As-,2-O-,3-誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:用As<,2>O<,3>誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡,檢測(cè)As<,2>O<,3>對(duì)HeLa細(xì)胞端粒酶活性及HPV18 E6基因的影響,探討As<,2>O<,3>誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制;了解維生素C是否能協(xié)同As<,2>O<,3>誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的作用,為臨床治療宮頸癌提供新思路.方法:采用不同濃度的As<,2>O<,3>作用于人宮頸癌HeLa細(xì)胞不同時(shí)間段后,用MTT法、光學(xué)顯微鏡觀察、電鏡、流式細(xì)胞儀等方法檢測(cè)As<

2、,2>O<,3>對(duì)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用,用端粒酶重復(fù)片斷擴(kuò)增-酶聯(lián)免疫法(TRAP-ELISA)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)端粒酶變化情況,用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定HPV18 E6致瘤基因的表達(dá).采用維生素C和As<,2>O<,3>聯(lián)合處理HeLa細(xì)胞觀察凋亡情況,測(cè)定端粒酶活性的變化.結(jié)果:2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>處理HeLa細(xì)胞48h后,細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制,出現(xiàn)較多凋亡細(xì)胞,并經(jīng)電鏡證實(shí)

3、,隨著As<,2>O<,3>濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng),這一作用明顯增強(qiáng).流式細(xì)胞儀分析表明:2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>作用48h后,G1期前面出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰(凋亡峰),隨著劑量增加,凋亡率增加.2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>作用48h后,端粒酶活性受抑,2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>作用48h后,HPV18 E6表達(dá)受抑制.維生素C和As<,2>O<,3>聯(lián)合處理較單一As<,2>

4、O<,3>處理HeLa細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率增加,端粒酶活性抑制更明顯.結(jié)論:1.2μmol·L<'-1>-10μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>可抑制HeLa細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其凋亡.2.As<,2>O<,3>可抑制HeLa細(xì)胞端粒酶活性,抑制端粒酶活性為As<,2>O<,3>誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一,As<,2>O<,3>可下調(diào)HeLa細(xì)胞HPV18 E6的表達(dá),E6表達(dá)與端粒酶活性之間存在相關(guān)性.3.維生素C通過(guò)協(xié)同As<