榆耳(Gloeostereum incarnatum)的生藥學(xué)研究.pdf

1、本論文對(duì)榆耳(Gloeostereum incarnatum S.Ito et Imai)的真實(shí)性、有效性及安全性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。 來(lái)源方面，榆耳(Gloeostereum incarnatum)屬擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、皺孔菌科(Meruliaceae)、膠韌革菌屬(Gloeostereum)的真菌。干燥的子實(shí)體入藥。

2、性狀鑒定，新鮮的野生榆耳子實(shí)體耳形，膠質(zhì)，直徑2-10(13)cm，厚0-5-1cm，上表面肉粉色且密生污白色至土黃色絨毛，厚約1mm。下表面乳白色至淺橘紅色，有泡狀突起，直徑1×1-3mm，呈放射狀排列。斷面膠質(zhì)，肉粉色。氣微，昧淡。栽培榆耳的不同之處是，子實(shí)體個(gè)體大小較平均，菌蓋直徑4-8cm，菌肉較厚0.7-1.5cm。上表面絨毛較長(zhǎng)，1.5-2mm，污白色。下表面淺橘紅色。 干燥的野生榆耳子實(shí)體極為堅(jiān)硬，不易折斷，且子實(shí)

3、體體積變小，直徑2-3(5)cm。折斷面凹凸不平，有蘑菇香氣，味微淡。 水試體積變化很小，浸出液顏色為紅棕色，且在日光下呈現(xiàn)黃綠色熒光，將其晾干體積變化不大。栽培榆耳的不同之處有，干后較堅(jiān)硬，子實(shí)體大，直徑4-7cm。水試體積膨大至2-5倍，浸出液顏色為淡紅棕色，晾干后呈薄片狀且很脆。 產(chǎn)地方面，野生榆耳主要分布在內(nèi)蒙古大青溝自然保護(hù)區(qū)和吉林省。其中以四平市葉赫鎮(zhèn)分布量較大，吉林省其他地區(qū)也有零星分布。栽培榆耳的產(chǎn)地則主

4、要集中在吉林省蛟河市天北鎮(zhèn)和四平市葉赫鎮(zhèn)兩地，其年總產(chǎn)量可占市場(chǎng)總量的70～80％。 采收期方面，野生榆耳一年采收一次，7-9月產(chǎn)生子實(shí)體；栽培榆耳一年采收兩次，春季6-7月，秋季9-10月為宜。都是平攤曬干。 顯微鑒定，榆耳子實(shí)體結(jié)構(gòu)分為上表層、中間層和子實(shí)層三部分。上表層由菌絲束構(gòu)成，中間層的菌絲富有鎖狀聯(lián)合。其中中間層存在的大量氣泡狀空隙是引起子實(shí)層表面泡狀突起的原因。野生榆耳子實(shí)層擔(dān)孢子較栽培榆耳多。 化

5、學(xué)成分方面，榆耳子實(shí)體經(jīng)干燥、粉碎后，用甲醇在50℃下提取三次，將提取液合并、濃縮并濾去沉淀，加入等倍量硅膠，水浴蒸干。再依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇索氏提取三次，提取液分別合并、濃縮，得初提物石油醚層、氯仿層、乙酸乙酯層、丙酮層、甲醇層和水層六個(gè)組分。石油醚層于4℃下靜置72小時(shí)，析出物用乙醚純化，得化合物1。氯仿層經(jīng)硅膠柱吸附，以石油醚：乙酸乙酯(12：0.5)溶劑系統(tǒng)洗脫，得到6個(gè)部分，部分3再次上硅膠柱，用石油醚：乙

6、酸乙酯(7：0.5)溶劑系統(tǒng)沈脫，得到5個(gè)部分，部分2中得到化合物2。丙酮層室溫靜置72小時(shí)，析出結(jié)晶，經(jīng)丙酮、無(wú)水乙醇和甲醇重結(jié)晶得到化合物3。所得化合物經(jīng)理化檢以、高效液相色譜、核磁共振和質(zhì)譜等分析，依次為麥角甾醇、11-α-戊烯基-2，9，16-十八碳三烯、甘露醇。其中，11-α-戊烯基-2，9，16-十八碳三烯為新化合物。 理化鑒定，榆耳中可能含有黃酮類、強(qiáng)心苷類、生物堿類、多糖類、揮發(fā)油類、甾醇及三萜類、氨基酸、多肽及

7、蛋白質(zhì)類化學(xué)成分。經(jīng)薄層色譜分析，單體化合物2可作為榆耳的鑒別的特征成分。此外，榆耳粉末出現(xiàn)微量升華現(xiàn)象，其生成的黃色霜花狀結(jié)晶為揮發(fā)油類物質(zhì)。 含量測(cè)定，榆耳中富含蛋白質(zhì)、脂肪、糖及多種微量元素，但采自四平市葉赫鎮(zhèn)的野生榆耳及來(lái)自蛟河市的栽培榆耳中分別鉛和砷含量超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量。經(jīng)氣相色譜分析，兩者的六六六、滴滴涕的殘留量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量。 藥理作用，采用紙片法對(duì)榆耳石油醚層、氯仿層、乙酸乙酯層、丙酮層、甲醇層、水層和

8、單體化合物2進(jìn)行體外抑菌率的檢測(cè)。結(jié)果表明，各個(gè)組分對(duì)大腸桿菌ATCC25923和大腸桿菌EПR￡勻表現(xiàn)出抑制作用，其中以甲醇層抑制率最高，具有量效關(guān)系。除氯仿層、丙酮層外，其它組分均對(duì)金黃色葡萄球菌O41 ermc抑制作用不顯著。丙酮層(84 mg/mL)抑制率可達(dá)73.17％，不具有量效關(guān)系。 石油醚層六個(gè)濃度和乙酸乙酯層(50 mg/mL、25mg/mL)對(duì)大腸桿菌ERcat的抑制作用均高于慶大霉素，其中以石油醚層(30.

9、mg/mL)的抑制率最高，可達(dá)160.21％，與對(duì)照組相比差異顯著；氯仿層(50 mg/mL)對(duì)大腸桿菌ERcat的抑制率達(dá)95.61％。 氯仿層對(duì)金黃色葡萄球菌S19 NMA1的抑制作用呈量效關(guān)系變化，在50 mg/mL時(shí)抑制率最高，為34.03％，與對(duì)照組相比差異極顯著；乙酸乙酯層(50 mg/mL)對(duì)金黃色葡萄球菌S19 NMA1的抑制率為39.36％，呈量效關(guān)系變化；丙酮層(84 mg/mL)對(duì)大腸桿菌ATCC25923

10、的抑制率達(dá)49.87％，與對(duì)照組相比差異極顯著。丙酮層對(duì)大腸桿菌ERcat砒在42 mg/mL和21 mg/mL時(shí)的抑制率最高，均為80.10％，與對(duì)照組相比差異顯著；甲醇層6個(gè)濃度對(duì)大腸桿菌ERcat均有明顯的抑制作用，在75 mg/mL時(shí)最高，達(dá)74.94％，但不具有量效關(guān)系；單體化合物2對(duì)大腸桿菌ATCC25923、金黃色葡萄球菌ATCC25923以及大腸桿菌EПR￡的抑菌活性明顯，其中對(duì)大腸桿菌EПR￡的抑制作用隨濃度降低而增強(qiáng)

11、。 單體化合物2(0.011 mg/mL)對(duì)金黃色葡萄球菌O41 ermc的抑制率可達(dá)48.78％。總而言之，榆耳的丙酮層、甲醇層、水層和氯仿層及單體化合物2均具有良好的抑菌活性。 榆耳水層對(duì)二甲苯引起的小鼠耳腫脹有抑制作用，藥物劑量為5g/kg時(shí)抑腫率最高，可達(dá)15.86％，但與陰性組相比并無(wú)顯著性差異。 本論文首次從生藥學(xué)角度對(duì)榆耳的真實(shí)性、有效性及安全性進(jìn)行系統(tǒng)研究，且對(duì)分離到的多個(gè)組分進(jìn)行了抑菌活性檢測(cè)。