白肋翻唇蘭生殖生物學(xué)研究.pdf

1、白肋翻唇蘭(Hetaeria cristata)是蘭科翻唇蘭屬多年生草本，本文以江西省九連山國家級自然保護(hù)區(qū)內(nèi)的野生白肋翻唇蘭種群為研究對象，通過野外觀察、花粉活力和柱頭可授性測定、傳粉系統(tǒng)的結(jié)果統(tǒng)計(jì)、常規(guī)石蠟切片、種子活力檢測及無菌播種等方法，對其開花特性、繁育系統(tǒng)、胚胎發(fā)育、種子活力及無菌萌發(fā)培養(yǎng)等方面進(jìn)行生殖生物學(xué)的研究。其主要研究結(jié)果如下：
　　1.白肋翻唇蘭花期為9-10月，花期持續(xù)約31 d?；ㄐ蚓?-15朵花，一個花

2、序從第一朵花盛開到最后一朵花凋謝持續(xù)約15 d。同一花序上兩朵花開花時間相差1 d。單花花期持續(xù)約8-12 d?；ㄐ?，半張開，白色。萼片背面被毛，淡紅褐色，唇瓣位于下方，兜狀卵形，呈舟狀，基部淺囊狀。白肋翻唇蘭在花蕾期、初花期、盛花期和凋謝期4個時期的花粉生活力及柱頭可授性均很低，花粉活力在10％-40%之間，柱頭基本無活性。
　　2.自然條件下，白肋翻唇蘭的結(jié)實(shí)率為95%，自花和異花人工授粉的結(jié)實(shí)率為100%；去雄不套袋的結(jié)實(shí)率

3、為96.7%；去雄套袋和和不去雄套袋為100%，去除合蕊柱套袋為93.3%。這些結(jié)果表明在自然條件下，白肋翻唇蘭不以昆蟲為媒介傳粉，也不存在自動的自花授粉，推測其生殖方式為無融合生殖。
　　3.實(shí)驗(yàn)通過對胚胎的發(fā)育過程觀察表明，白肋翻唇蘭的子房由3心皮組成，1室，側(cè)模胎座上分化出胚珠原基，這些胚珠原基最終發(fā)育成胚珠。胚珠為倒生胚珠，發(fā)育過程中位于胚珠原基最頂部的珠心細(xì)胞最先分化形成孢原細(xì)胞，之后直接發(fā)育為大孢子母細(xì)胞。大孢子母細(xì)胞

4、進(jìn)行2次分裂，形成直線排列的大孢子四分體，其中珠孔端的孢子直接發(fā)育成功能大孢子，其他3個孢子退化。功能大孢子細(xì)胞向合點(diǎn)端方向延伸，體積增大，形成單核胚囊，其后再進(jìn)行3次分裂形成8核7細(xì)胞的胚囊。其胚囊內(nèi)卵細(xì)胞在沒有受精的情況下，可自行分裂發(fā)育成胚。此外，通過對其染色體進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，野生居群內(nèi)的植株與其種子無菌播種萌發(fā)培養(yǎng)出的莖段染色體數(shù)目是一致的，均為24條。由此，我們可以推斷白肋翻唇蘭的生殖方式為無融合生殖的二倍體孢子生殖。
　

5、　4.取自然成熟并飽滿的白肋翻唇蘭蒴果進(jìn)行種子活力和無菌播種。研究發(fā)現(xiàn)浸泡TTC染液時間為12 h的種子活力達(dá)到最高。播種后90 d后，白肋翻唇蘭種子的種胚膨大，之后突破種皮并形成原球莖。白肋翻唇蘭種子在不同的培養(yǎng)基和激素組合上萌發(fā)率差別很大，并通過研究發(fā)現(xiàn)其最佳種胚萌發(fā)培養(yǎng)基為1/2MS+20 g·L-1蔗糖+(1.0-1.5) mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+6.8 g·L-1瓊脂+1.0 g·L-1活性炭，萌發(fā)率