大西洋表層海水烷烴降解菌及其烷烴羥化酶CYP153A基因的多樣性分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩137頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、當前,海洋的石油污染正在日趨加劇,對海洋環(huán)境和生態(tài)系統造成了長期和惡劣的影響。利用微生物的降解作用來主動清除溢油是當今非常重要的環(huán)境生物修復技術。因此,烷烴降解菌的分離、鑒定及其降解機制(烷烴羥化酶)的研究,無論是作為基礎研究還是應用研究都有著非常重要的意義。 本論文以柴油和原油混合物(1:1)為碳源,采用了單菌分離培養(yǎng)和DGGE相結合的方法研究了20個橫跨大西洋的表層海水樣品的石油降解菌組成。經過富集培養(yǎng),從20個石油降解菌

2、群中分離篩選得到197株不同細菌,分屬于48個屬,表現出了很高的種屬豐度。降解菌群中可培養(yǎng)菌的16S rRNA基因系統發(fā)育分析表明,變形菌綱、放線菌類群、CFB類群以及厚壁菌門的細菌組成了該海域特定的微生物生態(tài)群落,其中尤以變形菌綱α和γ亞群數目居多。此外,還分離到了33株潛在的新種。PCR—DGGE分析表明,20個菌群中可培養(yǎng)優(yōu)勢降解菌為Alcanivorax、Thalasspospira、Marinobacter、Novosphin

3、gobium、Salinisphaera、Erythrobacter和Parvibaculum,未培養(yǎng)優(yōu)勢菌主要仍為Alcanivorax和Thalasspospir屬菌,其次為Salinisphaera、Bortnella和Zymomona屬菌等。單菌驗證結果表明,大部分細菌都具有較好的柴油降解能力。其中,Salinisphaera屬菌為潛在的新的烷烴降解菌。此外,Halomonas、Tistrella和Martelella屬菌在這些

4、菌群中也經常出現,但并不作為菌群的優(yōu)勢菌存在,單菌油降解能力都很弱。而Bortnella和Zymomona屬菌雖然是菌群優(yōu)勢菌,但都未能獲得純培養(yǎng)。此外,還分離篩選得到1株能夠很好降解C10~C36直鏈烷烴的Gordonia菌株S14—10,根據16S rRNA基因、看家基因secAl和生理生化特性初步確定其為該屬的一個新種,同時還克隆分析其烷烴降解基因alkB和P450。 通過設計簡并引物,從19個屬的68株細菌中擴增獲得了

5、87個烷烴羥化酶CYP153 P450基因片段。其中,12個屬的細菌為首次發(fā)現含有P450基因,包括Bacillus、Brachybacterium、Halomonas、Idiomarina、Leifsonia、Martelella、Mesorhizobium、Ochrobactrum、Salinisphaera、Sphingobium、Tetrathiobacter、Tistrella以及Solimonas屬。系統進化分析表明,這些P

6、450序列多種多樣,形成多個進化分枝,其中多數與Alcanivorax來源的P450同源性較高。Salinisphaera屬菌里擴增到的P450基因較為新穎,在進化樹上聚成了一個獨立的小分支。此外,許多進化關系較遠的菌株都擴增到了相同或者相近的P450基因,體現了基因的水平轉移。再者,Parvibaculum、Erythrobacter、Sphingobium、Tistrella、Bacillus屬的10株菌還發(fā)現了存在多個P450基因

7、。 本文還對分離自不同海域的11株Parvibaculum屬細菌,以16S rRNA、看家基因rpoD以及重復PCR為基礎進行了系統的分析比較,結果發(fā)現一些16S rRNA和rpoD序列相近的菌株其重復PCR帶型差異較大,說明了重復PCR技術的可靠性與靈敏性,同時也反映了其生境不同而造成的進化上的差異。此外,本文對該屬11株菌的CYP153 P450基因PCR產物進行克隆文庫分析,發(fā)現每株菌都包含4~6個P450序列。實時熒光

8、定量PCR分析表明,菌株Parvibaculum sp. S18—4的6個P450基因中只有P450—2和P450—4能在Clo和C14烷烴誘導下上調表達,其它基因不表達或下調表達。它們是否編碼有功能的烷烴羥化酶、是否負責其它底物的降解還有待下一步實驗驗證。 本論文對橫跨大西洋的表層海水樣品中的20個石油降解菌群進行了系統的研究,獲得了豐富的石油烴降解微生物以及降解基因資源。這些結果有助于我們了解石油在海洋環(huán)境中的歸宿,也為進

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論