子乙酰COA、1分子比原來少2個碳原子的脂酰COA、1分子NADHH及1分子FADH2。Β氧化循環(huán)進行，最終將偶數(shù)碳原子脂酸的脂酰基全部氧化為乙酰COA。25轉(zhuǎn)氨基作用在轉(zhuǎn)氨酶的作用下，把一種氨基酸上的氨基轉(zhuǎn)移到Α酮酸上，形成另一種氨基酸，原

簡介：1分子生物學(xué)練習(xí)分子生物學(xué)練習(xí)2一、一、填空題（本大題共填空題（本大題共10小題，每空小題，每空1分，共分，共20分）分）1、所有岡崎片段的延伸都按__5’→3’___________方向進行。2、細菌的環(huán)狀DNA通常在一個___復(fù)制起點復(fù)制起點_________開始復(fù)制。P993、DNA聚合酶Ⅰ的KLENOW大片段是用枯草桿菌蛋白酶切割DNA聚合酶Ⅰ得到的分子量為70KD的大片段，具有兩種酶活性（1）5ˊ→3ˊ聚合酶。（2）3ˊ→5ˊ外切酶活性的活性。P1024、檢測某DNA分子具有呼吸作用，這意味著，該DNA分子的序列具有富含富含AT特點。5、原核基因啟動區(qū)范圍較小，一般情況下，TATAAT的中心位于__10區(qū)_______，上游__35______區(qū)為正調(diào)控因子結(jié)合序列，___1_____區(qū)為負調(diào)控因子結(jié)合序列。6、原核生物MRNA的5’端無帽子結(jié)構(gòu)，3’端沒有或只有較短的多聚腺苷酸多聚腺苷酸結(jié)構(gòu)。7、蛋白質(zhì)運轉(zhuǎn)機制可分為兩大類，即翻譯轉(zhuǎn)運同步機制翻譯轉(zhuǎn)運同步機制和翻譯后翻譯后轉(zhuǎn)運機制轉(zhuǎn)運機制，其中分泌蛋白的運轉(zhuǎn)機制屬于翻譯轉(zhuǎn)運同步機制翻譯轉(zhuǎn)運同步機制。P2718、魔斑核苷酸是指PPGPP（四磷酸鳥苷）（四磷酸鳥苷）和PPPGPP（五磷酸鳥（五磷酸鳥苷）苷）兩種化合物，它們的水平可對翻譯造成一定的影響。P2339、分子遺傳學(xué)認為，生物體的第I類遺傳信息是指由DNA序列所提供的遺傳信序列所提供的遺傳信息。第II類遺傳信息是指表觀遺傳學(xué)信息（在第一類遺傳信息的基礎(chǔ)上，表觀遺傳學(xué)信息（在第一類遺傳信息的基礎(chǔ)上，通過后成修飾指令第一類遺傳信息是否表達或何時何地、以何種方式表達）通過后成修飾指令第一類遺傳信息是否表達或何時何地、以何種方式表達）。P28910、幾乎所有的RNA都是由模板單鏈模板單鏈DNA轉(zhuǎn)錄而來，因此，序列和其中一條鏈互補互補。二、二、判斷題（將答案寫在括號內(nèi)，正確的寫判斷題（將答案寫在括號內(nèi)，正確的寫“√”，錯誤的寫，錯誤的寫“”）（本大題分（本大題分10小題每小題每小題1分共10分）分）1、結(jié)構(gòu)基因多為單拷貝。（√）2、DNA二級結(jié)構(gòu)由Z轉(zhuǎn)變?yōu)锽時，則DNA轉(zhuǎn)錄方被活化。（）3、迄今所發(fā)現(xiàn)的限制性內(nèi)切核酸酶既能作用于雙鏈DNA，又能作用于單鏈DNA。（）3D啟動基因的順序特征6、對限制性核酸內(nèi)切酶的作用，下列哪個不正確DA識別序列長度一般為46BPB識別序列具有回文結(jié)構(gòu)C只能識別和切割雙鏈DNA分子D只能識別和切割原核生物DNA分子7、真核與原核細胞蛋白質(zhì)合成的相同點是EP202204A翻譯與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)進行B模板都是多順反子C轉(zhuǎn)錄后的產(chǎn)物都需要進行加工修飾D甲酰蛋氨酸是第一個氨基酸E都需要GTP8、氨酰TRNA促進多少個核糖核苷酸三聯(lián)體的翻譯DA1B2C20D619、真核細胞MRNA前體的長度由A轉(zhuǎn)錄終止位點形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)決定B其3’末端的聚腺苷酸化位點所決定，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在此位點被切割并加上PLOYAC在終止位點與RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合的終止蛋白決定D加帽、聚腺苷酸化及內(nèi)含子的剪接所決定10、色氨酸操縱子的調(diào)控作用是受兩個相互獨立的系統(tǒng)控制的，其中一個需要前導(dǎo)肽的翻譯，下面哪一個調(diào)控這個系統(tǒng)BA色氨酸B色氨酰TRNATRPC色氨酰TRNADCAMP四、四、名詞解釋（本大題共名詞解釋（本大題共6小題，總計小題，總計18分）分）1、本小題3分POLYCISTRONICMRNA多順販子MRNA在原核細胞中，通常是幾種不同的MRNA連在一起，相互之問由一段短的不編碼蛋白質(zhì)的間隔序列所隔開，這種MRNA叫做多順反子MRNA2、本小題3分POLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈式反應(yīng)在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。3、本小題3分RNAINTERFERENCERNAI（RNA干涉）第六章基因表達的調(diào)控作業(yè)中有寫。4、本小題3分CISACTINGELEMENTP22125217218順式作用元件是指基因序列中可在原位發(fā)揮作用并影響與其在物理上相連的基因表達的保守結(jié)構(gòu)（DNA或RNA）順式作用元件包括啟動子、增強子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)元件等，它們的作用是參與基因表達的調(diào)控。順式作用元件本身不編碼任何蛋白質(zhì)，僅僅提供一個作用位點，要與反式作用因子相互作用而起作用。

簡介：分子生物學(xué)與基因工程試題庫（分子生物學(xué)與基因工程試題庫（1）一、一、選擇題選擇題單選或多選單選或多選每題每題2分，共計分，共計2020分1證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個關(guān)鍵性實驗是肺炎球菌在老鼠體內(nèi)的毒性和T2噬菌體感染大腸桿菌。這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是A從被感染的生物體內(nèi)重新分離得到DNA，作為疾病的致病劑BDNA突變導(dǎo)致毒性喪失C生物體吸收的外源DNA而并非蛋白質(zhì)改變了其遺傳潛能DDNA是不能在生物體間轉(zhuǎn)移的，因此它一定是一種非常保守的分子E真核生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代2TRNA參與的反應(yīng)有A轉(zhuǎn)錄B反轉(zhuǎn)錄C翻譯D前體MRNA的剪接E復(fù)制3DNA的復(fù)制A包括一個雙螺旋中兩條子鏈的合成B遵循新的子鏈與其親本鏈相配對的原則C依賴于物種特異的遺傳密碼D是堿基錯配最主要的來源E是一個描述基因表達的過程4關(guān)于DNA的修復(fù)，下列描述中，哪些是不正確的AUV照射可以引起嘧啶堿基的交聯(lián)BDNA聚合酶Ⅲ可以修復(fù)單鏈的斷裂C雙鏈的斷裂可以被DNA聚合酶Ⅱ修復(fù)DDNA的修復(fù)過程中需要DNA連接酶E細菌可以用一種核酸內(nèi)切酶來除去受損傷的堿基F糖苷酶可以切除DNA中單個損傷的堿基5理論上自發(fā)突變是隨機發(fā)生，并均勻分布于基因組中。然而，精細分析表明，DNA中的某些位點較其他位點更易發(fā)生突變。這些“熱點”突變是由于ADNA的空間結(jié)構(gòu)選擇性地使部分DNA暴露在誘變因子的作用下B存在可被進一步修飾如脫氨基的已修飾堿基如甲基化，導(dǎo)致堿基轉(zhuǎn)換并通過復(fù)制產(chǎn)生突變C被修飾如甲基化堿基的存在，易于發(fā)生錯配復(fù)制并因此產(chǎn)生突變DDNA中富含AT區(qū)域的存在，使得自發(fā)解鏈及錯配堿基的摻人E對沉默突變的選擇壓力很低，因此熱點多為密碼子第三位的堿基6Λ阻遏蛋白是一種DNA結(jié)合蛋白，它屬于以下哪一組A螺旋環(huán)螺旋蛋白B螺旋轉(zhuǎn)角螺旋蛋白C鋅指蛋白D亮氨酸拉鏈蛋白EDNA脫甲基化酶7標出以下所有正確表述4產(chǎn)生單個堿基變化的突變叫突變，如果堿基的改變產(chǎn)生一個并不改變氨基酸殘基編碼的，并且不會造成什么影響，這就是突變。如果改變了氨基酸殘基的密碼，這就是突變。這種突變對蛋白質(zhì)功能影響程度要根據(jù)被改變的氨基酸殘基在蛋白質(zhì)或結(jié)構(gòu)中的重要程度，或是與酶的的密切性來決定，活性變化范圍可從到接近正常。5能夠誘導(dǎo)操縱子但不是代謝底物的化合物稱為誘導(dǎo)物。能夠誘導(dǎo)乳糖操縱子的化合物就是其中一例。這種化合物同蛋白質(zhì)結(jié)合，并使之與分離。乳糖操縱子的體內(nèi)功能性誘導(dǎo)物是。四、簡答題（每題四、簡答題（每題3分，共計分，共計3030分）分）1在體內(nèi)，RRNA和TRNA都具有代謝的穩(wěn)定性，而MRNA的壽命卻很短，原因何在22現(xiàn)分離到X82噬菌體的一個突變型，它同野生型的噬菌斑相當不同，并已分離到這兩種噬菌體的DNA，請設(shè)計一個實驗，初步鑒定是點突變、插入突變還是缺失突變3真核與原核核糖體的主要區(qū)別是什么4為什么把同樣的第一外顯子SL外顯子加在所有MRNA上對錐蟲是有利的5真核生物中，基因的表達受不同水平的調(diào)控，請列舉其中3種。6比較基因組的大小和基因組復(fù)雜性的不同一個基因組有兩個序列，一個是A，另一個是B，各有2000BP長。其中一個是由400BP的序列重復(fù)5次而成，另一個則由50BP的序列重復(fù)40次而成，問1這個基因組的大小怎樣2這個基因組的復(fù)雜性如何7反轉(zhuǎn)錄病毒與反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子有什么不同8比較真核生物與原核生物轉(zhuǎn)錄起始的第一步有什么不同。9有很多突變對于野生型基因是隱性的，也就是說，在一個含有突變型和野生型基因二倍體細胞中，野生型的特性能夠得到表達。請根據(jù)對突變過程的認識解釋這一事實。對于說明為什么有些突變是顯性的，有何見解10假如發(fā)生了堿基對的錯配會產(chǎn)生什么表型，它們怎樣被修復(fù)五、實驗設(shè)計與分析（每題五、實驗設(shè)計與分析（每題5分，共計分，共計1010分）分）1假如你從一新發(fā)現(xiàn)的病毒中提取了核酸。請用最簡單的方法確定（1）它是DNA還是RNA（2）它是單鏈還是雙鏈2種子在儲藏過程中發(fā)生了某種變化，使得長成的水稻很容易被一種病原菌感染。據(jù)推測可能是某一化學(xué)誘導(dǎo)的突變導(dǎo)致一個具有抗菌功能的關(guān)鍵酶丟失。請設(shè)計一個實驗驗證這種推測是否正確，如何使種子重新獲得對這種病的抗性提示根瘤農(nóng)桿菌AGROBACTERIUMTUMEFACIENS具有通過其TI質(zhì)粒將細菌DNA帶人植物基因組的獨特功能。六、問答題（六、問答題（1010分）分）復(fù)制DNA的聚合酶DNA依賴的DNA聚合酶也有校正功能，解釋為什么RNA聚合酶沒有這種功能。

簡介：分子生物學(xué)與基因工程試題庫（分子生物學(xué)與基因工程試題庫（3）一、選擇題一、選擇題單選或多選單選或多選（每題（每題2分，共計分，共計2020分）分）1下列各項中，需要進行液相雜交的是ASOUTHERN印跡BNTHERN印跡CSLOT印跡DS1作圖21953年WATSON和CRICK提出A多核苷酸DNA鏈通過氫鍵連接成一個雙螺旋BDNA的復(fù)制是半保留的，常常形成親本子代雙螺旋雜合鏈C三個連續(xù)的核苷酸代表一個遺傳密碼D遺傳物質(zhì)通常是DNA而非RNAE分離到回復(fù)突變體證明這一突變并非是一個缺失突變3TRNA參與的反應(yīng)有A轉(zhuǎn)錄B反轉(zhuǎn)錄C翻譯D前體MRNA的剪接E復(fù)制4一個復(fù)制子是A細胞分裂期間復(fù)制產(chǎn)物被分離之后的DNA片段B復(fù)制的DNA片段和在此過程中所需的酶和蛋白C任何自發(fā)復(fù)制的DNA序列它與復(fù)制起始點相連D任何給定的復(fù)制機制的產(chǎn)物如單環(huán)E復(fù)制起點和復(fù)制叉之間的DNA片段5DNA最普遍的修飾是甲基化，在原核生物中這種修飾的作用有A識別受損的DNA以便于修復(fù)B復(fù)制之后區(qū)分鏈，以確定是否繼續(xù)復(fù)制C識別甲基化的外來DNA并重組到基因組中D保護它自身的DNA免受核酸內(nèi)切酶限制E識別轉(zhuǎn)錄起始位點以便RNA聚合酶能夠正確結(jié)合6置換位點突變A并不改變所編碼蛋白的序列B比沉默位點突變更為經(jīng)常C與沉默位點突變的發(fā)生率相同7Λ原噬菌體的晚期基因的表達依靠A聚合酶，Σ因子，ΣRE，從啟動子PRE起始轉(zhuǎn)錄B抗終止N因芋允許從啟動子PR開始轉(zhuǎn)錄的繼續(xù)C抑制CRO蛋白抑制從啟動子PR開始的轉(zhuǎn)錄D抗終止Q因子允許從啟動子PR開始轉(zhuǎn)錄的繼續(xù)E以上全不對8下面哪些真正是乳糖操縱子的誘導(dǎo)物A乳糖B蜜二糖CO硝基苯酚Β半乳糖苷ONPG3第三層涵義就是。四、簡答題（每題四、簡答題（每題3分，共計分，共計3030分）分）1在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA的目的是什么機理是什么2氨酰TRNA合成酶的功能是什么3為什么MRNA的翻譯起始密碼子的上游必須含有不被翻譯的核糖核苷酸4亮氨酸拉鏈蛋白所識別的DNA有何特點如何理解亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子的二聚體結(jié)構(gòu)同識別位點的關(guān)系5在一個克隆基因的分析中發(fā)現(xiàn)一個含有轉(zhuǎn)錄位點上游38KBDNA的克隆，其MRNA直接轉(zhuǎn)錄活性比僅含有31KB上游DNA的克隆的轉(zhuǎn)錄活性大50倍。這表明了什么6蛋白酶為什么對反轉(zhuǎn)錄病毒生活史很重要7概括說明Σ因子對啟動子調(diào)節(jié)的輔助功能。8寫出利用突變研究以下問題的步驟1氨基酸X的代謝途徑；2ECOLI中細胞分裂的控制。9錯配修復(fù)的方向可以怎樣被調(diào)節(jié)突變型到野生型或野生型到突變型10為什么說信使RNA的命名源自對真核基因表達的研究，比說源自對原核基因表達的研究更為恰當五、設(shè)計和分析題（每題五、設(shè)計和分析題（每題5分，共計分，共計1010分）分）1從4種不同的物種分離出的核酸中各種堿基的比率（）如下AT或AUAUATUGCGCCT或CU117173333051022919223009710324162436066154342110（1）對于每個物種，回答以下問題①核酸是DNA還是RNA②它是單鏈還是雙鏈2如何以大腸桿菌質(zhì)粒DNA為載體克隆一個編碼動物激素的基因，并使之在大腸桿菌中進行表達簡要說明實驗中可能遇到的問題及可能的解決辦法。六、問答題（六、問答題（1010分）分）衰減作用如何調(diào)控ECOLI中色氨酸操縱子的表達

簡介：分子生物學(xué)與基因工程試題庫（分子生物學(xué)與基因工程試題庫（4）一、選擇題（每題一、選擇題（每題2分，共計分，共計2020分）分）1交配型轉(zhuǎn)換反應(yīng)A涉及將DNA盒從一個沉默基因座HML或HMR轉(zhuǎn)移到MAT基因座B通常導(dǎo)致交配型的改變C不發(fā)生在單倍體細胞中2鋅指蛋白與DNA的結(jié)合A位于DNA大溝B通過“鋅指”的C端進行C利用蛋白的Α螺旋區(qū)域D每個“指”通過形成兩個序列特異的DNA接觸位點E通過“指”中保守的氨基酸同DNA結(jié)合3在O連接寡聚糖中，直接同多肽相連的糖基是A甘露糖BN乙酰葡糖胺CC半乳糖或N乙酰半乳糖胺D半乳糖或N乙酰葡萄糖胺E葡萄糖4在真核生物細胞中，翻譯的哪一個階段需要GTPAMRNA的5末端區(qū)的二級結(jié)構(gòu)解旋B起始TRNA同核糖體的結(jié)合C在延伸的過程中，TRNA同核糖體的結(jié)合D核糖體的解體E5帽子結(jié)構(gòu)的識別5第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是APBR322BCOLELCPSCL01DPUCL86RFLP產(chǎn)生自A使用不同的限制性內(nèi)切核酸酶B每種類型的染色體有兩條二倍體C染色體中堿基的隨機變化DSOUTHERN印跡E不同探針的使用7DNA連接酶在體內(nèi)的主要作用是在DNA復(fù)制、修復(fù)中封閉缺口，A將雙鏈DNA分子中的5’磷酸基團同3’OH末端重新形成磷酸二酯鍵B作用時不消耗能量C需要MN2等二價輔助離子D也可以連接RNA分子8下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒RELAXEDPLAS性質(zhì)的描述中，是不正確的A質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)B可以在氯霉素作用下進行擴增C通常帶有抗藥性標記D同嚴緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子2有兩個系統(tǒng)發(fā)育上十分接近的物種，它們?nèi)旧w中的GC％含量不同，A株GC含量為55％而B株是68％。同源及異源轉(zhuǎn)化／重組實驗表明來自GC％低的DNA易于轉(zhuǎn)化人G／C％高的生物體／基因組中，反之則不然。請說明原因。3在RNA編輯中，向?qū)NAGRNA的作用是什么它的哪些部分分別與1編輯前MRNA；2編輯后的前體MRNA互補4雖然同源異型蛋白與鋅指蛋白差別很大，但是它們識別DNA序列的結(jié)構(gòu)元件相似的，這個元件是什么5被加工的假基因與其他假基因有哪些不同它是如何產(chǎn)生的6列出轉(zhuǎn)化病毒正鏈RNA摻人到宿主雙鏈DNA的詳細過程。7什么是增效與減效突變8在工業(yè)微生物菌種的選育中，人們喜歡用誘變的方法篩選解除了酶合成阻遏的突變株，而不要解除了酶活性反饋抑制的突變株。請解釋原因。9RECA蛋白是怎樣調(diào)節(jié)SOS反應(yīng)的10說明為什么MRNA僅占細胞RNA總量的一小部分3％～5％。五、設(shè)計與分析題（每題五、設(shè)計與分析題（每題5分，共計分，共計1010分）分）1有一個被認為是MRNA的核苷酸序列，長300個堿基，你怎樣才能1證明此RNA是MRNA而不是TRNA或RRNA。2確定它是真核還是原核MRNA。2ΛYES酵母大腸桿菌穿梭載體是構(gòu)建CDNA文庫的高效載體，這種載體是Λ噬菌體基因組與一個在大腸桿菌和酵母中都能復(fù)制的質(zhì)粒巧妙結(jié)合而成，它兼有病毒和質(zhì)粒載體的優(yōu)點。CDNA被插入載體的質(zhì)粒部分，然后它能在體外被包裝入病毒顆粒中，包裝起采的載體感染大腸桿菌的效率比質(zhì)粒本身要高得多。一旦進入了大腸桿菌，XYES中的質(zhì)粒序列能夠被誘導(dǎo)重組出入基因組，并進行獨立復(fù)制，這就可以從質(zhì)粒中分離出來，以便進行進一步的遺傳操作。為了最大限度地提高克隆效率，載體用只有一個切點的限制性內(nèi)切核酸酶XHOⅠ5C↓TCGAG進行切割，然后在DTTP存在的情況下，同DNA聚合酶一起進行溫育。將一種具有平末端的雙鏈CDNA同一段含由兩段寡聚核苷酸組成的雙鏈寡聚核苷酸接頭連接起來，這兩段寡聚核苷酸的序列是5，CGAGATTTACC和5’GGTAAATC，它們的5’端都是磷酸。然后將載體和CDNA混合并連接在一起。采用這種方法用2ΜG的載體和O1ΜG的CDNA，構(gòu)建了一個有4X107個克隆的CDNA文庫。問1假定載體長為43KB，CDNA的平均長度是LKB，請估計在連接混合物中，載體分子同CDNA的比例是多少2在此過程中，載體分子轉(zhuǎn)變成重組體的頻率是多少每對核苷酸的平均分子量是660DA3說明怎樣處理載體和CDNA分子，才能把它們連接到一起。處理過的載體本身能自連嗎CDNA呢4載體和CDNA分子要經(jīng)過怎樣的處理才能提高產(chǎn)生重組DNA分子的效率5能夠用XHOⅠ從重組質(zhì)粒中切出CDNA嗎六、問答題（六、問答題（1010分）分）用于克隆的DNA在質(zhì)量上有什么要求

簡介：分子生物學(xué)分子生物學(xué)分子生物學(xué)的基本含義分子生物學(xué)的基本含義P8P8分子生物學(xué)是研究核酸、蛋白質(zhì)等所有生物大分子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征及其重要分子生物學(xué)是研究核酸、蛋白質(zhì)等所有生物大分子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征及其重要性、規(guī)律性和相互關(guān)系的科學(xué)，是人類從分子水平上真正揭開生物世界的奧秘，性、規(guī)律性和相互關(guān)系的科學(xué)，是人類從分子水平上真正揭開生物世界的奧秘，由被動地適應(yīng)自然界轉(zhuǎn)向主動地改造和重組自然界的基礎(chǔ)學(xué)科。由被動地適應(yīng)自然界轉(zhuǎn)向主動地改造和重組自然界的基礎(chǔ)學(xué)科。分子生物學(xué)與其它學(xué)科的關(guān)系分子生物學(xué)與其它學(xué)科的關(guān)系分子生物學(xué)是由生物化學(xué)、生物物理學(xué)、遺傳學(xué)、微生物學(xué)、細胞學(xué)、以至信分子生物學(xué)是由生物化學(xué)、生物物理學(xué)、遺傳學(xué)、微生物學(xué)、細胞學(xué)、以至信息科學(xué)等多學(xué)科相互滲透、綜合融會而產(chǎn)生并發(fā)展起來的，凝聚了不同學(xué)科專息科學(xué)等多學(xué)科相互滲透、綜合融會而產(chǎn)生并發(fā)展起來的，凝聚了不同學(xué)科專長的科學(xué)家的共同努力。它雖產(chǎn)生于上述各個學(xué)科，但已形成它獨特的理論體長的科學(xué)家的共同努力。它雖產(chǎn)生于上述各個學(xué)科，但已形成它獨特的理論體系和研究手段，成為一個獨立的學(xué)科。系和研究手段，成為一個獨立的學(xué)科。生物化學(xué)與分子生物學(xué)關(guān)系最為密切生物化學(xué)與分子生物學(xué)關(guān)系最為密切生物化學(xué)是從化學(xué)角度研究生命現(xiàn)象的科學(xué)，它著重研究生物體內(nèi)各種生物分生物化學(xué)是從化學(xué)角度研究生命現(xiàn)象的科學(xué)，它著重研究生物體內(nèi)各種生物分子的結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)變與新陳代謝。傳統(tǒng)生物化學(xué)的中心內(nèi)容是代謝，包括糖、脂類、子的結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)變與新陳代謝。傳統(tǒng)生物化學(xué)的中心內(nèi)容是代謝，包括糖、脂類、氨基酸、核苷酸、以及能量代謝等與生理功能的聯(lián)系。氨基酸、核苷酸、以及能量代謝等與生理功能的聯(lián)系。分子生物學(xué)則著重闡明生命的本質(zhì)分子生物學(xué)則著重闡明生命的本質(zhì)主要研究生物大分子核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)主要研究生物大分子核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能、生命信息的傳遞和調(diào)控。構(gòu)與功能、生命信息的傳遞和調(diào)控。細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)關(guān)系也十分密切細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)關(guān)系也十分密切傳統(tǒng)的細胞生物學(xué)主要研究細胞和亞細胞器的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與功能。探討組成細傳統(tǒng)的細胞生物學(xué)主要研究細胞和亞細胞器的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與功能。探討組成細胞的分子結(jié)構(gòu)比單純觀察大體結(jié)構(gòu)能更加深入認識細胞的結(jié)構(gòu)與功能，因此現(xiàn)胞的分子結(jié)構(gòu)比單純觀察大體結(jié)構(gòu)能更加深入認識細胞的結(jié)構(gòu)與功能，因此現(xiàn)代細胞生物學(xué)的發(fā)展越來越多地應(yīng)用分子生物學(xué)的理論和方法。代細胞生物學(xué)的發(fā)展越來越多地應(yīng)用分子生物學(xué)的理論和方法。分子生物學(xué)則是從研究各個生物大分子的結(jié)構(gòu)入手，但各個分子不能孤立發(fā)揮分子生物學(xué)則是從研究各個生物大分子的結(jié)構(gòu)入手，但各個分子不能孤立發(fā)揮作用，生命絕非組成成分的隨意加和或混合，分子生物學(xué)還需要進一步研究各作用，生命絕非組成成分的隨意加和或混合，分子生物學(xué)還需要進一步研究各生物分子間的高層次組織和相互作用，尤其是細胞整體反應(yīng)的分子機理，這在生物分子間的高層次組織和相互作用，尤其是細胞整體反應(yīng)的分子機理，這在某種程度上是向細胞生物學(xué)的靠攏。某種程度上是向細胞生物學(xué)的靠攏。第一章序論第一章序論18591859年發(fā)表了年發(fā)表了物種起源物種起源，用事實證明，用事實證明“物競天擇，適者生存物競天擇，適者生存”的進化論思的進化論思想。想。指出物種的變異是由于大自然的環(huán)境和生物群體的生存競爭造成的，徹底否指出物種的變異是由于大自然的環(huán)境和生物群體的生存競爭造成的，徹底否定了定了“創(chuàng)世說創(chuàng)世說”。達爾文第一個認識到生物世界的不連續(xù)性。。達爾文第一個認識到生物世界的不連續(xù)性。意義達爾文關(guān)于生物進化的學(xué)說及其唯物主義的物種起源理論，是生物科學(xué)意義達爾文關(guān)于生物進化的學(xué)說及其唯物主義的物種起源理論，是生物科學(xué)史上最偉大的創(chuàng)舉之一，具有不可磨滅的貢獻。史上最偉大的創(chuàng)舉之一，具有不可磨滅的貢獻。DNADNA雙螺旋發(fā)現(xiàn)的意義雙螺旋發(fā)現(xiàn)的意義確立了核酸作為信息分子的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)；確立了核酸作為信息分子的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)；提出了堿基配對是核酸復(fù)制、遺傳信息傳遞的基本方式；提出了堿基配對是核酸復(fù)制、遺傳信息傳遞的基本方式；從而最后確定了核酸是遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，為認識核酸與蛋白質(zhì)的關(guān)系及其在生從而最后確定了核酸是遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，為認識核酸與蛋白質(zhì)的關(guān)系及其在生命中的作用打下了最重要的基礎(chǔ)。命中的作用打下了最重要的基礎(chǔ)。CRICKCRICK于19541954年所提出遺傳信息傳遞的中心法則（年所提出遺傳信息傳遞的中心法則（CENTRALCENTRALDOGMADOGMA））初步認識生命本質(zhì)并開始改造生命的深入發(fā)展階段（初步認識生命本質(zhì)并開始改造生命的深入發(fā)展階段（2020世紀世紀7070年代后至今）年代后至今）基因工程技術(shù)的出現(xiàn)作為標志。其間的重大成就包括基因工程技術(shù)的出現(xiàn)作為標志。其間的重大成就包括重組重組DNADNA技術(shù)的建立和發(fā)展技術(shù)的建立和發(fā)展基因組研究的發(fā)展基因組研究的發(fā)展單克隆抗體及基因工程抗體的建立和發(fā)展單克隆抗體及基因工程抗體的建立和發(fā)展基因表達調(diào)控機理基因表達調(diào)控機理細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機理研究成為新的前沿領(lǐng)域細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機理研究成為新的前沿領(lǐng)域第三節(jié)第三節(jié)分子生物學(xué)的主要研究內(nèi)容分子生物學(xué)的主要研究內(nèi)容一一DNADNA重組技術(shù)（重組技術(shù)（RECOMBINANTRECOMBINANTDNADNATECHNOLOGYTECHNOLOGY）定義又稱為基因工程，根據(jù)分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的原理，將一種生物的遺傳定義又稱為基因工程，根據(jù)分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的原理，將一種生物的遺傳物質(zhì)物質(zhì)DNADNA轉(zhuǎn)移到另一生物體中，使后者獲得新的遺傳性狀或表達出所需要的產(chǎn)轉(zhuǎn)移到另一生物體中，使后者獲得新的遺傳性狀或表達出所需要的產(chǎn)物。物。DNADNA重組技術(shù)的應(yīng)用重組技術(shù)的應(yīng)用利用微生物基因工程生產(chǎn)重組基因工程藥物利用微生物基因工程生產(chǎn)重組基因工程藥物轉(zhuǎn)基因植物和動物體細胞克隆轉(zhuǎn)基因植物和動物體細胞克隆基因表達與調(diào)控的基礎(chǔ)研究基因表達與調(diào)控的基礎(chǔ)研究二生物大分子的結(jié)構(gòu)功能研究二生物大分子的結(jié)構(gòu)功能研究三基因組、功能基因組與生物信息學(xué)的研究三基因組、功能基因組與生物信息學(xué)的研究

簡介：11（1）說明基因組的大小和基因組復(fù)雜性的含義基因組的大小指在基因組中DNA的總量基因組復(fù)雜性指基因組中所有單一序列的總長度（2）這個基因組的大小怎樣4000BP（3）這個基因組的復(fù)雜性如何450BP2試比較原核生物與真核生物的翻譯原核生物與真核生物的翻譯比較如下僅述真核生物的，原核生物與此相反。①起始MET不需甲?；跓oSD序列，但需要一個掃描過程③TRNA先于MRNA與核糖體小亞基結(jié)合④起始因子比較多⑤只一個終止釋放因子3試比較真核生物與原核生物MRNA轉(zhuǎn)錄的主要區(qū)別原核生物操縱子RNA聚合酶核心酶加Δ因子不需加工與翻譯相偶聯(lián)類核真核生物單基因RNA聚合酶Ⅱ聚合酶加轉(zhuǎn)錄因子需加工故與翻譯相分離核內(nèi)4激活蛋白（CAP）對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用環(huán)腺苷酸（CAMP）受體蛋白CRP，CAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP。當大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（LAC）等啟動子的功能。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。CAP的存在（功能）能顯著提高酶與啟動子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面①CAP通過改變啟動子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向，以便與10區(qū)結(jié)合，起到取代35區(qū)功能的作用。②CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點的結(jié)合，從而提高與其特定啟動子結(jié)合的概率。5原核生物與真核生物啟動子的主要差別原核生物TTGACATATAAT起始位點3510真核生物增強子GCCAATTATAA5MGPP起始位點11070256比較DNA復(fù)制和RNA轉(zhuǎn)錄的異同相同點DNA復(fù)制和RNA轉(zhuǎn)錄在原理上是基本一致的，體現(xiàn)在①這兩種合成的直接前提是核苷三磷酸，從它的一個焦磷酸鍵獲得能量促使反應(yīng)走向合成②兩種合成都是一個酶為四種核苷酸工作③兩種合成都是以DNA為模板④合成前都必須將雙鏈DNA解旋成單鏈⑤合成的方向都是537假設(shè)從一種生物抽提了核酸，你將用什么簡便的方法，區(qū)別它是DNA或RNA是單股或雙股我們可用紫外分光光度計對抽提的核酸進行鑒定。因為不同的核苷酸有不同的吸收特性，純品DNA在260NM與280NM的OD值之比為18，純DNA應(yīng)為20。根據(jù)OD值之比即可判斷是DNA還是RNA。3部富含GC堿基對，且緊接一串富含U的柄LOOP結(jié)構(gòu)；而依賴于P因子的終止子通過P因子與Β亞基的作用，促使轉(zhuǎn)錄終止。真核生物三類RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄終止子可能都需要富含AT的序列；幾乎所有的真核MRNA的5’端都有帽子結(jié)構(gòu)，3’端具有多聚A尾部。14試述蛋白質(zhì)合成步驟大腸桿菌為例（1）氨基酸的活化游離的氨基酸必須講過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成，由氨酰TRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰TRNA；（2）肽鏈合成的起始由起始因子參與，MRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始加酰甲硫氨酸TRNA（FMETTRNAT）形成70S起始復(fù)合物，整個過程需GTP水解提供能量；（3）肽鏈的延長起始復(fù)合物形成后肽鏈即開始延長。首先氨酰TRNA結(jié)合到核糖體的A位，然后，由氨酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽?；纬呻逆I，TRNA或空載TRNA仍留在P位，最后核糖體沿MRNA5’3’方向移動一個密碼子距離，A位上的延長一個氨基酸單位的肽酰TRNA轉(zhuǎn)移到P位，全過程需要延伸因子EFTU、EFTS，能量由GTP提供；（4）肽鏈合成終止當核糖體移至終止密碼UAA、UAG、UGA時，終止因子RF1、RF2識別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰TRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。15參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些它們具有什么功能（1）MRNA蛋白質(zhì)合成的模板（2）TRNA蛋白質(zhì)合成的氨基酸運載工具（3）核糖體蛋白質(zhì)合成的場所（4）輔助因子①起始因子參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成②延長因子肽鏈的延伸作用③釋放因子終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。16分別說出5種以上RNA的功能（1）轉(zhuǎn)運RNA（TRNA）轉(zhuǎn)運氨基酸（2）核糖體RNA（RRNA）核糖體組成（3）信使RNA（MRNA）蛋白質(zhì)合成模板（4）小核RNA（SNRNA）參與HNRNA的剪接（5）反義RNA（MICRNA）對基因的表達起調(diào)節(jié)作用（6）核酶有酶活性的RNA17簡述乳糖操縱子的正負調(diào)控機制（1）阻遏蛋白的負調(diào)控①當細胞內(nèi)有誘導(dǎo)物時，誘導(dǎo)物結(jié)合阻遏蛋白，此刻聚合酶與啟動子形成開放式啟動子復(fù)合物轉(zhuǎn)錄乳糖操縱子結(jié)構(gòu)基因②當無誘導(dǎo)物時，阻遏蛋白結(jié)合與啟動子與蛋白質(zhì)部分重疊不轉(zhuǎn)錄（2）CAP正調(diào)控①當細胞內(nèi)缺少葡萄糖時ATPCAMP結(jié)合，CRP生成CAP與CAP位點結(jié)合，增前RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄活性。②當有葡萄糖存在時CAMP分解多合成少，CAP不與啟動子上的CAP位點結(jié)合RNA聚合酶不與操縱區(qū)結(jié)合無法起始轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)基因表達下降。18簡述轉(zhuǎn)錄的基本過程模板的識別，轉(zhuǎn)錄起始，通過啟動子，轉(zhuǎn)錄的延伸和終止。

簡介：奧鵬17春16秋福師分子生物學(xué)在線作業(yè)二一、單選題（共15道試題，共30分。）1起始因子IF3的功能是A如果同40S亞基結(jié)合，將促進40S與60S亞基的結(jié)合；B如果同30S亞基結(jié)合，將防止30S與50S亞基的結(jié)合；C如果同30S亞基結(jié)合，促使30S亞基的16SRRNA與MRNA的SD序列相互作用；D指導(dǎo)起始況NA進入30S亞基中與MRNA結(jié)合的P位點；E激活核糖體的GTP酶，以催化與亞基相連的GTP的水解正確答案2在O連接寡聚糖中，直接同多肽相連的糖基是A甘露糖；BN乙酰葡糖胺；CC半乳糖或N乙酰半乳糖胺；D半乳糖或N乙酰葡萄糖胺；E葡萄糖正確答案3下列哪個些情況能解釋為什么一些基因在它們的轉(zhuǎn)錄因子存在時并不總是處于活性狀態(tài)A轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的鄰近序列；B有其他蛋白的結(jié)合；C轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)狀態(tài)；D缺少共激活蛋白；E以上都是正確答案4選出所有有關(guān)SNRNA的正確敘述ASNRNA只位于細胞核中；B大多數(shù)SNRNA是高豐度的；CSNRNA在進化的過程中是高度保守的；D某些SNRNA可以與內(nèi)含子中的保守序列進行堿基配對；E以上都正確正確答案5真核生物復(fù)制子有下列特征，它們A比原核生物復(fù)制子短得多，因為有末端序列的存在；B比原核生物復(fù)制子長得多，因為有較大的基因組；C通常是雙向復(fù)制且能融合；D全部立即啟動，以確保染色體在S期完成復(fù)制；E不是全部立即啟動，在任何給定的時間只有大約15％是有活性的BTRNA離開原核生物核糖體的位點；C核糖體中受ECI限制的位點；D電化學(xué)電勢驅(qū)動轉(zhuǎn)運的位點正確答案13假基因是由于不均等交換后，其中一個拷貝失活導(dǎo)致的。選出下面關(guān)于此過程的正確敘述。A失活點可通過比較沉默位點變化的數(shù)量和置換位點變化的數(shù)量采確定；B如果假基因是在基因復(fù)制后立即失活，則它在置換位點比沉默位點有更多的變；C如果假基因是在基因復(fù)制后經(jīng)過相當長一段時間才失活，則它在置換位點與沉默位點有相同數(shù)量的變化正確答案14正常情況下，同乙?；鞍踪|(zhì)氨基末端的甘氨酸相連的脂肪酸是A軟脂酸；B油酸；C十四酸鹽肉豆蔻酸鹽；D乙?；籈以上都對正確答案15TRNA參與的反應(yīng)有A轉(zhuǎn)錄；B反轉(zhuǎn)錄；C翻譯；D前體MRNA的剪接；E復(fù)制正確答案福師分子生物學(xué)在線作業(yè)二二、多選題（共20道試題，共40分。）1I型內(nèi)含子能利用多種形式的鳥嘌吟，如AGMP；BGDP；CGTP；DDGDP；EDDGMP2’，3’–雙脫氧GMP正確答案2HO基因是交配型轉(zhuǎn)換所必需的，它A編碼一個位點特異的DNA內(nèi)切核酸酶；

簡介：實驗項目一總RNA的提?。ū刈觯┮弧嶒瀸W(xué)時6學(xué)時二、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗學(xué)習(xí)總RNA的提取和分析方法。三、實驗內(nèi)容利用勻漿裂解細胞，采用TRILZOL試劑盒抽提RNA去除蛋白質(zhì)和DNA。四、實驗要求學(xué)會提取基因組RNA的方法和操作過程提取RNA時，要特別注意防止RNASE的污染，所用玻璃器皿均應(yīng)用01％的二乙基焦碳酸鹽DIETHYLPYROCARBONATE，DEPC處理。塑料器材均使用一次性用品，并高壓滅菌處理，必要時，也可用01?PC處理。五、實驗所需儀器設(shè)備與試劑儀器移液器及吸頭，電泳儀臺式高速離心機恒溫水浴鍋微量移液槍等試劑TRIZOL試劑、氯仿、異丙醇、75乙醇（DEPCH2O配制）、DEPCH2O六、實驗原理TRIZOL試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。最大特點是可同時分離一個樣品的RNADNA蛋白質(zhì)TRIZOL使樣品勻漿化，細14去上清夜，加入2030ULDEPC水，55℃10MIN，以完全溶解RNA。1570度保存提取的總RNA。八、注意事項1RNA酶是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶類，除了細胞內(nèi)源RNA酶外，外界環(huán)境中均存在RNA酶，所以操作時應(yīng)戴手套。2RNA提取用品準備1）普通的玻璃器皿180℃烘干8小時（玻璃），研缽，小勺，試劑瓶若干個。2）一次性使用的塑料制品槍頭、EP管等先用DEPC水處理然后高壓滅菌，烘干。3）用烘烤過的藥勺稱取試劑。4）用DEPC水配制試劑01?PC水37℃至少處理12小時，高壓滅菌15MIN。實驗結(jié)果成功從植物中分離得到總RNA

簡介：DNA自動測序核酸分子雜交,RNA抽提純化和逆轉(zhuǎn)錄PCR,載體與片段連接、感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化,細胞培養(yǎng)及細胞轉(zhuǎn)染,分子生物學(xué)實驗培訓(xùn)總結(jié),質(zhì)粒抽提和酶切鑒定,,,重組DNA鑒定,,目的蛋白的表達及功能的研究,獲得目的基因,,,DNA重組,遺傳的中心法則,1958年CRICK提出以DNA為中心的遺傳信息的傳遞規(guī)律，即DNA貯存的遺傳信息通過復(fù)制傳給子代DNA，通過轉(zhuǎn)錄傳給RNA，再通過翻譯傳給蛋白質(zhì)。遺傳信息傳遞方向的這個規(guī)律被稱為～。,DNA,,RNA,,,,蛋白質(zhì),復(fù)制,復(fù)制,轉(zhuǎn)錄,翻譯,,反轉(zhuǎn)錄,1970年TEMIN和BALTIMORE發(fā)現(xiàn)RNA病毒的RNA可通過反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）將遺傳信息傳給CDNA，也可通過RNA復(fù)制或RNA轉(zhuǎn)錄傳給子代RNA，這是對中心法則的補充。1997年瘋牛病和朊病毒的出現(xiàn)，預(yù)示蛋白質(zhì)也可逆向?qū)⑦z傳信息向DNA傳遞。,,,DNA的結(jié)構(gòu)及功能,DNA分子是由兩條反向平行的脫氧核苷酸長鏈盤繞而成的。DNA分子中的脫氧核糖和磷酸交替連接，排在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架，堿基排在內(nèi)側(cè)。兩條鏈的堿基通過氫鍵連接形成堿基對，其中A與T配對，G與C配對。兩個相鄰脫氧核苷酸通過3’5’磷酸二酯鍵連接。起著貯存和傳遞遺傳信息的作用。,RNA的種類CATEGORY,轉(zhuǎn)運核糖核酸TRANSFERRNA,TRNA核蛋白體核糖核酸RIBOSOMERNA,RRNA信使核糖核酸MESSENGERRNA,MRNA,轉(zhuǎn)運氨基酸與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白體,起裝配機的作用翻譯蛋白質(zhì)的模板,RNA的功能FUNCTION,MRNA的生物合成MRNABIOSYNTHESIS,真核生物的結(jié)構(gòu)基因由內(nèi)含子和外顯子組成，內(nèi)含子的序列較長，且不編碼蛋白質(zhì)。真核生物DNA在轉(zhuǎn)錄過程中經(jīng)剪接可將內(nèi)含子部分去除，獲得成熟的MRNA。由于分子生物學(xué)研究的最終產(chǎn)物常常是蛋白質(zhì)，因此我們需要獲得可翻譯的MRNA。MRNA易降解，不易長期保存。將MRNA逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，利用CDNA來研究基因的功能。,TRIZOL提取RNA原理,TRIZOL法提取細胞總RNA是目前常用的提取方法。細胞內(nèi)大部分的RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，以核蛋白形式存在。TRIZOL內(nèi)含異硫氰酸胍和苯酚等物質(zhì)。異硫氫酸胍GUSCN是一種強的蛋白質(zhì)變性劑，不僅能使細胞裂解，同時還能有效地抑制細胞內(nèi)源性RNA酶的活性。通過有機溶劑的分步抽提，最終可獲得純度較高的細胞總RNA。,RNA提取注意事項,TRIZOL試劑含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。如皮膚接觸TRIZOL，請立即用大量水沖洗。RNASE污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注意隨時勤換手套，樣品盡可能蓋嚴；盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話。用001的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低最后得率，因為一部分RNA會殘留在未裂解的細胞中。在清洗和裂解細胞時最好在低溫下操作，防止在操作過程中釋放的內(nèi)源RNASE降解了RNA。,逆轉(zhuǎn)錄REVERSETRANSCRIPTION,逆轉(zhuǎn)錄指遺傳信息從RNA流向DNA，是RNA指導(dǎo)下的DNA合成過程，即以RNA為模板，四種DNTP為原料，合成與RNA互補的DNA單鏈，稱為互補DNACOMPLEMENTARYDNA,CDNA,逆轉(zhuǎn)錄原理,CDNA合成有兩個關(guān)鍵因素，一是病毒RNA的質(zhì)量，二是逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄酶是一種多功能酶，它能在一定的條件下，以單鏈RNA為模板合成第一條CDNA鏈。通過RNASEH活性水解RNADNA雜合分子中的RNA鏈。,逆轉(zhuǎn)錄酶REVERSETRANSCRIPTASE,催化逆轉(zhuǎn)錄過程的酶稱逆轉(zhuǎn)錄酶，RNA病毒中都含有此酶。具有三種酶活性RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶RNA水解酶活性DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶,,逆轉(zhuǎn)錄體系,RNA模板3’UUAGGCCUGGAUAAGCGCCUGGA5’,引物5’ATCCGGAC,,逆轉(zhuǎn)錄酶,DATP,DGTP,DCTP,DTTP,,MN2,,,酶活性依賴金屬離子,,,,,,底物,逆轉(zhuǎn)錄過程中CDNA的合成,逆轉(zhuǎn)錄引物的選擇PRIMER,OLIGODT1218個核苷酸組成），只有MRNA被逆轉(zhuǎn)錄隨機六聚寡核苷酸，所有RNA均被逆轉(zhuǎn)錄基因特異性引物，僅產(chǎn)生需要的DNA,逆轉(zhuǎn)錄的生物學(xué)意義,擴充了中心法則有助于對病毒致癌機制的了解與真核細胞分裂和胚胎發(fā)育有關(guān)逆轉(zhuǎn)錄酶是分子生物學(xué)重要工具酶,以DNA為模板，利用DNA聚合酶的特性體外擴增特定的基因片斷，這種方法被稱為DNA聚合酶鏈式反應(yīng)。,,,,PCR基因放大連瑣反應(yīng),聚合酶鏈反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTION,PCR,PCR基本原理,利用高溫可使DNA變性和低溫可使DNA復(fù)性的特性，根據(jù)體內(nèi)細胞分裂中DNA半保留復(fù)制機理，以特異性寡核苷酸為引物，DNA分子為模板，在DNA聚合酶和四種脫氧核苷酸存在的條件下體外合成新DNA分子的過程。這種熱變性復(fù)性延伸的過程就是一個PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。,PCR技術(shù)的特點,高度的敏感性高度的特異性操作簡便、快速適用樣品的廣泛性,PCR基本成分,TEMPLATEPRIMERSTAQPOLYMERASE10PCRBUFFERDNTPSMG,PCRPRIMERS,WWWNCBINLMNIHGOV,PCRPRIMERS,序列發(fā)現(xiàn)的時間和發(fā)現(xiàn)者序列的生物體來源序列的組織來源,引物設(shè)計PRIMERDESIGN,引物長度（LENGTH）20～30BP引物中四種堿基的分布應(yīng)該是隨機的兩引物間不能有互補序列，尤其是3‘端引物的堿基順序不應(yīng)與非擴增區(qū)域由同源性引物的3’末端堿基一定要與模板DNA配對可以在5’末端加上限制性內(nèi)切酶位點或起始密碼解鏈溫度TM兩引物間相差不大于5℃引物內(nèi)部不能有大于3BP的反向重復(fù)序列或自身互補序列存在,PCR基本程序,預(yù)變性（PREDENATURATION變性DENATURATION退火ANNEALING延伸ELONGATION2530CYCLES,DOUBLESTRANDEDDNATEMPLATE,DOUBLESTRANDEDDNATEMPLATE,,,DESIGNPRIMERSWITHTHISSEQUENCEINFORMATION,PCRCYCLE1,DOUBLESTRANDEDDNATEMPLATE,,,PRIMERS,TAQ,TAQ,PCRCYCLE1,DENATURATION950CSTRANDSSEPARATE,,,PRIMERS,TAQ,TAQ,TAQPOLYMERASEISTHERMOSTABLE,,,,,3’,5’,5’,3’,PCRCYCLE1,ANNEALING550CPRIMERSBIND,TAQ,TAQ,,,,,3’,5’,5’,3’,PCRCYCLE1,ANNEALING550CTAQBINDSTODUPLEX,TAQ,TAQ,,,,3’,5’,5’,3’,,,PCRCYCLE1,EXTENSION72OCTAQCOPIESDNASTRANDDNTPS,TAQ,TAQ,TAQSYNTHESISESDNAINTHE5’TO3’DIRECTION,,,,3’,5’,5’,3’,,,,PCRCYCLE1,EXTENSION72OCTAQCOPIESDNASTRAND,TAQ,TAQ,TAQSYNTHESISESDNAINTHE5’TO3’DIRECTION,,,,3’,5’,5’,3’,,,,,,PCRCYCLE1,EXTENSION72OCTAQCOPIESDNASTRAND,TAQ,TAQ,TAQSYNTHESISESDNAINTHE5’TO3’DIRECTION,,,3’,5’,5’,3’,5’,3’,,5’,3’,PCRCYCLE1,ENDCYCLE1,,PCRANIMATION,PCR反應(yīng),取無菌0?2MLPCR管一支，加入10?PCR緩沖液5ΜL氯化鎂4ΜL4種ＤNTP混合液10MMOL/L0?5ΜL3?端引物10ΜMOL/L1ΜL5?端引物10ΜMOL/L1ΜLTAQDNA多聚酶5U/ΜL0?25ΜL三蒸水33?25ΜL模板CDNA5ΜL蓋緊蓋子，離心數(shù)秒后置PCR儀上進行擴增。PCR循環(huán)為95℃預(yù)變性2MIN，95℃變性30S、55℃復(fù)性30S、72℃延伸1MIN，30個循環(huán)，最后72?C延伸7MIN。,細胞裂解,RNA釋放,CDNA,PCR擴增,逆轉(zhuǎn)錄酶,耐熱DNA聚合酶,,RTPCR擴增,,,,,,,,,,,,,,,,,引物DNTPS二價金屬離子DNA聚合酶,引物DNTPS二價金屬離子逆轉(zhuǎn)錄酶,RTPCR過程,逆轉(zhuǎn)錄酶/耐熱DNA聚合酶,RTPCR的應(yīng)用APPLICATION,獲得基因完整編碼區(qū)序列檢測基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物半定量比較不同樣品間MRNA水平制備用于雜交的CDNA探針,PCR技術(shù)在臨床應(yīng)用中的問題和對策,在我國，前一個時期PCR應(yīng)用相當混亂。從技術(shù)因素分析，常規(guī)PCR作為臨床檢驗技術(shù)存在的最主要的問題是，擴增產(chǎn)物污染帶來的假陽性。常規(guī)PCR只能定性不能定量，也影響了評價PCR檢測結(jié)果的臨床診斷意義。定量是PCR作為臨床檢驗技術(shù)發(fā)展的另一個重要目標。,瓊脂糖凝膠電泳基本原理,瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖作為固體支持物的一種電泳方法。因為各種核酸分子的電荷及質(zhì)量之比是相近的，在沒有支持物的電場中，它們以相同的速度前進。瓊脂糖凝膠電泳具有分子篩效應(yīng)，所以在適當濃度的瓊脂糖凝膠中電泳，線性DNA分子在電場中的遷移率與其分子量的對數(shù)成反比，從而達到分離的目的。,瓊脂糖凝膠電泳（AGAROSEGELELECTROPHORESIS）分離的原理,使TAE浸過凝膠表面在陰極的加樣孔加樣（紅正黑負）分子篩作用分子量越小，遷移速度越快,瓊脂糖凝膠的濃度與DNA分離范圍SEPARATIONRANGEVSAGAROSE,瓊脂糖凝膠濃度與分離效率,,,大片段在07瓊脂糖凝膠中分離效果好,小片段在15瓊脂糖凝膠中分離效果好,上樣,上樣緩沖液甘油可增加樣品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)在電泳中形成肉眼可見的指示帶，可預(yù)測核酸電泳的速度和位置使樣品呈色，使加樣操作更方便EDTA,SDS可滅活限制性內(nèi)切酶,溴化乙錠EB染色,EB堆砌在DNA雙螺旋的堿基對之間,DNA分子越小,結(jié)合的EB越少,染色越淡,溴化乙錠是一種熒光染料,可嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光，常用05MG/ML,,,,注意事項,一定要等凝膠冷卻至60℃時再入加溴化乙錠切記DNA樣品由負極往正極泳動靠近加樣孔的一端為負加完樣品后最好先觀察一段時間插電極或拔電極時必須將儀器電源關(guān)掉不要使樣品跑出凝膠,瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)用,PCR產(chǎn)物鑒定酶切片段鑒定DNA片段回收DNA的定量,分子克隆MOLECULARCLONING基因工程的核心,克隆克隆是指通過無性繁殖過程所產(chǎn)生的與親代完全相同的子代群體,分子克隆,細胞克隆,動物克隆,基因工程中所指的克隆，是在體外對DNA分子按照既定目的和方案進行人工重組，將重組分子導(dǎo)入合適細胞，使其在細胞中擴增和繁殖，以獲得該DNA分子得大量拷貝。這類克隆是在分子水平上操作的，故稱為分子克隆。又被稱為基因克隆或DNA克隆。,分子克隆中常用的工具酶,限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶DNA聚合酶末端轉(zhuǎn)移酶逆轉(zhuǎn)錄酶堿性磷酸酶核酸外切酶,基因克隆的基本程序,外源基因或目的基因的獲得載體的構(gòu)建或選擇連接轉(zhuǎn)化陽性重組體的篩選與鑒定,目的基因,目的基因是指我們所要研究和應(yīng)用的基因，也就是我們將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中的第一步。體外擴增基因法PCRANDRTPCR人工合成基因法限制性內(nèi)切酶直接分離法獲得基因文庫篩選法從CDNA文庫中篩選,RTPCR,RNA提取RTPCR,EXTRACTRNAFROMVIRUS/CELLS,RNA,載體VECTOR,載體是指能夠攜帶外源基因轉(zhuǎn)入受體細胞內(nèi)進行擴增或誘導(dǎo)外源基因在受體細胞內(nèi)表達的工具。,載體應(yīng)具備的條件,帶有復(fù)制子多克隆酶切位點篩選標志完整的轉(zhuǎn)錄單位（表達型載體）,載體的分類,按功能分類克隆載體和表達載體按受體細胞分類原核細胞載體和真核細胞載體按載體來源分類質(zhì)粒載體、嗜菌體、病毒、酵母人工染色體、粘粒,PGEMTEASYVECTOR,綠色熒光蛋白載體,酶切載體和目的基因ENZYMERESTRICTIONDIGESTOFDNAPLASMIDVECTORANDTARGETGENE）,目的基因與載體的連接（LIGATION）,利用DNA連接酶把載體DNA和要克隆的目的DNA片段連接在一起，成為一個完整的重組分子，被稱為連接反應(yīng)。,DNA連接酶DNALIGASE,催化兩個獨立的DNA片段5‘磷酸基團和3’羥基基團之間形成磷酸二酯鍵。,連接方法,粘性末端連接法單酶連、雙酶連平齊末端連接法同聚物接尾法人工接頭法PCR產(chǎn)物與載體的連接限制性酶切位點添加法、T/A克隆法,單一酶切的粘性末端連接缺點,載體自連載體DNA兩端的粘性末端可以自身退火成環(huán)，產(chǎn)生載體載體相連接的假陽性克隆。雙向插入由于使用同一種內(nèi)切酶，載體與插入片段的4個末端全為相同的粘性互補順序，所以目的基因插入可以有兩個方向。,,,BAMHⅠ切割反應(yīng),T4DNA連接酶15oC,,,同一限制酶切位點連接,不同限制酶切位點的連接（雙酶連）,ECORⅠ切割位點,BGLⅡ切割位點,平端連接,適用于限制性內(nèi)切酶切割產(chǎn)生的平端粘端補齊或切平形成的平端,同聚物加尾連接,在末端轉(zhuǎn)移酶TERMINALTRANSFERASE的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進行粘端連接。,人工接頭LINKER連接,在平端加上酶切位點，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進行粘端連接。,T/A克隆法,利用含有單個胸腺嘧啶（T）3‘突出末端的線性化載體與帶有單個腺苷酸（A）3‘突出末端的PCR產(chǎn)物來進行克隆，這種方法被稱為T/A克隆法。此方法利用了TAQDNA聚合酶具有延伸酶的活性，即不依賴模板的方式將一個核苷酸添加到已完成延伸的PCR產(chǎn)物的3‘末端。在四種核苷酸都存在的情況下，這個添加上去的核苷酸通常是A殘基。,重組分子導(dǎo)入受體細胞,外源DNA分子與載體組成重組分子后，需要導(dǎo)入受體細胞才能進行繁殖和表達，受體細胞系指被導(dǎo)入重組分子的細胞，又稱宿主細胞。根據(jù)導(dǎo)入受體細胞的方式不同，可分為轉(zhuǎn)化（TRANSFORMATION）將重組DNA分子導(dǎo)入原核細胞的過程轉(zhuǎn)染（TRANSFECTION）將重組DNA分子導(dǎo)入真核細胞的過程感染（INFECTION）噬菌體進入宿主細菌，病毒進入宿主細胞中繁殖的過程,轉(zhuǎn)化過程,制備感受態(tài)細胞（COMPETENTCELL）用物理或化學(xué)方法處理細胞，使其處于最適攝取和容忍外來DNA的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。將重組DNA分子和感受態(tài)細胞相混合，使DNA分子進入大腸桿菌細胞中。轉(zhuǎn)化細胞在含有抗生素的瓊脂平板上生長,氯化鈣法原理,細菌處于0℃氯化鈣低滲溶液中，細胞膨脹成球形。轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基鳥磷酸復(fù)合物粘附于細胞表面，經(jīng)42℃短時間熱休克處理，促進細胞吸收DNA復(fù)合物。在培養(yǎng)基上生長數(shù)小時后，球狀細胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細菌中，重組基因得到表達，在選擇性培養(yǎng)基平板上可篩選出所需的轉(zhuǎn)化子。,氯化鈣法CHEMICALTRANSFORMATIONWITHCALCIUMCHLORIDE,CACL2方法的轉(zhuǎn)化效率一般可達106107轉(zhuǎn)化子/ΜGDNA。關(guān)鍵是1使用對數(shù)生長期的細菌2低溫操作3手法溫柔優(yōu)點簡單、穩(wěn)定、可重復(fù)性高。缺點轉(zhuǎn)化效率稍低，而且不能轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒＞15KB,電轉(zhuǎn)法TRANSFORMATIONBYELECTROPORATION,重組DNA的篩選與鑒定,抗藥性篩選法藍白篩選法DNA限制性內(nèi)切酶圖譜分析DNA序列測定法核酸雜交法PCR法,抗生素篩選轉(zhuǎn)化結(jié)果,GROWTHONAGARPLATESAMPXGALANDSELECTIONFORANTIBIOTICRESISTANTCOLONIES,,重組DNA技術(shù)操作過程可形象歸納為,小結(jié),重組DNA技術(shù)操作的主要步驟,克隆常見問題,轉(zhuǎn)化后無克隆產(chǎn)生白色菌落很少或者根本沒有實驗組只有白色菌落白色菌落中陽性克隆率低,重組DNA的應(yīng)用,克隆基因的表達探針標記基因組序列分析基因的定點突變基因打靶技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù),質(zhì)粒提取及酶切鑒定,實驗?zāi)康募氨尘?質(zhì)粒是獨立于細菌染色體外的DNA分子，大小可為1KB到200KB。大多數(shù)來自細菌的質(zhì)粒是雙鏈、共價閉合環(huán)狀的分子，以超螺旋形式存在。它是細菌內(nèi)的共生型遺傳因子。其復(fù)制和遺傳獨立于細菌染色體，但復(fù)制和轉(zhuǎn)錄依賴于宿主編碼的蛋白和酶。,PLASMID,CHROMOSOME,質(zhì)粒類型,質(zhì)粒按復(fù)制方式分為兩種類型松弛型質(zhì)粒和嚴緊型質(zhì)粒1松弛型質(zhì)粒RELAXEDPLASMID松弛型質(zhì)粒的復(fù)制不需要質(zhì)粒編碼的功能蛋白，完全依賴于宿主提供的半衰期較長的酶。即使蛋白質(zhì)合成受抑制，質(zhì)粒的復(fù)制依然進行。2嚴緊型質(zhì)粒STRINGENTPLASMID嚴緊型質(zhì)粒復(fù)制需要一個質(zhì)粒編碼的蛋白，質(zhì)粒的拷貝數(shù)不能通過用氯霉素等蛋白合成抑制劑來增加。按功能分為3類F質(zhì)粒（即性質(zhì)粒）R質(zhì)粒（即抗藥性質(zhì)粒）COL質(zhì)粒（即大腸桿菌素因子）,質(zhì)粒DNA的一般性質(zhì),環(huán)狀超螺旋DNA分子質(zhì)?？梢赞D(zhuǎn)移質(zhì)粒的復(fù)制依賴宿主細胞的復(fù)制機器質(zhì)粒有相容性及不相容性質(zhì)粒能在細菌中垂直遺傳并且賦予宿主細胞一些表型，是比病毒更簡單的原始生命。,TARGETGENESCARRIEDBYPLASMID,1PLASMID1CELL,RECOMBINANTPLASMIDTRANSFORMATION,TARGETGENERECOMBINATION,RESTRICTIONENZYME,RESTRICTIONENZYME,CHROMOSOMALDNA,TARGETGENES,DNARECOMBINATION,TRANSFORMATION,HOSTCELLS,,,JUANGRH2004BCBASICS,質(zhì)粒的應(yīng)用,大多數(shù)基因工程使用松弛型質(zhì)粒。嚴緊型質(zhì)粒用來表達一些可使宿主細胞受毒害致死的基因。質(zhì)粒的特點使質(zhì)粒成為攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的重要媒介物，這種基因運載工具在基因工程中具有極廣泛的應(yīng)用價值。,質(zhì)粒載體PLASMIDVECTORS,是一獨立的復(fù)制子有篩選標記具有酶切位點或多克隆位點分子量小，拷貝數(shù)高測序、亞克隆、表達、可重復(fù)性高,分離質(zhì)粒DNA方法,從大腸桿菌中分離質(zhì)粒DNA方法眾多，目前常用的有堿變性法；煮沸法；SDS法；羥基磷灰石層析法等各方法分離是依據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成及結(jié)構(gòu)等特點加以選擇的，其中堿變性法既經(jīng)濟且收得率較高,提取的質(zhì)粒DNA可用于酶切,連接與轉(zhuǎn)化。,質(zhì)粒DNA提取的步驟,所有分離質(zhì)粒DNA的方法都包括3個基本步驟培養(yǎng)細菌使質(zhì)粒擴增；收集和裂解細菌；DNA分離質(zhì)粒DNA；,培養(yǎng)單克隆細胞,AMPLIFICATIONANDSCREENINGOFTARGETGENE,,,,,1,1CELLLINE,1COLONY,X100,X1,000,PLASMIDDUPLICATION,BACTERIADUPLICATION,PLATING,PICKTHECOLONYCONTAININGTARGETGENE,,100,000,,JUANGRH2004BCBASICS,堿變性法基本原理,在PH120126堿性環(huán)境中，線性的大分子量細菌染色體DNA變性，而共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA仍為自然狀態(tài)。將PH調(diào)至中性并有高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，大部分DNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍為可溶狀態(tài)，通過離心可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清中，再用酚氯仿抽提進一步純化質(zhì)粒DNA。,質(zhì)粒ＤＮＡ小量制備的問題與對策,質(zhì)粒DNA不能被限制酶所切割，這是由于從細菌沉淀或從核酸沉淀中去除所有上清液時注意得不夠。大多數(shù)情況下，用酚氯仿對溶液進行抽提可以去除小量備物中的雜質(zhì)。如果總是依然存在，可用離心柱層析注純化DNA。DNA在溶解前，有酒精殘留，酒精抑制后續(xù)酶解反應(yīng)。重新沉淀DNA，讓酒精充分揮發(fā)。DNA中殘留有金屬離子，可增加70乙醇洗滌的次數(shù)。出現(xiàn)無質(zhì)粒DNA的現(xiàn)象，這可能是由于細菌中無質(zhì)?；蚝怂岢恋眍w粒已同乙醇一起被棄去,重組質(zhì)粒的鑒定,瓊脂糖凝膠電泳限制性內(nèi)切酶酶切紫外分光光度計測定DNA自動測序核酸雜交法PCR法,質(zhì)粒的瓊脂糖凝膠電泳AGAROSEGELELECTROPHORESIS,在一定電場強度下，DNA分子的遷移取決于DNA分子本身的大小和構(gòu)型。相對分子質(zhì)量不同的DNA片段泳動速度不一樣。質(zhì)粒DNA的形態(tài)不一，電泳時在凝膠中的遷移率不同。因此，凝膠電泳不僅可分離不同相對分子質(zhì)量的DNA，也可以分離相對分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的DNA分子。超螺旋的質(zhì)粒DNA一般遷移最快、開環(huán)（缺口）質(zhì)粒DNA遷移最慢，線化DNA位于兩者之間。,質(zhì)粒的瓊脂糖凝膠電泳,限制性核酸內(nèi)切酶,1970年發(fā)現(xiàn)的，是一類能識別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定堿基順序的核酸水解酶。被稱為分子生物學(xué)的“手術(shù)刀”。有三種類型的限制性內(nèi)切酶，最常用的是Ⅱ型識別順序一般為46個堿基的回文結(jié)構(gòu)。如下,PALINDROME,RESTRICTIONENZYME,STICKYENDS,,,STICKYENDSCOHESIVEENDS,,ECORI,,JUANGRH2004BCBASICS,限制性內(nèi)切酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生3種不同的切口,平頭末端BLUNTEND5’端突出的粘性末端3’端突出的粘性末端,平頭末端BLUNTEND,在識別順序的對稱軸上，對雙鏈DNA同時切割，產(chǎn)生平頭末端BLUNTEND5’GGCC3’HAEⅢ5’GGCC3’3’CCGG5’3’CCGG5’,,,,5’端突出的粘性末端,在識別順序的兩個對稱點切開DNA雙鏈，產(chǎn)生帶單鏈尾巴的粘性末端,從5’端切割產(chǎn)生5’端突出的粘性末端5’GAATTC3’ECORⅠ5’GAATTC3’3’CTTAAG5’3’CTTAAG5’,,,,3’端突出的粘性末端,在識別順序的兩個對稱點切開DNA雙鏈，產(chǎn)生帶單鏈尾巴的粘性末端,從3’端切割產(chǎn)生3’端突出的粘性末端5’CTGCAG3’PSTⅠ5’CTGCAG3’3’GACGTC5’3’GACGTC5’,,,,用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒,質(zhì)粒4UL去離子水4UL10XBUFFER1ULECORⅠ05UL離心混合后，37℃1小時,酶切反應(yīng)注意事項,決不能用水稀釋,以免變性失活。預(yù)先加入除酶以外的所有其他試劑。取酶立即放于冰上。分裝小份避免反復(fù)凍融。使用無菌的新吸頭。少加水,使體積最小,但保證酶液體積不超過總體積的10％,否則酶液中的甘油會抑制酶活性。,限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用,改造及組建質(zhì)粒組建基因組DNA物理圖譜基因組DNA同源性研究DNA重組克隆及亞克隆DNA雜交與順序分析,測序技術(shù)進展同位素標記到熒光標記,平板電泳到毛細管電泳,多色熒光標記毛細管電泳,單色熒光標記平板電泳,同位素標記平板電泳,,A,C,G,T,,,,,,測序圖譜,TATTGCATTGTCTGCATTGTCT,,,,DIDEOXYNUCLEOTIDES,,PHOSPHODIESTERBOND,3’,5’,DIDEOXYNUCEOTIDE,TERMINATED,DDNTP,SANGER’SMETHODHOWTERMINATED,NORMALLINKING,CANNOTREACT,,JUANGRH2004BCBASICS,THEDDATPREACTION,5’TTATCG,3’AATAGCATGGTACTGATCTTACGCTAT5’,5’TTATCGTA,5’TTATCGTACCATGA,5’TTATCGTACCATGACTAGATGCGATA,5’TTATCGTACCATGACTAGA,DNA自動測序,DNA自動測序是在SANGER法的基礎(chǔ)上經(jīng)過加工改進的。將2‘,3’雙脫氧三磷酸核苷酸DDNTP用不同的熒光標記，如用紅色熒光標記DDTTP，藍色熒光標記DDCTP，黃色熒光標記

簡介：1生物化學(xué)與分子生物學(xué)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案生物化學(xué)與分子生物學(xué)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案（專業(yè)代碼071010）一、培養(yǎng)目標一、培養(yǎng)目標1、培養(yǎng)德智體全面發(fā)展，在本專業(yè)具有堅實的理論基礎(chǔ)和系統(tǒng)的專業(yè)知識，熟悉科學(xué)研究的基本環(huán)節(jié)，具有創(chuàng)新精神、創(chuàng)新能力和從事本專業(yè)教學(xué)和科學(xué)研究等工作能力的高層次專門人才，并為進一步深造打下基礎(chǔ)。2、具有嚴謹?shù)目茖W(xué)態(tài)度和敬業(yè)精神；注重知識、能力和綜合素質(zhì)的培養(yǎng)。3、掌握一門外語，有較強的聽說讀寫能力并能熟練地閱讀本專業(yè)的外文資料。4、身心健康。二、研究方向二、研究方向1腫瘤相關(guān)基因的表達調(diào)控及功能研究2腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制及治療靶點的結(jié)構(gòu)解析與藥物發(fā)現(xiàn)3神經(jīng)退行性疾病的分子病理機制及治療策略三、培養(yǎng)方式三、培養(yǎng)方式碩士研究生培養(yǎng)實行導(dǎo)師負責(zé)制，提倡實行導(dǎo)師負責(zé)和導(dǎo)師組指導(dǎo)相結(jié)合的培養(yǎng)方式。導(dǎo)師組由本專業(yè)及相關(guān)專業(yè)35名具有講師以上職稱人員組成。鼓勵“三種經(jīng)歷”，即社會實踐經(jīng)歷、第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷。研究生在第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷中取得的學(xué)分，與培養(yǎng)計劃內(nèi)必修課內(nèi)容及要求基本相同的，經(jīng)導(dǎo)師認定后，提交基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)位分委員會討論認定，可以作為必修課成績，取得相應(yīng)學(xué)分，培養(yǎng)計劃以外的課程可作為選修課學(xué)分認定。四、學(xué)習(xí)年限四、學(xué)習(xí)年限全日制碩士研究生學(xué)制3年。五、應(yīng)修總學(xué)與課程設(shè)置五、應(yīng)修總學(xué)與課程設(shè)置培養(yǎng)方案修訂培養(yǎng)方案修訂應(yīng)修總學(xué)分30，其中必修20學(xué)分（含培養(yǎng)環(huán)節(jié)學(xué)分）。1必修課（學(xué)位課）3國際學(xué)術(shù)會議做研究報告1學(xué)分次2討論班，1學(xué)分討論班指一定范圍內(nèi)的研究生在指導(dǎo)者的引導(dǎo)下圍繞特定主題進行研討，一般以研究方向或課題組為單位設(shè)立。討論班定期舉行，每期有明確的主題，要求研究生充分參與討論，展開學(xué)術(shù)爭鳴。討論班是一種極具研究強度的學(xué)習(xí)形式，旨在通過參與者的直接交流和思想碰撞，以開拓思維，激發(fā)創(chuàng)新，養(yǎng)成研究生獨立從事科學(xué)研究的能力；討論班同時也是一種學(xué)術(shù)指導(dǎo)形式，鼓勵導(dǎo)師或?qū)熃M依托討論班對研究生進行有效的學(xué)術(shù)指導(dǎo)。碩士研究生自第三學(xué)期，應(yīng)至少每兩周參加一次討論班。每次討論班應(yīng)有完整記錄。（主持人組織者簽字、參加人員名單、討論主題考核成績）3社會實踐，1學(xué)分碩士生應(yīng)參加生化與分子生物學(xué)相關(guān)專業(yè)本科或碩士生實驗教學(xué)工作，由系分管教學(xué)主任負責(zé)安排，學(xué)時在20－30學(xué)時之間。學(xué)系將對其教學(xué)能力、水平和質(zhì)量做出評估。4中期篩選碩士研究生實行中期篩選制度，具體按學(xué)校有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。中期篩選在第三學(xué)期完成，內(nèi)容包括思想表現(xiàn)、科研能力、論文設(shè)計與準備及身體健康狀況等?？己撕细裾哌M入碩士論文研究與寫作階段；考核不合格者，按學(xué)校有關(guān)規(guī)定處理。七、科學(xué)研究與學(xué)位論文七、科學(xué)研究與學(xué)位論文1科研時間碩士研究生從事科學(xué)研究或?qū)W位論文工作的時間不少于一年半。2、開題報告開題時間為第二學(xué)期。開題前必須完成對不少于30篇相關(guān)文獻的綜述，由導(dǎo)師組3位及以上成員進行審核，并給出評定、備案。開題報告必須在本學(xué)科或相關(guān)學(xué)科范圍內(nèi)公開進行，由學(xué)科負責(zé)人或?qū)煟ㄖ笇?dǎo)小組負責(zé)人）組織3～5名相關(guān)學(xué)科專家對開題報告進行評議。開題報告內(nèi)容包括選題的目的、依據(jù)，目前國內(nèi)外進展的狀況，研究的基本內(nèi)容，采用的方法與手段，預(yù)期達到的水平，科研的條件，可能出現(xiàn)的問題及解決的方法，進度安排，與本課題有關(guān)的工作積累、已有的研究工作成績；經(jīng)費預(yù)算等。開題委員會專家對上述匯報給予評議，開題報告要求有文字記錄備案。