黃瓜枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)生物膜的形成及相關(guān)基因功能分析

1、分類號(hào)墨箜2 ：!U D C 密級(jí)』＼年 編號(hào)——博士學(xué)位論文黃瓜枯萎病菌( F u s a r i u m o x y s p o r u m f ．s p ．c u c u m e r i n u m ) 生物膜的形成及相關(guān)基論文答辯日期因功能分析李培謙2 0 1 5 ．0 礁L 學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席 處亡主汕沙、6 、≥。黃瓜枯萎病菌( F u s a r i u m o x y s p o r u m ￡s p ．c u

2、c u m e r i n u m ) 生物膜的形成及相關(guān)基因功能分析摘要黃瓜枯萎病( C u c u m b e r F u s a r i u m W i l t ) 是黃瓜生產(chǎn)上嚴(yán)重的土傳真菌病害。這種土傳真菌能夠在各種不同類型的土壤中存活并導(dǎo)致植株發(fā)病，病害一旦發(fā)生，往往會(huì)給黃瓜的質(zhì)量與產(chǎn)量造成嚴(yán)重的損失。黃瓜枯萎病菌是尖孢鐮刀菌黃瓜?；? F u s a r i u mo x y s p o r u m f ．s p ．c

3、u c u m e r i n u m ) 。關(guān)于尖孢鐮刀菌的致病機(jī)理方面已有很多報(bào)道，主要包括導(dǎo)管堵塞假說、毒素作用假說、細(xì)胞壁降解等。但是由于對(duì)病原菌生物學(xué)特性認(rèn)知的局限性，目前的研究還沒有完全闡明黃瓜枯萎病菌的致病機(jī)理，因此對(duì)黃瓜枯萎病的防治仍然沒有非常行之有效的措施。生物膜( b i o f i l m ) 是微生物聚集在一起，附著在生物或者非生物的表面，并包埋在自身分泌的胞外物質(zhì)里，與浮游狀態(tài)相對(duì)的一種存在形式。生物膜的形成是

4、人體、動(dòng)物病原菌致病的關(guān)鍵因素。受人體角膜炎病原菌( F u s a r i u mo 聊o ，啪) 能夠形成生物膜井參與致病的啟發(fā)，本研究探索黃瓜枯萎病菌( Fo x y s p o r u m ￡s p ．c u c u m e r i n u m ) F o c - G D 生物膜的形成與致病性的關(guān)系。主要開展生物膜形成條件的摸索、生物膜特性的分析、生物膜調(diào)控基因的挖掘及功能驗(yàn)證等方面的研究。主要取得以下結(jié)果：1 、黃瓜枯萎病菌F

5、 o c 。G D 生物膜的形成方法及條件。研究發(fā)現(xiàn)，用R P M I1 6 4 0 培養(yǎng)基重懸黃瓜枯萎病菌F o c ．G D 孢子至1 0 6 c f u ／m L ，將2 0 0 1 x L 標(biāo)準(zhǔn)的孢子懸浮液添加至平底9 6 孔聚苯乙烯細(xì)胞培養(yǎng)板的每孔內(nèi)，將細(xì)胞培養(yǎng)板置于2 8 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2 h ，用微量洗滌器將培養(yǎng)基及沒有黏附到培養(yǎng)板的孢子輕輕吸取，用P B S 輕柔地漂洗兩次，最后粘附在細(xì)胞培養(yǎng)板表面的是生物膜的初始菌

6、落，然后添加2 0 0 1 1 1 _ , R P M I1 6 4 0 培養(yǎng)基于細(xì)胞培養(yǎng)板每個(gè)孔內(nèi)繼續(xù)靜置培養(yǎng)4 8 h ，至生物膜成熟。采用X T T ( 3 ，3 ’．[ 1 ．( 苯氨酰基) - 3 ，4 - 四氮唑】一- ( 4 一甲氧基- 6 - 硝基) 苯磺酸鈉) 減低法對(duì)生物膜進(jìn)行半定量測(cè)定。結(jié)果顯示，黃瓜枯萎病菌生物膜形成與培養(yǎng)基p H 值、碳源和培養(yǎng)溫度有關(guān)。生物膜形成最適溫度是2 8 。C ，最適p H 環(huán)境為微酸