人參根際土壤微生物多樣性研究.pdf

1、人參(Panax ginseng C.A.Meyer)，是我國(guó)名貴藥用植物，也是吉林省主要特產(chǎn)之一。長(zhǎng)白山區(qū)以其獨(dú)特的地理位置和氣候條件，成為吉林省人參主產(chǎn)區(qū)。人參屬于忌地性極強(qiáng)的植物，存在連作障礙，長(zhǎng)期采用伐林栽參，影響可持續(xù)發(fā)展。因此，人參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展受到了阻礙，解決人參忌連作問題迫在眉睫。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為連作障礙與土壤理化性狀變劣、微生物體系的變化存在密切關(guān)系。但從土壤改良方面只能從一定程度上緩解連作的癥狀，病害發(fā)生、產(chǎn)量低的問題仍然

2、存在。本實(shí)驗(yàn)從根際微生物的角度進(jìn)行分析，利用微生物純培養(yǎng)、PCR-DGGE技術(shù)、基因克隆方法開展人參忌連作問題研究，重點(diǎn)研究真菌對(duì)植物病害的影響，以期為人參病害預(yù)防、病理研究以及開發(fā)防治人參病害殺菌劑提供基礎(chǔ)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴確立了人參根際土壤真菌ITS區(qū)PCR反應(yīng)體系：25μL反應(yīng)體系DNA濃度52.5ng、dNTPs濃度0.20mM、Mg2+濃度1.50 mM、引物濃度4.80μmol搭配效果最佳。⑵篩選出適合真菌

3、DGGE指紋圖譜分析的引物ITS1/ITS4、ITS1-GC/ITS2，并確定真菌DGGE凝膠單體濃度為12％-6%，變性劑濃度為60%-40%。細(xì)菌分析采用引物314F-GC/518R，DGGE凝膠單體濃度為8%，變性劑濃度為60%-40%。⑶研究結(jié)果表明根際真菌與非根際真菌種類存在明顯差異，并且真菌種類隨著種植年限的增加而變少。隨著種植年限的增加同種真菌在數(shù)量上也發(fā)生了變化，表現(xiàn)出變少的趨勢(shì)，而且有少量新的真菌滋生。人參根際細(xì)菌與非

4、根際細(xì)菌多樣性指數(shù)變化不明顯，但有參地細(xì)菌量明顯多于無(wú)參地，后期滋生的細(xì)菌有可能存在致病菌。⑷通過基因克隆測(cè)序得到68條測(cè)序結(jié)果，將測(cè)序結(jié)果系統(tǒng)分析，BLAST對(duì)比得出人參根際土壤中分別有菌根真菌（Mycorrhizal fungus）、擔(dān)子菌屬（Basidiomycota sp.）、真子囊菌門（Euascomycete sp.）、枝孢屬（Euascomycete sp.）、被孢霉屬（Mortierella alpina）、子囊菌屬（A