貴州省豬繁殖與呼吸綜合征分子流行病學(xué)和防控技術(shù)研究.pdf

1、目的：為探索高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）的防控技術(shù)，對(duì)貴州省高致病性 PRRS的臨床診斷特征，病原學(xué)鑒定、變異毒株與經(jīng)典毒株的區(qū)別、病毒的分子流行病學(xué)、媒介動(dòng)物的傳播意義及疫苗免疫程序展開全面研究。
　　方法：通過流行病學(xué)調(diào)查，了解貴州省 PRRS發(fā)病豬品種，臨床特征、季節(jié)性流行特征和地域分布；對(duì) PRRSV貴州流行毒株進(jìn)行分離

2、，通過比較 PRRSV不同基因的RT-PCR擴(kuò)增效果，篩選適于RT-PCR臨床診斷的目的基因；基于12株 PRRSV貴州流行毒株的Nsp2基因和10株 PRRSV貴州流行毒株的GP5基因，開展分子流行病學(xué)研究；通過從三帶喙庫蚊、家蠅和家鼠檢測(cè) PRRSV核酸，調(diào)查 PRRSV隱蔽攜帶者，評(píng)估媒介動(dòng)物在PRRS傳播中的意義；根據(jù)PRRSV貴州流行毒株的遺傳變異特征，選擇適于貴州省使用的PRRSV疫苗種類，通過母源抗體和免疫抗體的消長規(guī)律檢

3、測(cè)，制定合理的免疫程序。
　　結(jié)果：貴州省8個(gè)地區(qū)43個(gè)豬場(chǎng)中，37個(gè)豬場(chǎng)暴發(fā)高致病性 PRRS。6～8月份為發(fā)病高峰，PRRS的發(fā)病與豬群遺傳背景無明顯關(guān)系，病豬普遍表現(xiàn)皮膚微循環(huán)障礙和體溫升高（39.7℃～41.7℃），死亡豬以29d～99d為主（62.3％），病豬普遍發(fā)生肺和肺門淋巴結(jié)出血，表現(xiàn)間質(zhì)性肺炎；與豬瘟病毒混合感染達(dá)24.32％；發(fā)病豬群的血清抗體水平明顯高于臨床健康非免疫豬群，而低于臨床健康免疫豬群。
　　

4、通過 Marc-145細(xì)胞增殖病毒，成功分離到11株 PRRSV，在進(jìn)行比較的4個(gè)基因中，N基因檢測(cè)所需的核酸量最少，擴(kuò)增效果最佳，適于含毒量較少樣本的檢測(cè)，Nsp2基因擴(kuò)增可對(duì)高致病性毒株和經(jīng)典毒株進(jìn)行鑒別。共有3種Nsp2基因不同程度缺失類型的PRRSV同時(shí)在貴州省流行，66.67％的毒株缺失90個(gè)核苷酸，25％的毒株缺失177個(gè)核苷酸，8.33％的毒株缺失93個(gè)核苷酸，流行毒株的GP5基因均發(fā)生了點(diǎn)突變，表現(xiàn)了高致病性 PRRSV

5、的變異特征。貴州流行毒株間基于Nsp2基因的遺傳距離為0.001～0.027，基于GP5基因的遺傳距離為0.000～0.007，在系統(tǒng)發(fā)生樹上聚為2大類，同是美洲型毒株；貴州流行株與參考毒株之間基于Nsp2基因的遺傳距離為0.008～0.268，相似度為77.7％～99.2％，基于GP5基因的遺傳距離為0.010～0.122，相似度為88.9％～99％，PRRSV貴州流行毒株與國內(nèi)近年流行的毒株系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系接近，與早期流行毒株距離較遠(yuǎn)，

6、毒株間的差異與地域間的距離沒有明顯相關(guān)性，毒株在Nsp2和GP5基因水平上的進(jìn)化趨勢(shì)一致，但 Nsp2基因更不穩(wěn)定。
　　三帶喙庫蚊可攜帶具有感染性的高致病性 PRRSV24h以上，具有傳播 PRRSV的重要意義，家蠅能在體表短期攜帶 PRRSV（低于12h），家鼠和小白鼠不能檢測(cè)到 PRRSV。NVDC-JX-A1株滅活疫苗是當(dāng)前最適于貴州省預(yù)防 PRRS的疫苗，PRRS首免應(yīng)在20d左右，50～60d時(shí)應(yīng)加強(qiáng)免疫，母豬在配種前

7、應(yīng)進(jìn)行免疫。
　　結(jié)論：貴州省 PRRS具有明顯的發(fā)病特征，N基因最適于PRRS病原核酸的檢出，Nsp2基因擴(kuò)增可鑒別高致病性 PRRSV和經(jīng)典 PRRSV，貴州省流行的PRRSV均為具有高致病性 PRRSV變異特征的美洲型毒株，研究在貴州省新發(fā)現(xiàn)2種Nsp2基因缺失類型的流行毒株，三帶喙庫蚊具有傳播 PRRS的重要意義，家蠅和鼠類是否能夠傳播 PRRS尚待研究，制定的疫苗接種程序等綜合防控技術(shù)在全省52家豬場(chǎng)推廣，取得了較理想的