人tensin2 SH2結構域和布氏錐蟲ADF-cofilin蛋白的結構與功能.pdf

1、本論文主要包括人tensin蛋白家族成員tensin2中SH2結構域，布氏錐蟲肌動蛋白解聚因子TbCof(ADF/cofilin from Trypanosoma brucei)的溶液結構和功能研究。
　　 1.Src homology2(SH2)結構域是一種保守的蛋白模塊，能夠參與到多種生化過程中。人tensin蛋白家族是一類主要定位于細胞黏著斑處的蛋白，擁有多個蛋白結構域，能夠同時與多種配體結合，在信號傳遞過程中起著十分重要

2、的作用。有報道稱tensin蛋白家族能夠通過其分子中的SH2結構域與DLC-1(deleted-in-liver-cancer-1)的結合參與到腫瘤抑制過程。我們利用核磁共振技術(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)解析出tensin2 SH2結構域的溶液空間結構。Tensin2 SH2結構域由位于中心的五條β-折疊片組成的片層結構和圍繞于兩側的兩段α-螺旋結構構成，具有典型的SH2結構域折疊模式。但與經(jīng)典的S

3、H2結構域不同，tensin2 SH2結構域不僅能與含有磷酸化酪氨酸的配體(DLC-1)結合，而且能夠與不含有磷酸化酪氨酸的配體結合。另外，通過化學微擾實驗，我們鑒定出tensin2 SH2結構域中參與配體結合的氨基酸殘基，結果表明tensin2SH2結構域與磷酸化和非磷酸化酪氨酸配體的結合采用了相似的結合模式。Tensin蛋白SH2結構域與DLC-1之間的識別對DLC-1的腫瘤抑制功能是必需的，因此，對tensin2 SH2結構域和D

4、LC-1之間相互作用機制的研究為尋找相關腫瘤的抑制方法提供了依據(jù)。
　　 2.肌動蛋白(actin)是一種保守的細胞骨架蛋白，廣泛存在于真核生細胞中，并參與包括細胞遷移，胞內物質運輸，細胞分裂和轉錄調節(jié)在內的多種生物過程。ADF/cofilin(actin-depolymerizing factor，ADF/cofilin)蛋白家族是一種十分重要的肌動蛋白調節(jié)因子，能夠在空間和時間上對actin進行調節(jié)。本論文中，我們鑒定出布氏

5、錐蟲中的肌動蛋白解聚因子TbCof（ADF/cofilin fromTrypanosoma brucei）。我們利用核磁共振(NMR)的方法解析出TbCof的溶液結構。TbCof擁有保守的ADF/cofilin家族蛋白折疊模式，由6個β-折疊片組成的β片層結構位于中央，五段α-螺旋結構圍繞其四周。等溫微量熱實驗（isothermal titration calorimetry，ITC）表明TbCof與G-actin之間存在較強的親和能力

6、，并且在實驗條件下TbCof與ADP-G-actin的親和能力約是ATP-G-actin的五倍。電鏡及共沉實驗結果表明TbCof不能與F-actin共沉淀，但能夠使F-actin解聚，并且TbCof的這些特性并不受pH影響。與actin類似，TbCof主要定位于在細胞質中，暗示了兩者在細胞內可能存在聯(lián)系。本實驗首次鑒定出布氏錐蟲肌動蛋白解聚因子(TbCof)，并解析出其溶液結構，證明布氏錐蟲中含有一個結構和功能上保守的肌動蛋白解聚因子。