一種新型免疫檢測載體聚羥基丁酸戊酸酯微球的制備及應(yīng)用.pdf

1、目前免疫檢測中所用的固相載體絕大部分都是由不可降解的高分子材料制備的。隨著免疫檢測項(xiàng)目的增多，載體用量也會(huì)快速增加，使用后載體材料的后續(xù)處理變得越來越麻煩。一方面會(huì)增加垃圾處理量，另一方面若處理不當(dāng)會(huì)對環(huán)境造成污染，因此尋找一種可降解材料來制備免疫檢測的載體具有十分重要的意義。
　　本文以可完全降解的生物高分子材料聚(3-羥基丁酸戊酸酯)(PHBV)為原料，采用雙重乳液法，將其制成微米級(jí)微球，并對PHBV微球制備工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化

2、;首次將PHBV微球用作免疫檢測的載體材料，并以纖維連接蛋白(FN)為檢測對象，建立了相應(yīng)的FN免疫檢測方法;為了簡化微球免疫檢測中復(fù)雜的洗滌過程，通過引入Fe3O4納米粒子制備了磁性PHBV微球，并用于FN的免疫檢測，成功地簡化了洗滌過程，縮短了檢測用時(shí)。
　　在采用雙重乳液法制備了PHBV微球的研究中，通過顯微鏡觀察、掃描電鏡測試、電導(dǎo)滴定法測羧基含量等手段對微球進(jìn)行表征?？疾炝巳軇舛?、乳化劑濃度、乳化轉(zhuǎn)速、油水相的比例等對

3、微球制備的影響。綜合考慮微球粒徑、均勻度、分散性等因素，確定了制備PHBV微球的較優(yōu)工藝條件為:初乳化轉(zhuǎn)速為8000rpm，復(fù)乳化轉(zhuǎn)速為1500rpm，PHBV濃度為5％w/v，PVA的濃度為1％w/v，W1/O的比例為1∶10，(W1/O)/W2的比例為1∶10;此條件下制備的微球粒徑為5～15μm，分散性好，微球表面的羧基含量可達(dá)到3mmol/g。
　　以自制的PHBV微球?yàn)楣滔噍d體來檢測FN，實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明檢測過程最佳參數(shù)

4、為:微球用量4mg，效價(jià)比為1∶32羊抗人FN抗體，酶標(biāo)抗體的稀釋倍數(shù)為2000。此時(shí)FN的檢測下限為1μg/ml，檢測上限為100μg/ml。對待測血清和標(biāo)準(zhǔn)樣品的FN濃度進(jìn)行檢測，結(jié)果表明PHBV微球作為載體的檢測結(jié)果與酶標(biāo)板的檢測結(jié)果是一致的，但是酶標(biāo)板的檢測總用時(shí)要超過6.5h，而微球檢測總用時(shí)僅為3.5h。由此可見PHBV微球可以用作免疫檢測中的固相載體，并且可以明顯縮短檢測用時(shí)。
　　為了進(jìn)一步簡化PHBV微球作載體時(shí)

5、免疫檢測中復(fù)雜的離心洗滌步驟，通過共沉淀法成功制備了共混型磁性PHBV微球，并將其用于FN的免疫檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在Fe3O4納米粒子的投入量為100mg，PVA濃度為3％w/v，反應(yīng)時(shí)間為4h時(shí)，制備的磁性PHBV微球分散性好，磁性能強(qiáng)，表面羧基含量約為3.0mmol/g，粒徑在5～20μm之間。將該磁性PHBV微球用于FN的免疫檢測，其檢測結(jié)果與PHBV微球和酶標(biāo)板作載體時(shí)的檢測結(jié)果一致，此時(shí)以磁分離洗滌代替離心洗滌使檢測過程總用時(shí)