組織蛋白酶L、S、K、B及其抑制劑Cystatin C與大隱靜脈曲張發(fā)病機制關系的形態(tài)學研究.pdf

1、目的：①觀察曲張大隱靜脈(varicosegreatsaphenous，VGS)管壁的光鏡結構和超微結構的改變；②觀察曲張大隱靜脈管壁內(nèi)彈性纖維(elasticfiber，EF)及膠原纖維(collagenousfiber，CF)的分布及變化；③觀察曲張大隱靜脈中溶酶體半胱氨酸蛋白酶(cysteineprotease)中組織蛋白酶(cathepsin，Cat)L、S、K、B及其抑制劑CystatinC的表達變化；④探討CatL、CatS

2、、CatK、CatB及CystatinC與大隱靜脈曲張發(fā)病機制的關系。 方法：通過臨床術中收集曲張大隱靜脈31例，正常大隱靜脈23例。標本獲取后制成超薄切片置透射電鏡(transmissionelectronmicroscrope，TEM)下觀察超微結構變化；制成石蠟切片分別進行HE染色、Weigert染色、免疫組織化學SABC方法染色，在光鏡下觀察一般組織學變化及CatL、CatS、CatK、CatB、CystatinC的表達

3、變化；同時進行熒光免疫組織化學方法染色，觀察上述組織蛋白酶與靜脈壁細胞型的共定位：應用計算機圖像分析系統(tǒng)對免疫組化結果進行定量分析，比較兩組大隱靜脈管壁中組織蛋白酶平均光密度值(meanopticaldensity，MOD)，用SPSS12.0軟件系統(tǒng)分析實驗結果。 結果：①在HE染色切片中，正常大隱靜脈內(nèi)膜薄，腔面光滑平整；中膜內(nèi)有長梭形平滑肌細胞(smoothmusclecell，SMC)，呈環(huán)形層狀排列：外膜較厚。曲張大隱

4、靜脈顯示內(nèi)腔直徑增大，內(nèi)膜增厚，部分內(nèi)皮細胞(endothelialcell，EC)不完整；中膜增厚，SMC形態(tài)異常，排列紊亂：外膜與正常大隱靜脈比較無明顯改變。②在Weigert染色切片中，正常大隱靜脈管壁內(nèi)EF呈連續(xù)的細絲波浪狀，中膜SMC與EF、CF相鄰呈多層環(huán)狀分布；外膜中豐富的CF與EF排列規(guī)則。曲張大隱靜脈管壁內(nèi)EF明顯減少，部分斷裂，排列紊亂，CF減少不甚明顯，外膜中CF與EF均失去環(huán)層狀外觀。③電鏡下，正常大隱靜脈內(nèi)膜表

5、面EC結構清晰，細胞間連接緊密；SMC呈梭形，胞漿內(nèi)富含大量肌絲；膠原原纖維分布于中膜和外膜，排列規(guī)則。曲張大隱靜脈內(nèi)膜增厚，可見皺襞，EC內(nèi)有大量小泡，表面呈微絨毛樣改變，細胞間連接不緊密，部分EC脫落：SMC形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，胞漿中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體和線粒體豐富，肌絲少；膠原原纖維減少，排列紊亂，粗細不等。④免疫組化染色可見，正常大隱靜脈壁CatL、CatS及CatK免疫反應為陰性，CatB為弱陽性：曲張大隱靜脈壁上述組織蛋白酶

6、免疫反應陽性，陽性細胞主要定位于EC及SMC，分布于胞質(zhì)中，可見點、片狀棕褐色布滿細胞漿，細胞核為陰性。CystatinC在正常大隱靜脈中免疫反應為陽性，定位于EC、SMC的胞漿中，呈棕褐色細或粗顆粒狀：在曲張大隱靜脈中，未見明顯CystatinC免疫陽性細胞。⑤熒光免疫組織化學染色可見，CatL、CatS、CatK、CatB(紅色)在曲張的大隱靜脈管壁EC和SMC(綠色)內(nèi)均有表達，CystatinC(紅色)主要表達于正常大隱靜脈管壁

7、EC和SMC(綠色)。由紅色與綠色疊和所得的橙色表明CatL、CatS、CatK、CatB及其抑制劑CystatinC與EC、SMC共定位。⑥圖像分析結果表明：與正常組大隱靜脈MOD值比較，曲張組大隱靜脈EC及SMC中CatL、CatS、CatK、CatB免疫反應陽性細胞MOD值明顯增高，CystatinC明顯降低，曲張組中各組織蛋白酶之間差異無顯著性，曲張組與正常組間各組織蛋白酶差異顯著(P＜0.01)。 結論：①大隱靜脈曲張