C8-神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：探討外源性C8-神經(jīng)酰胺（C8-ceramide）對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞體外生存率的影響，以及C8-神經(jīng)酰胺對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。
　　方法：取妊娠18天的 ICR孕鼠一只，分離、培養(yǎng)原代胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（alveolar type II epithelial cell，AECⅡ），使用免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定法和透射電子顯微鏡對所獲取的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。分別加入0、20、40、80μmol/L的C8-神經(jīng)酰胺溶液，繼續(xù)培養(yǎng)

2、24 h，使用MTT法檢測外源性C8-神經(jīng)酰胺對AECⅡ增殖的影響，然后使用80μmol/L C8-神經(jīng)酰胺溶液分別培養(yǎng)AECⅡ3、6、12、24 h，MTT法檢測AECⅡ活力，并計(jì)算體外細(xì)胞生存率的變化。使用0、20、40、80μmol/L C8-神經(jīng)酰胺溶液對AECⅡ進(jìn)行體外干預(yù)，于12 h和24 h后，分別使用流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL法檢測各組細(xì)胞的凋亡率。
　　結(jié)果：細(xì)胞鑒定結(jié)果證明，通過本實(shí)驗(yàn)提取的細(xì)胞為胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)

3、胞，具有肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的特征性結(jié)構(gòu)。MTT結(jié)果提示，C8-神經(jīng)酰胺對 AECⅡ增殖具有明顯抑制作用，并且具有濃度效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。碘化丙啶染色法結(jié)果顯示，C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時(shí)，12 h和24 h細(xì)胞總凋亡率分別為：(5.80±0.30)％、(7.00±0.10)%、(9.97±0.50)%、(12.67±0.67)%和(5.67±1.39)%、(8.87±0.49)%、(13.97±1.33)%、(

4、18.80±0.46)%，各劑量組凋亡率與對照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且隨著藥物濃度的上升和時(shí)間的延長，細(xì)胞凋亡率呈上升趨勢。AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時(shí)，12 h和24 h細(xì)胞總凋亡率分別為：(20.63±0.86)%、(22.67±1.72)%、(42.03±1.34)%、(50.40±1.30)%和(20.93±2.51)%、(28.93±3.19

5、)%、(47.00±1.08)%、(57.77±3.04)%（除12小時(shí)20μmol/L組外，相同時(shí)間點(diǎn)，其他各組與對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均 P＜0.05）。TUNEL法提示，C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時(shí)，12 h和24 h的凋亡率分別為：(5.51±1.41)%、(13.24±2.62)%、(35.10±4.59)%、(75.07±4.37)%和(5.56±1.36)%、(21.34±2.09)