內(nèi)蒙古自治區(qū)手足口病主要病原分子生物學(xué)特征和人腸道病毒71型致病病理學(xué)研究.pdf

1、研究背景：手足口?。℉and, foot, and mouth disease, HFMD）是由人腸道病毒（Human enterovirus, HEV）引起的常見兒童急性傳染病，以發(fā)熱和手、足、口腔和臀部等部位出現(xiàn)皮疹為主要臨床特征，少數(shù)病例出現(xiàn)腦炎、心肌炎、肺水腫、急性弛緩性麻痹等嚴(yán)重并發(fā)癥，極少數(shù)情況下可引起死亡。HFMD可由許多血清型的 HEV引起，但最主要的病原體為人腸道病毒71型（HEV71）和柯薩奇病毒 A組16型（CVA

2、16）。自1981年 HFMD在中國上海首次報道以來，全國各地均有 HFMD暴發(fā)及散發(fā)的報道。內(nèi)蒙古自治區(qū)自2007年首次報道 HFMD以來，疫情基本呈逐年遞增的趨勢，而且 HFMD的重癥病例和死亡病例的發(fā)病率也呈逐年增加，截至2010年全年累計報告 HFMD病例18944例，重癥病例247例，死亡13例。然而到目前為止，HFMD的致病機理還不確定，而且還沒有安全有效的疫苗和藥物用于預(yù)防和控制本病，因此加強該病的流行病學(xué)、病原學(xué)及基因特

3、征和病理學(xué)研究具有非常重要的意義。為了更好的預(yù)防和控制 HFMD，我們開展了相關(guān)內(nèi)容的基礎(chǔ)研究。
　　研究目的：為了了解內(nèi)蒙古自治區(qū) HFMD的流行情況，了解 HFMD主要致病病原體的流行本底，更好地預(yù)防和控制 HFMD，我們開展了相關(guān)內(nèi)容的和應(yīng)用基礎(chǔ)研究，旨在闡明和揭示內(nèi)蒙古自治區(qū) HFMD的流行病學(xué)特點、HEV71和 CVA16分子流行病學(xué)特征和 HEV71重癥病例的病理學(xué)特點。
　　主要方法：
　　（1）采用描述

4、性流行病學(xué)方法對2008～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū) HFMD的流行病學(xué)特征進行分析。
　　（2）應(yīng)用 Real-time PCR方法對2010年12個盟市和2011年部分盟市門診疑似病例的標(biāo)本進行病原鑒定，然后進行病毒分離，應(yīng)用 Real-time PCR方法對病毒分離物進行鑒定，對鑒定為其它 HEV的陽性分離物進行VP4編碼區(qū)基因擴增及核苷酸序列測定和分析。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的 HFMD患者臨床標(biāo)本中分離到的 H

5、EV71隨機選取代表株進行 VP1編碼區(qū)基因擴增及核苷酸序列測定和分析，應(yīng)用 MAGE5.0軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的 HEV71代表株與 HEV71其它各基因型和基因亞型的代表株的親緣進化關(guān)系；從選取的 HEV71代表株中按年代和癥狀不同隨機選取12株進行基因組全長測序和分析，應(yīng)用 SimPlot軟件分析和MAGE5.0軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行 HEV71代表株與 A組其他腸道病毒的相似性和親緣進化關(guān)系。
　?。?）對2010年

6、在12個盟市和2011年在部分盟市門診采集的疑似HFMD病例的臨床標(biāo)本進行病毒分離，應(yīng)用 Real-time PCR方法對病毒分離物進行 CVA16鑒定。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的手足口病患者臨床標(biāo)本中分離到的 CVA16隨機選取代表株進行 VP1編碼區(qū)基因擴增及核苷酸序列測定和分析，與 CVA16其它各基因型和基因亞型的代表株和內(nèi)蒙古2007年和2008年的代表株構(gòu)建親緣性進化樹；從選取的CVA16代表株中按照癥狀的不同選

7、取6株進行基因組全長序列測定和分析，應(yīng)用SimPlot軟件和MAGE5.0軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行CVA16代表株與其他腸道病毒的相似性和親緣進化關(guān)系。
　?。?）對2010年河南省1例 HEV71引起的死亡病例進行尸體剖檢，并將多個組織分別進行福爾馬林處理和液氮保存，并分別進行病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測，初步探討 HEV71的致病機理。
　　研究結(jié)果：
　?。?）2010～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的發(fā)病率不同年份

8、、月份和盟市之間不同，統(tǒng)計學(xué)分析差異顯著；發(fā)病高峰主要集中在6～8月，比南方城市的高峰期推遲一個月；發(fā)病人群主要集中在1～10歲,尤其是1～4歲，占總發(fā)病人的82.33%；男性發(fā)病率高于女性發(fā)病率，構(gòu)成比為1.5:1，統(tǒng)計學(xué)分析差異顯著，同時盟市人口的發(fā)病率比旗縣人口的發(fā)病率高，統(tǒng)計學(xué)分析差異顯著。
　?。?）內(nèi)蒙古自治區(qū) HFMD的主要病原是 CVA16和 HEV71，同時從個別 HFMD患者的臨床標(biāo)本中分離出10株其他腸道病毒

9、，重癥病例中以HEV71為主；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的 HEV71代表株屬于 C4基因亞型 C4a進化分支，并且存在多個傳播鏈；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的 HEV71代表株與2008年北京代表株親緣關(guān)系比2007年內(nèi)蒙古代表親緣關(guān)系近，說明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行 HEV71不是獨立進化的，而是與中國流行的 HEV71在共同進化；2010～2011年流行的 HEV71代表株與2008臺灣代表株來源于同一個原始株，經(jīng)重組和親緣進化關(guān)系樹分析發(fā)現(xiàn)，2010～20

10、11年流行的HEV71代表株與 A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)為主。
　　（3）內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16代表株均屬于B1基因亞型的兩大進化分支B1a和B1b，并且存在多個傳播鏈，有兩條優(yōu)勢傳播鏈；與2009年山東、北京和2010年河南的代表株親緣關(guān)系很近，說明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16不是獨立進化的，而是與中國流行的CVA16共同進化；2010年B1b分支的CVA16與2009年上海代表株來源于同一個原始

11、株，屬于B1a進化分支的CVA16與2011年泰國的代表株來源于同一個原始株，同時B1b分支的CVA16進化的比較快；經(jīng)相似性和親緣進化關(guān)系樹分析發(fā)現(xiàn)，2010年流行的CVA16代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)為主，而且非結(jié)構(gòu)蛋白編碼的核苷酸與HEV71原型株同源性很近，提示CVA16與HEV71發(fā)生重組。
　?。?）HEV71死亡病例尸體眼觀病變主要表現(xiàn)為：肺淤血、水腫，支氣管管腔內(nèi)可見灰白色黏稠液體；

12、腦水腫，蛛網(wǎng)膜下腔充血、出血。主要病理組織學(xué)病變?yōu)椋耗X脊髓發(fā)生水腫、管套形成、衛(wèi)星現(xiàn)象、嗜神經(jīng)元現(xiàn)象，推測 HEV71引起了非化膿性腦脊髓炎；肺水腫、肺泡結(jié)締組織增生、肺泡腔內(nèi)透明膜形成、粉紅色漿液滲出、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤、肺泡Ⅱ型細(xì)胞脫落，推測 HEV71引起了病毒性肺炎。該病例的主要受害器官是腦脊髓和肺臟。免疫組化檢測，不但在神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)了 HEV71抗原信號，還在肺、支氣管、闌尾、胃、十二指腸、肝、空腸、脾、胸腺、胰、腎組織

13、細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)陽性信號。據(jù)此推測 HEV71是一種泛嗜性病毒；該病毒可通過多種細(xì)胞內(nèi)增殖（包括血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖）經(jīng)血液循環(huán)在機體內(nèi)完成擴散；主侵器官是腦脊髓和肺臟，直接致死原因是神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂和呼吸衰竭。
　　結(jié)論：
　?。?）本文闡明了內(nèi)蒙古自治區(qū) HFMD的流行病學(xué)規(guī)律，闡明了 HFMD的發(fā)病時間、易感人群和地區(qū)分布與全國其它地區(qū)的異同點，以及其自身的規(guī)律性。
　?。?）本文確定了內(nèi)蒙古自治區(qū) HFMD的病原譜以 H