小麥葉片水分脅迫下cDNA-AFLP差異表達分析.pdf

1、干旱是目前對作物生產力影響最大的環(huán)境脅迫因子，所造成的產量損失超過其他各種脅迫因子造成損失的總和。作物的抗旱性狀由多基因控制，受遺傳等因素影響。作物對干旱的耐受性在一定程度上具有相同的分子基礎，很多基因的表達受水分脅迫的誘導并在作物抵抗水分脅迫中起作用。如何提高作物的抗旱性，使作物能夠在干旱脅迫環(huán)境下獲得較高的品質和理想的產量，一直是人們關注的焦點和研究的熱點。探明耐旱作物對干旱脅迫的分子反應機理，對作物抗旱育種以及抗旱栽培技術等研究具

2、有重要的現實意義。
　　 本實驗以新疆春小麥主栽品種新春6號為實驗材料，新春6號是一個典型即抗旱又具備高水分利用效率的品種。利用cDNA-AFLP技術分析該品種在兩葉一心水分脅迫下基因表達的差異，建立了一套適合小麥葉片基因表達差異的研究體系，并獲得一些可能與小麥抗旱和水分高效利用相關的基因表達序列標簽。研究結果如下：
　　 （1)通過實驗比較，確定了適合小麥葉片cDNA-AFLP分析的總RNA提取方法。
　　 （

3、2)比較了兩套cDNA-AFLP方案，雙酶切法在實驗結果的多態(tài)性、可靠性等方面優(yōu)于單酶切法，確定雙酶切法cDNA-AFLP更適合水分脅迫下小麥基因表達差異的研究。
　　 （3)依據雙酶切法cDNA-AFLP基本原理，對技術體系進行研究，并對擴增體系進行優(yōu)化，建立了一套適合小麥基因差異表達研究的cDNA-AFLP技術體系。
　　 （4)實驗對新春6號兩葉一心水分脅迫進行了基因表達差異分析，利用253對選擇性擴增引物分析，發(fā)

4、現748條差異條帶，回收了44個，這些差異條帶均表現為上調差異類型。
　　 （5)選取10條差異條帶進行了克隆測序，利用BLAST對差異表達片段序列進行序列同源性分析。10個序列在BLAST數據庫中均找到同源序列，主要涉及信號轉導、轉錄調控、能量代謝、細胞生長發(fā)育和逆境響應等類別：1)應答水分脅迫的生長發(fā)育基因：主要有與線粒體26rRNA基因和線粒體基因同源性較高的TDFHh2-1、TDFHh4-3和TDFHh3-3；與葉綠體D