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1、隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,越來(lái)越多的蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子被用于生物醫(yī)藥等方面的研究和應(yīng)用中,對(duì)生物大分子的分離純化提出了很高的要求。生物大分子具有分子量大,結(jié)構(gòu)復(fù)雜,以及穩(wěn)定性差等特點(diǎn),因而對(duì)生物大分子的的分離純化操作必須在較溫和的條件下快速高效的進(jìn)行,以盡可能的保持生物分子的活性和天然構(gòu)象。
分離介質(zhì)是分離純化中的關(guān)鍵材料,常規(guī)多孔介質(zhì)分離生物大分子時(shí),由于孔徑較小(一般在100-300?范圍內(nèi)),會(huì)導(dǎo)致分離時(shí)間長(zhǎng)、生物大
2、分子易失活等問(wèn)題。為了解決這個(gè)問(wèn)題,具有百納米級(jí)孔徑的超大孔微球應(yīng)用于生物大分子的分離純化中,并取得良好的效果。但是由于目前制備的生物大分子分離介質(zhì)大多為疏水性介質(zhì),生物相容性較差,要將其用于大分子物質(zhì)的分離純化,必須對(duì)其進(jìn)行表面親水修飾,這就使制備過(guò)程更加復(fù)雜,同時(shí)存在親水修飾層不穩(wěn)定,在操作過(guò)程中可能脫落等問(wèn)題。在前期工作中,我們利用反膠團(tuán)溶脹法制備出了超大孔的聚苯乙烯微球,孔徑可達(dá)300nm以上。該方法操作簡(jiǎn)便易實(shí)施,設(shè)備要求比較
3、低,效果也較好,但是最終得到的介質(zhì)也為疏水性介質(zhì)。受該方法的啟發(fā),用其反向機(jī)理—表面活性劑膠團(tuán)溶脹法制備大孔生物分離介質(zhì),成功制備得到了孔徑分布在100nm左右的魔芋葡甘聚糖(Konjacglucomannan,KGM)微球,并對(duì)大孔的形成機(jī)理進(jìn)行了研究。
論文工作分為三個(gè)部分。第一部分綜述了親水性大孔分離介質(zhì)提出的背景、研究意義、國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展、本論文的目的和創(chuàng)新點(diǎn)等問(wèn)題。第二部分提出了表面活性劑膠團(tuán)溶脹法制備魔芋葡甘聚糖大
4、孔微球的新思路,具體介紹了整個(gè)實(shí)驗(yàn)的制備工藝。第三部分通過(guò)對(duì)表面活性劑的類型、魔芋葡甘聚糖溶液濃度、表面活性劑用量以及助表面活性劑用量等對(duì)微球的形貌和產(chǎn)率的影響因素進(jìn)行了考察,優(yōu)化了反應(yīng)條件,初步探討了大孔的形成機(jī)理。并對(duì)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)得到的微球進(jìn)行了表征,得到了孔徑在100nm左右,表面有明顯孔道分布的介質(zhì)。從實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)論可以得出,含有大量水溶性表面活性劑的水相分散到油相后,水相液滴內(nèi)大量的膠團(tuán)會(huì)從外油相吸收大量的油,進(jìn)而溶脹,形成油/
5、表面活性劑/水(W/S/O)雙連續(xù)乳液,交聯(lián)過(guò)程中會(huì)發(fā)生相分離,內(nèi)油相所占的體積部分就形成大孔。濕球通過(guò)CO2臨界點(diǎn)干燥儀進(jìn)行干燥,得到微球干粉,通過(guò)JSM-6700F冷場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡、IV9500全自動(dòng)壓汞儀、ASAP2020BET比表面積測(cè)定儀等手段對(duì)微球的表面結(jié)構(gòu),孔徑大小,孔徑分布等進(jìn)行了測(cè)定。
研究結(jié)果表明,通過(guò)表面活性劑膠團(tuán)溶脹法制備大孔微球,方法簡(jiǎn)單,操作簡(jiǎn)便易行,生物相容性較強(qiáng),可以直接用于生物大分子的分
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