血吸蟲Sj14FABP和Sj26GST雙價膜錨定表達DNA疫苗pIRES-Sj26-Sj14的構(gòu)建和表達.pdf

1、目的：構(gòu)建日本血吸蟲Sj14FABP和Sj26GST膜錨定共表達質(zhì)粒pIRES-Sj26-Sj14，并檢測其在體外的表達。 方法：利用RT-PCR法，以日本血吸蟲成蟲總RNA為模板，擴增獲得Sj14FABP與Sj26GST的全長基因。并先將其克隆到真核表達質(zhì)粒pVAC中，分別獲得重組質(zhì)粒pVAC-Sj14、pVAC-Sj26。然后分別以pVAC-Sj14、pVAC-Sj26質(zhì)粒為模板，采用PCR技術(shù)擴增出含人白介素2(IL-2)

2、23個氨基酸的信號肽與人胎盤堿性磷酸酶(PLAP)COOH-末端32個氨基酸的膜錨定序列在內(nèi)的Sj14、Sj26修飾基因。并將該兩個修飾基因共同構(gòu)建到真核表達載體pIRES上獲得共表達質(zhì)粒pIRES-Sj26-Sj14，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細胞，通過RT-PCR的方法及間接免疫熒光技術(shù)檢測Sj26，Sj14基因的膜錨定表達。 結(jié)果：經(jīng)過酶切鑒定、PCR、測序證實所克隆的Sj14FABP、Sj26GST基因與報道結(jié)果完全一致，重