中期陳素雨

1、學生姓名： 陳素雨指導老師： 楊金煜專業(yè)學位： 普外科（專業(yè)型）,1,,2014級研究生中期考核報告,,2,主要內(nèi)容,,,,,,01 思想道德 02 課程學習 03 課題及論文發(fā)表 04 臨床工作小結(jié),,3,,,,氧化應(yīng),,4,思想道德,,,,,5,,,,氧化應(yīng),,,,,6,課程學習,,,,,修完學校規(guī)定的所有課程,2014.09-2015.01,,2015.12,,,取得國家職業(yè)醫(yī)

2、師資格證書,,7,,課程學習,,,氧化應(yīng),,8,,,,氧化應(yīng),,課題及綜述,,9,課題名稱,CO2氣腹壓對大鼠重癥急性胰腺炎胰腺病理、腦脊液S-100B蛋白、腦NF-κB表達的影響,,,10,研究背景,重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis SAP）是常見的急腹癥，其病情兇險，發(fā)展迅速，常因并發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS）和多臟器功能障礙綜合征(MODS)而病死率高。SAP免疫炎性細胞產(chǎn)生的眾多炎性因子使

3、遠處器官損傷，出現(xiàn)循環(huán)、呼吸、泌尿和神經(jīng)系統(tǒng)的嚴重損害。1923年Lowll最早報道了急性胰腺炎可并發(fā)精神異常，但直到1941年Rothermich和Haam才首次提出了“胰性腦病(pancreatic encephalopathy, PE)”這個概念。文獻報道國內(nèi)胰性腦病多見于SAP，約占90% 。,,,11,研究目的,,,www.themegallery.com,我們通過動物實驗，建立大鼠重癥急性胰腺炎模型，創(chuàng)建CO2氣腹，動態(tài)觀

4、察腦組織損傷、腦NF-κB的活性、腦脊液中S-100B蛋白的影響，為臨床SAP患者的診斷及治療提供參考。為腹腔鏡在SAP治療中的應(yīng)用提供試驗依據(jù)。,,12,研究內(nèi)容,,,,S-100B蛋白：近來的研究發(fā)現(xiàn)，腦損傷早期腦脊液和血清中的S-100B蛋白的含量和腦損傷的程度呈正相關(guān)，同時由于S-100B半衰期短，如其持續(xù)升高則表明腦組織有持續(xù)性損傷(王成東,武麗麗,王玉亭,等.S-100蛋白與顱腦損傷預(yù)后的關(guān)系.中國臨床神經(jīng)外科雜志,2005

5、.10:25-26.)。S-100B蛋白己成為目前對腦損傷程度、預(yù)后評估預(yù)測的一個靈敏可靠指標。NF-κB:是炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)過程中一個至關(guān)重要的轉(zhuǎn)錄因子，NF-κB的活化可通過激起腫瘤壞死因子-α和白介素-1等促炎因子的表達，近而加重腦損傷。,13,實驗方法,研究對象：健康雄性SPF級SD大鼠；選用健康雄性SPF級SD大鼠60只，周齡6-7周，體重 210±20g,隨機分為3組：假手術(shù)（F）組（20只），重癥急性胰腺炎（SA

6、P）組（20只），SAP+8mmHg（CO2氣腹）組（20只）；,,,,14,實驗方法,,,,大鼠術(shù)前禁食12h,禁水4小時。3%戊巴比妥鈉注射液（2mg/100g體重）腹腔注射麻醉，F(xiàn)組：僅開腹輕柔翻動十二指腸及胰腺后關(guān)腹；SAP組：使用4.5號TB針頭，5%牛黃膽酸鈉（5mg/100g體重）胰腺被膜下均勻注射造模；SAP+8mmHg組：造模后，使用自動氣腹機向腹腔內(nèi)充氣，壓力維持在8mmHg。（大鼠氣腹壓力為5-8mmHg時相當于人

7、體腹腔鏡手術(shù)12-15mmHg參考文獻：Avital S, Itah R, Szomstein S, Rosenthal R, mbar R, Sckornik Y, Weinbroum A.Correlation of C02 pneumoperitoneal pressures between rodents and humans. Surg Endosc. 2009； 23(1):50-54.）；,15,實驗方法,所有大鼠均在3h

8、后處死，采集標本(血液，胰腺組織、腦組織，腦脊液)；a.腦脊液：腹臥位固定消毒，鋪無菌洞巾，俯于三角形棒上用膠帶固定其頭部，使其頭下垂與體位形成45。角，以充分暴露枕頸部。從頭至枕骨粗隆作中線切開2cm，再至肩部1cm，鈍性分離，用虹膜剪剪去枕骨至寰椎肌肉，可見白色硬腦膜。用針在椎骨和寰椎2mm處刺入硬腦膜，抽取腦脊液約50μl-100μl，置于去酶處理凍存管中于-20℃冰箱中，待用ELISA測定S-1OOB蛋白含量。,,,16,實驗

9、方法,b.血液：將抽取腦脊液的后的大鼠仰臥位固定消毒，鋪無菌巾原切口進腹。分離顯露腹主動脈，用lOml無菌注射器抽取動脈血約5-7m1后低溫離心取血清分為2份，取其中1份全自動生化分析儀檢測血淀粉酶，一份置于-20℃冰箱中備用。c.胰腺組織：10%中性福爾馬林溶液固定標本,以備鏡下病理組織學檢查；d.腦組織:將鼠頭自枕骨和寰椎之間切下后剝離腦組織后將其分為4份，1份浸泡10%中型福爾馬林溶液中，以備鏡下病理組織學檢查；1份免疫組化法

10、檢測NF-κB；另2份置于去酶處理凍存管中于液氮罐中保存?zhèn)溆谩?,,17,實驗方法,統(tǒng)計學分析：數(shù)據(jù)以均數(shù)士標準差表示(x士S)，采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對各組數(shù)據(jù)進行均數(shù)差別的檢驗和相關(guān)分析。檢驗水準取0.05，P＞０．０５表示差別無統(tǒng)計學意義，Ｐ＜０．０５表示有統(tǒng)計學意義。,,,18,胰腺病理評分標準,胰腺炎病變程度病理評分（Grewal法）組織 評分標準病變

11、 0 1 2 3 4水腫 無 輕度葉間隙 重度葉間隙 腺泡間隙 細胞間隙增寬 增寬 增寬 增寬壞死 無 壞死面積 壞死面積 壞死面積 壞死面積

12、 30%炎癥 每5個炎癥細胞計0.5分，大于30個計4分 出血 無 有出血 ---- --- --- 水腫+壞死+炎癥+出血=得分,,,技術(shù)路線,,健康雄性SPF級SD大鼠60只,,,3h后處死大鼠，標本采集,,統(tǒng)計學分析,,,,假手術(shù)組（F組）,SAP組,SAP+8mmHg組,,,,,,,,血液（全自動生化分析儀檢

13、測血淀粉酶）,胰腺組織（病理組織學檢查HE染色）,腦組織（HE染色）、免疫組化法檢測NF-κB,腦脊液(ELISA測定S-1OOB蛋白含量),,,,,20,統(tǒng)計方法,采用SPSS 1９.0軟件進行統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)以均數(shù)士標準差表示(x士S)，采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對各組數(shù)據(jù)進行均數(shù)差別的檢驗和相關(guān)分析。檢驗水準取0.05，P＞０．０５表示差別無統(tǒng)計學意義，Ｐ＜０．０５表示有統(tǒng)計學意義。,,,,21,實驗圖片,大鼠

14、 被膜下注射 鈣化 鈣化、出 鈣化、出血、壞死 胰腺HE染色 胰腺HE染色,,,,22,綜述發(fā)表情況,題目：重癥胰腺炎死亡相關(guān)因素的臨床分析已發(fā)表于《現(xiàn)代養(yǎng)生》,,,,23,,氧化應(yīng),課題計劃表,完成實驗,2015年11月-2016年12月完成重癥急性胰腺炎（SAP）造模，氣腹干預(yù)

15、，采集標本，完成胰腺、腦組織病理切片等,數(shù)據(jù)統(tǒng)計,撰寫論文,2016年12月-2017年2月數(shù)據(jù)整理與分析,2017年2月-2017年5月撰寫論文,,24,,,,,臨床工作小結(jié),,25,轉(zhuǎn)科時間安排,2015.03-2016.03 腔鏡外科2016.03-2016.05 肝膽外科2016.05-2016.07 胃腸外科2016.07-2016.09 CT室,,,,在普外科手術(shù)方面，虛心向老師請教，已