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文檔簡介
1、<p><b> 本科畢業(yè)論文</b></p><p><b> ?。?0 屆)</b></p><p> 加拿大一枝黃花栽種食藥用菌菌種(母種)的初步篩選</p><p> 所在學院 </p><p> 專業(yè)班級
2、 生物科學 </p><p> 學生姓名 學號 </p><p> 指導教師 職稱 </p><p> 完成日期 年 月 </p><p><b> 目錄<
3、/b></p><p><b> 摘要II</b></p><p> AbstractIII</p><p><b> 引言1</b></p><p><b> 1 材料與方法2</b></p><p> 1.1 供試材料2&l
4、t;/p><p> 1.2 試驗方法2</p><p><b> 2 結(jié)果與分析2</b></p><p> 2.1 各菌絲生長狀況分析2</p><p> 2.2 三種菌絲長勢橫向比較9</p><p> 2.3 本章小結(jié)10</p><p><b&
5、gt; 小結(jié)2</b></p><p><b> 參考文獻12</b></p><p> 1材料與方法錯誤!未定義書簽。</p><p> 1.1 食用菌種:錯誤!未定義書簽。</p><p> 1.2 ISSR分析:錯誤!未定義書簽。</p><p> 1.3
6、SRAP分析:錯誤!未定義書簽。</p><p> 1.4 數(shù)據(jù)分析:錯誤!未定義書簽。</p><p> 2結(jié)果與分析錯誤!未定義書簽。</p><p> 2.1 ISSR分析:錯誤!未定義書簽。</p><p> 2.2 SRAP分析:錯誤!未定義書簽。</p><p> 2.3 ISSR和SR
7、AP聯(lián)合分析:錯誤!未定義書簽。</p><p> 3 小結(jié)錯誤!未定義書簽。</p><p> 致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b> 摘要</b></p><p> [摘要] 加拿大一枝黃花是一種難以根治惡性入侵性雜草。莖桿中纖維素、可溶性糖等物質(zhì)含量較高,綜合利用加拿大一枝黃花已成為現(xiàn)在研
8、究的熱點。本文利用加拿大一枝黃花的浸出液替代PDA培養(yǎng)基中的蒸餾水,分別對金針菇、杏鮑菇、靈芝三種食用菌進行不同梯度的多次培養(yǎng),以PDA培養(yǎng)基為對照。測定三種菌絲在各個梯度上的平均生長速度,篩選出各自最適合的培養(yǎng)基以及長勢最好的菌種。結(jié)果表明金針菇可在浸出液含量為50%左右的培養(yǎng)基上達到0.659 cm/d的最大日平均菌絲生長速度,而杏鮑菇和靈芝則在浸出液含量為75%左右的培養(yǎng)基上分別達到0.679 cm/d和0.746 cm/d的最大
9、日平均菌絲生長速度,其中靈芝相比其他兩種菌種在培養(yǎng)基上長勢最好,污染最少。表明金針菇最佳母種培養(yǎng)基濃度為45%,杏鮑菇為73%,靈芝為80%。</p><p> [關鍵詞] 加拿大一枝黃浸出液;食用菌;培養(yǎng)基;篩選</p><p><b> Abstract</b></p><p> [Abstract] S.canadensis
10、160;L is a kind of malignant invasive weed which is difficult to cure .Its Stem pole is high content of cellulose and soluble sugar , comprehensive utilization of S.canadensis L has become a hot research now.This ar
11、ticle uses the component refined from S.canadensis L instead of the distilled water in the PDA medium to cultivate edible fungi at different concentrations.Training to PDA medium as control and after comparing their
12、 average growth rate on the medium at each gradie</p><p> [Key words] S.canadensis L leaching liquid;edible fungi;medium;select</p><p><b> 引言</b></p><p> 食用菌是一種
13、深受群眾喜受的美味食品及保健食品,它不僅具有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)及人體所需的各種微量元素,同時還具有品種繁多,分布廣泛,適于人工栽培等優(yōu)點,在綜合利和農(nóng)、林廢棄副產(chǎn)品(木屑、稿稈),具有重大的經(jīng)濟效益和社會效益。[1]</p><p> 中國的食用菌資源豐富,也是最早栽培、利用食用菌的國家之一。1100多年前已有人工栽培木耳的記載。至少在800多年前香菇的栽培已在浙江西南部開始。草菇則是200多年前首先在閩粵一帶開始
14、栽培。這些技術(shù)一直流傳至今。菇類的蛋白質(zhì)含量一般為鮮菇1.5%-6%、干菇15%-35%,高于一般蔬菜,而且它的氨基酸組成比較全面,大多菇類含有人體必需的八種氨基酸,其中蘑菇、草菇、金針菇中賴氨酸含量豐富,而谷物中缺乏,賴氨酸有利于兒童體質(zhì)和智力發(fā)育,金針菇在日本更是稱為"增智菇".菇類含有多種維生素和多種具有生理活性的礦質(zhì)元素。如VB1、VB12、Vc、Vk、VD及磷、鈉、鉀、鈣、鐵和許多微量元素,可以補充其它食品
15、中的不足。食用菌含有豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸,其含量是一般蔬菜和水果的幾倍到幾十倍。 如鮮蘑菇含蛋白質(zhì)為1.5%-3.5%,是大白菜的3倍,蘿卜的6倍,蘋果的17倍。1公斤干蘑菇所含蛋白質(zhì)相當于 2公斤瘦肉,3公斤雞蛋或12公斤牛奶的蛋白量。食用菌中賴氨酸含很豐富,含有組成蛋白質(zhì)的18種氨基酸,和人體所必需的8種微量元素。谷物食品中含量少的賴氨酸,食用菌中含量也相當豐富。食用菌脂肪含量很低,約占干品</p><p>
16、 食用菌母種的篩選具有重要的意義,它關系到后續(xù)的一系列培養(yǎng)以及大規(guī)模生產(chǎn),優(yōu)質(zhì)的母種相比一般有相當大的優(yōu)勢,主要體現(xiàn)在菌絲的生長速度、抗逆性、子實體飽滿程度以及生物學效率等各個方面,研究表明,篩選出的最佳母種在上述各個方面狀況都要優(yōu)于不經(jīng)過篩選的同一菌種?,F(xiàn)在主要篩選最佳母種的方法就是利用不同的配方,觀察菌種在不同培養(yǎng)基上的生長情況,經(jīng)過定量分析后挑選出對該食用菌生長最好的一種培養(yǎng)基或梯度,并將生長在該培養(yǎng)基上的菌種用來作為母種進一步
17、擴大培養(yǎng)。選定一種好的母種可以對其的規(guī)模生產(chǎn)產(chǎn)生巨大影響,使之較一般菌種產(chǎn)生更高的經(jīng)濟價值,目前關于各種食用菌的最佳培養(yǎng)基篩選還在不斷研究中。</p><p> 金針菇、杏鮑菇和靈芝是目前被人們廣泛利用的食用菌,它們具有很高的食用價值和藥用價值,但在實際推廣過程中發(fā)現(xiàn),3種食用菌母種擴繁時對培養(yǎng)基要求嚴格,在應用最廣的PDA上,它們菌絲生長緩慢,菌絲長勢弱,滿管時間長,易污染,易形成無性孢子和出現(xiàn)老化、退化現(xiàn)象
18、。不僅增加了制種難度,而且會影響生產(chǎn)。</p><p> 加拿大一枝黃花(學名:Solidago canadensis L.)是桔梗目菊科的植物,又名黃鶯、麒麟草,是外來生物,由于其根狀莖發(fā)達,繁殖力極強,傳播速度快,生長優(yōu)勢明顯,生態(tài)適應性廣闊,與周圍植物爭陽光、爭肥料,直至其它植物死亡,從而對生物多樣性構(gòu)成嚴重威脅,[8]從綜合開發(fā)利用的角度對此外來入侵雜草進行資源化技術(shù)研究與開發(fā)。本實驗所用的培養(yǎng)基是將P
19、DA中的蒸餾水替換為加拿大一枝黃花浸出液,因為利用加拿大一枝黃花浸提液作為食用菌母種培養(yǎng)基,不僅能節(jié)約資源,還能改善環(huán)境,限制外來入侵雜草的危害以及恢復生態(tài)平衡。而母種在最佳培養(yǎng)基上擴繁是生產(chǎn)上能夠高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的關鍵。因此篩選出最合適的母種培養(yǎng)基不但關系到3種食用菌的母種擴繁和后續(xù)生長,而且對推動我國食用菌發(fā)展和增加農(nóng)民收入具有重要意義。</p><p><b> 材料與方法</b><
20、/p><p><b> 供試材料 </b></p><p> 供試菌株:浙江海洋學院實驗室保存的金針菇、杏鮑菇、靈芝三種菌株。</p><p> 加拿大一枝黃花浸提液:將一枝黃的莖桿用匝刀匝碎,然后浸泡在兩倍重量的蒸餾水中置于電磁爐上煮沸4小時,待冷卻后用兩層紗布濾去莖桿得到浸提液。</p><p> 培養(yǎng)基:PD
21、A培養(yǎng)基,一枝黃培養(yǎng)基:以中得到的浸提液替代PDA培養(yǎng)基中的自來水成分,其他配方與PDA一樣。</p><p><b> 1.2 試驗方法</b></p><p> 1.2.1 母種的活化 </p><p> 將保存在冷藏室中的菌株取出,無菌條件下接種在PDA培養(yǎng)基斜面上,23℃培養(yǎng)5d。</p><p> 1.
22、2.2 培養(yǎng)基配置及滅菌 </p><p> 將土豆去皮切碎后放入搪瓷杯中,倒入蒸餾水置于電磁爐上煮沸20分鐘后用4層紗布過濾2次,得到土豆浸出液,[9]然后用一枝黃浸提液和其調(diào)配成所需要的濃度,分別配置成浸提液含量為0%(PDA)、25%、50%、70%、75%、100%六個梯度的培養(yǎng)基,最后分別加入葡萄糖和瓊脂并煮沸,分裝到錐形瓶中,貼好標簽,放入滅菌鍋在121℃下滅菌4h。同時將培養(yǎng)皿和接種扒用報紙包好置
23、于干燥箱內(nèi)200℃下滅菌30min。</p><p> 1.2.3 接種并培養(yǎng) </p><p> 將滅菌后的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中(倒平板),待冷卻凝固后在無菌條件下把已經(jīng)活化的原種接到培養(yǎng)皿的中心位置上,每種菌株每個梯度接5個培養(yǎng)皿,接完種后用封口膜將培養(yǎng)皿底部封住,防止其因空氣中的雜菌進入而導致污染,最后貼好標簽放入培養(yǎng)箱中,溫度為23℃。</p><p>
24、 1.2.4 測量及統(tǒng)計 </p><p> 每隔24h統(tǒng)計一次菌絲的生長長度,即每次測量時先在培養(yǎng)皿的背面用黑色記號筆劃下菌絲的位置,然后用游標卡尺測量菌絲離接種點的距離并記錄數(shù)據(jù),依此類推下一天測量出的距離減去前一天的便可以得到菌絲每天的生長速度,最后記錄下菌絲長滿培養(yǎng)皿所需要的時間。[10-11]</p><p> 1.2.5 一級菌種篩選 </p><p&g
25、t; 通過縱向比較,從每種菌株中挑選出一種長勢最好的梯度,然后再將其細分成三個次級梯度,并將該梯度培養(yǎng)皿中的菌株接種到新的梯度上,然后重復1.2.4的步驟。[12]</p><p> 1.2.6 一級菌種復篩 </p><p> 從上一步中的三個梯度里繼續(xù)篩選出長勢最好的梯度,并將該梯度中的菌種再接到同梯度新培養(yǎng)皿中。</p><p> 1.2.7 最佳培養(yǎng)
26、基及菌種的獲得 </p><p> 通過測量和統(tǒng)計,記錄下1.2.6中菌絲生長最好的培養(yǎng)基梯度,該梯度的培養(yǎng)基即為母種的最佳培養(yǎng)基,最后經(jīng)過三種菌株的橫向比較,得到一種最適合生長在本試驗所用的加拿大一枝黃浸提液培養(yǎng)基上的菌株。[13-14]</p><p><b> 結(jié)果與分析</b></p><p> 2.1 各菌絲生長狀況分析<
27、/p><p> 2.1.1 金針菇菌絲的生長狀況</p><p> 金針菇菌絲密度適中,菌落邊緣整齊,菌絲較細,氣生菌絲量少,滿管時間相比其他兩種菌株長。在一級菌種篩選中6個梯度的培養(yǎng)基中,金針菇在一枝黃浸出液濃度為50%的培養(yǎng)皿中長勢最好且長滿培養(yǎng)皿所用的時間最短,其菌絲生長長度及日平均生長速率順序為50% > 25% > 70% > 0% > 75% >
28、100%;在一級菌種復篩中3個梯度的培養(yǎng)基中,金針菇在濃度為45%梯度上長勢最好,滿管時間最短,菌絲生長長度及日平均生長速率順序為45% > 53% > 60%,表明金針菇最適合生長在浸出液濃度約為45%的培養(yǎng)基上。結(jié)果如下表:</p><p> 圖2.1 金針菇菌絲平均生長長度 </p><p> Fig.2.1 Flammulina
29、 average growth length</p><p> 圖2.2 金針菇菌絲日生長速率</p><p> Fig.2.1 Flammulina average growth speed</p><p> 2.1.2 杏鮑菇菌絲的生長狀況</p><p> 杏鮑菇菌絲較粗,密度較小,氣生菌絲較多,滿管時間比金針菇短,比靈芝長。
30、在一級菌種篩選6個梯度的培養(yǎng)基中,杏鮑菇在一枝黃浸出液濃度為75%的培養(yǎng)皿中長勢最好且長滿培養(yǎng)皿所用的時間最短,其菌絲生長長度及日平均生長速率順序為75% > 70% > 100% > 50% > 25% > 0%;在一級菌種復篩3個梯度的培養(yǎng)基中,杏鮑菇在濃度為73%梯度上長勢最好,滿管時間最短,菌絲生長長度及日平均生長速率順序為73% > 65% > 80%,表明杏鮑菇最適合生長在浸出液濃度
31、約為73%的培養(yǎng)基上。結(jié)果如下表:</p><p> 圖2.3 杏鮑菇菌絲平均生長長度</p><p> Fig.2.3 Pleurotus average growth length</p><p> 圖2.4 杏鮑菇菌絲日生長速率</p><p> Fig.2.4 Pleurotus average growth speed&
32、lt;/p><p> 2.1.3 靈芝菌絲的生長狀況</p><p> 靈芝菌絲較細,密度較大,菌落厚實,氣生菌絲較多,滿管時間比最短。在一級菌種篩選6個梯度的培養(yǎng)基中,靈芝在一枝黃浸出液濃度為75%的培養(yǎng)皿中長勢最好且長滿培養(yǎng)皿所用的時間最短,其菌絲生長長度及日平均生長速率順序為75% > 100% > 70% > 0% > 25% >50%;在一級菌種復篩
33、3個梯度的培養(yǎng)基中,靈芝在濃度為80%梯度上長勢最好,滿管時間最短,菌絲生長長度及日平均生長速率順序為80% > 73% > 65%,表明靈芝最適合生長在浸出液濃度約為80%的培養(yǎng)基上。結(jié)果如下表:</p><p> 圖2.5 靈芝菌絲平均生長長度</p><p> Fig.2.5 Ganoderma average growth length</p>&l
34、t;p> 圖2.6 靈芝菌絲日生長速率 </p><p> Fig.2.5 Ganoderma average growth speed</p><p> 2.2 三種菌絲長勢橫向比較</p><p> 由表2.7和圖2.7可以觀察到三種菌株在最適濃度培養(yǎng)基下平均生長速度最快的是靈芝,其次是杏鮑菇,最后是金針菇,說明本實驗最適合培養(yǎng)在加拿大一枝黃浸提
35、液培養(yǎng)基上的菌種為靈芝,即80%浸提液培養(yǎng)基上的靈芝為本次篩選出的最佳食用菌母種,[15]將其命名為生科-1號菌種。</p><p> 表2.7 三種菌絲最大平均生長速率比較</p><p> Tab.2.7 Maximum average growth rate of three compared mycelium</p><p> 圖2.7 三種菌絲最
36、大平均生長速率比較</p><p> Fig.2.7 Maximum average growth rate of three compared mycelium</p><p><b> 2.3 本章小結(jié)</b></p><p> 通過記錄三種菌絲在各篩選階段的生長長度和速率可以得出它們各自的最佳母種培養(yǎng)基,[16]金針菇為45%,杏鮑
37、菇為73%,靈芝為80%,然后將在最佳培養(yǎng)基上長出的三種菌絲進行橫向間的比較,結(jié)果表明靈芝的平均生長速率最快,為0.746 cm/d,其次是杏鮑菇,0.679 cm/d,最后是金針菇,0.659 cm/d,它們的滿管時間依次為7天、8天和9天,說明靈芝最適合生長在以加拿大一枝黃花浸提液為原料的培養(yǎng)基上。</p><p> 千萬不要刪除行尾的分節(jié)符,此行不會被打印?!敖Y(jié)論”以前的所有正文內(nèi)容都要編寫在此行之前。&
38、lt;/p><p><b> 小結(jié)</b></p><p> 表5.1 三種菌絲平均生長長度匯總</p><p> Tab.5.1 The average length of hyphal growth of the three summary</p><p> 表5.2 三種菌絲平均日生長速率匯總</p&
39、gt;<p> Tab.5.2 The average speed of hyphal growth of the three summary</p><p> 試驗結(jié)果表明金針菇最佳母種培養(yǎng)基濃度為45%,杏鮑菇為73%,靈芝為80%,三種食用菌菌絲在培養(yǎng)基上生長速度最快的為靈芝,其次是杏鮑菇,最后是金針菇,它們相比傳統(tǒng)PDA培養(yǎng)基上菌絲的生長速度都有明顯提高,尤其金針菇差別最大,其次是杏鮑菇
40、,最后是靈芝,且長出的菌絲抗逆性強,污染率低。因此在培育過程中可以有選擇地使用最適濃度培養(yǎng)基以便在較短的時間內(nèi)獲得最大的經(jīng)濟效益。[17]</p><p> 食用菌生產(chǎn)具有“不與農(nóng)爭時,不與人爭糧、不與糧爭地、不與地爭肥、占地少、用水少、投資小、見效快”等特點,用本文所述方法能把大量有害作物加拿大一枝黃花轉(zhuǎn)化成為可供人類食用的優(yōu)質(zhì)蛋白與健康食品。有害植物的開發(fā)利用是我國當前亟待解決的問題,我國農(nóng)村對其傳統(tǒng)的處理
41、方法帶來了利用率低、礦質(zhì)元素流失嚴重、環(huán)境污染等問題。而利用加拿大一枝黃花栽培食用菌為有害植物的綜合開發(fā)利用開辟了一條最為有效、持久的捷徑。因此用其栽培食用菌成為發(fā)展循環(huán)經(jīng)濟的一項重要措施:一方面可以利用大量的一枝黃花減少資源浪費,另一方面可以通過產(chǎn)出食用菌獲得經(jīng)濟效益,最重要的是減少了環(huán)境污染實現(xiàn)生態(tài)效益。[18-19]</p><p> 由此證明采用加拿大一枝黃浸出液作為培養(yǎng)基原料進行食用菌最佳母種的篩選是
42、可行的,這樣做不僅能加快食用菌絲生長的速度,從而提高生產(chǎn)效率,產(chǎn)生更高的經(jīng)濟價值,而且同時將有害植物加拿大一枝黃花進行了有效地利用,減輕了其對生態(tài)系統(tǒng)的破壞,從而達到保護環(huán)境的目的,因此該方法具有較高的推廣價值。</p><p> 圖5.1 切成小塊的土豆片,為PDA培養(yǎng)基作準備。</p><p> Fig.5.1 Cut into small pieces of potato chi
43、ps, to prepare for the PDA medium.</p><p> 圖5.2 將土豆煮沸后加入瓊脂、葡萄糖,過濾冷卻后得到PDA培養(yǎng)基。</p><p> Fig.5.2 After boiling the potatoes by adding agar, glucose, filter after cooling by PDA medium.</p>
44、<p> 圖5.3 用砸刀把加拿大一枝黃花切成碎末,準備提取浸出液。</p><p> Fig.5.3 Solidago canadensis by smashing into very fine knife, ready to extract leachate.</p><p> 圖5.4 將家拿大一枝黃花放入搪瓷杯中煮沸,過濾后得到浸出液。</p>&l
45、t;p> Fig.5.4 Canada goldenrod into the house enamel cup boiled, filtered leachate obtained.</p><p> 圖5.5 用接種扒在無菌條件下將菌絲接到調(diào)配好的培養(yǎng)基上。</p><p> Fig.5.5 Grilled under sterile conditions in the de
46、ployment of the mycelium received a good medium.</p><p> 圖5.6 接種完畢后用封口膜將培養(yǎng)皿邊緣封住,以防空氣中雜菌進入培養(yǎng)皿。</p><p> Fig.5.6 After inoculation of petri dishes with plastic wrap to seal the edge to prevent ba
47、cteria in the air into the culture dish.</p><p> 圖5.7 對照組即梯度為0%的培養(yǎng)基上三種菌絲生長狀況。(一級菌種篩選)</p><p> Fig.5.7 The gradient of the control group and 0% of hyphal growth medium of the three conditions.
48、(first strain selection)</p><p> 圖5.8 梯度為25%培養(yǎng)基上三種菌絲生長狀況。(一級菌種篩選)</p><p> Fig.5.8 Gradient of 25% of the medium, mycelial growth of three conditions.</p><p> 圖5.9 梯度為50%培養(yǎng)基上三種菌絲生
49、長狀況。(一級菌種篩選)</p><p> Fig.5.9 Gradient of 50% of the hyphal growth medium of the three conditions.</p><p> 圖5.10 梯度為70%培養(yǎng)基上三種菌絲生長狀況。(一級菌種篩選)</p><p> Fig.5.10 Gradient of 70% of th
50、e hyphal growth medium of the three conditions.</p><p> 圖5.11 梯度為75%培養(yǎng)基上三種菌絲生長狀況。(一級菌種篩選)</p><p> Fig.5.11 Gradient of 75% of the hyphal growth medium of the three conditions.</p><p
51、> 圖5.12 梯度為100%培養(yǎng)基上三種菌絲生長狀況。(一級菌種篩選)</p><p> Fig.5.12 Gradient of 100% of the hyphal growth medium of the three conditions.</p><p> 圖5.13梯度為45%、53%、60%培養(yǎng)基上金針菇菌絲的生長狀況比較,45%上的金針菇菌絲長勢最好。(一級菌種
52、復篩)</p><p> Fig.5.13 Gradient of 45%, 53%, 60% medium, the growth of Flammulina Comparison, 45% of the mushroom mycelium growing on the best. (second strain selection)</p><p> 圖5.14 梯度為65%、73%
53、、80%培養(yǎng)基上杏鮑菇菌絲的生長狀況比較,73%上的杏鮑菇菌絲長勢最好。(一級菌種復篩)</p><p> Fig.5.14 Gradient of 65%, 73%, 80% medium, the growth of Pleurotus Comparison, 73% of the mushroom mycelium grow best. </p><p> 圖5.15 梯度為65
54、%、73%、80%培養(yǎng)基上靈芝菌絲的生長狀況比較,80%上的靈芝菌絲長勢最好。(一級菌種復篩)</p><p> Fig.5.15 Gradient of 65%, 73%, 80% medium, mycelium growth status compared to 80% on the mycelium grow best. </p><p> 圖5.16 最后得到三種菌絲各自生長
55、狀況最好的培養(yǎng)基梯度,金針菇為45%,杏鮑菇為73%,靈芝為80%,其中靈芝相比其他兩種菌絲長勢最好。</p><p> Fig.5.16 Finally get the best of three mycelial growth status of each medium gradient, 45% mushroom, mushroom, 73%, 80% Ganoderma lucidum, which c
56、ompared to the other two mycelial fungus grow best.</p><p><b> 參考文獻</b></p><p> 龐茂旺,高霞,郝國芳.秸稈栽培食用菌是發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)的新途徑[N].湖北科</p><p> 技報,2006-09-02:A03.</p><p>
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