常見植物的脫毒與快速繁殖技術(shù)

1、第9章 常見植物的脫毒與快速繁殖技術(shù),植物組織培養(yǎng),本章主要內(nèi)容(4學(xué)時),蔬菜的脫毒與快繁果樹的脫毒與快繁花卉植物的脫毒與快繁農(nóng)作物的脫毒與快繁藥用植物的試管快繁樹木的脫毒與快繁,第9章 常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),(1)掌握馬鈴薯的生物學(xué)習(xí)性，掌握馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的過程以及馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法；掌握番茄的生物學(xué)特性及快速繁殖方法；(2)掌握蘋果的脫 毒方法與快繁技術(shù)；掌握葡萄的脫毒與快技術(shù)；

2、掌握草莓的脫 毒與快繁技術(shù)；(3)掌握蘭花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牽牛、百合等花卉的生物學(xué)特性，組培快速繁殖方法及自然繁殖法；(4)掌握甘薯的生物學(xué)特性，脫毒與快繁的方法及技術(shù)；(5)掌握蘆薈、桔梗等藥用植物的快繁技術(shù)； (6)掌握毛白楊、河北楊等綠化苗木的快繁技術(shù)。,第9章 常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),本章教學(xué)目的與要求,第一節(jié) 蔬菜的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與

3、快速繁殖技術(shù),馬鈴薯,蕃茄,一、馬鈴薯的組織培養(yǎng),第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,微型薯,,,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,馬鈴薯是一種全球性的重要經(jīng)濟(jì)作物。適應(yīng)性廣，營養(yǎng)價值高，耐貯藏適運(yùn)輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調(diào)節(jié)市場供應(yīng)的重要蔬菜。馬鈴薯原產(chǎn)于拉丁美洲，當(dāng)被發(fā)現(xiàn)可以食用后，很快傳到世界各地，成為栽培很廣的一種作物。,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,危害有17種之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花葉病毒、紡錘形塊莖病毒等。

4、 馬鈴薯病毒可使塊莖產(chǎn)量減少50%~80%。,馬鈴薯病毒的種類,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,1、形態(tài)特性根 根系由出生根和匍匐根組成。莖 分地上部分和地下部分。葉 全緣，心臟形。花 為聚傘花序。果實(shí) 漿果。,（一）、馬鈴薯特性和生物學(xué)習(xí)性,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,馬鈴薯性喜冷氣候，不耐高溫和霜凍。發(fā)芽適溫為12~18℃。地上莖葉生長溫度為17~21℃。塊莖形成要求晝溫14~24℃，夜溫12~14℃。結(jié)薯期要求12h左右

5、的短日照和疏松、濕潤、肥沃以及通氣良好的土壤條件。土壤板結(jié)，薯塊表面粗糙和薯形不整。,2、 生物學(xué)習(xí)性,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,通過微莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)能從馬鈴薯體內(nèi)脫除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。,（二）、馬鈴薯脫毒技術(shù),第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,全國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積300多萬公頃，每年需合格種薯45億公斤，脫毒原種4億公斤，脫毒小薯或微型薯45億粒。,我國的馬鈴薯平均單產(chǎn)僅為13.60噸/公頃，是世

6、界單產(chǎn)最高國這瑞士（48.80噸/公頃）的1/4。最主要的因素就是種薯質(zhì)量差，品種布局不合理。,我國馬鈴薯栽培現(xiàn)狀,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,微莖尖組織培養(yǎng)-----誘導(dǎo)出苗-----聯(lián)免疫吸附試驗法或指示植物方法鑒定-----脫毒試管基礎(chǔ)苗。 固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合-----擴(kuò)繁基礎(chǔ)苗----在防蟲網(wǎng)室栽植或封閉溫室扦插-----原原種（或稱脫毒小薯）。原原種----原種1代----原種2代----良種1代-----良種2

7、代。,1．脫毒種薯生產(chǎn)程序,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,（1）莖尖消毒,一般在室內(nèi)發(fā)芽，芽經(jīng)熱處理（38℃）2周。然后取1厘米的莖尖，水洗干凈，無菌條件下先用70％的酒精浸組織15-20秒，再用2％次氯酸鈉溶液浸泡4--5min，然后用無菌水沖洗3次。,2．莖尖培養(yǎng)脫毒,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,把消毒芽在解剖鏡下逐層剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長點(diǎn)，留1-2個葉原基，0.2—0.3毫米，隨即接種于MS液體培養(yǎng)基上，每升加0.1mgNAA 、 0.

8、2mgGA3、0.5BA，2%蔗糖，p H值5.8。,取材和接種,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,溫度：21~25℃光照度：2000-3000 lx光照時間：12h/d 2-3周長愈傷，4-5周長綠點(diǎn)，3--6月長成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。,培養(yǎng)條件：,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,培養(yǎng)成功的馬鈴薯脫毒苗，經(jīng)ELISA（試劑盒）鑒定后（試管苗應(yīng)每3月檢測一次，每年4次）采用固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合方法擴(kuò)繁。 取試

9、管苗單節(jié)切段扦插在（或平放）固體培養(yǎng)基上，每瓶可插20個左右莖段，經(jīng)20d左右發(fā)育成5~10cm高小植株，繼續(xù)進(jìn)行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，試管苗多節(jié)接種在液體培養(yǎng)基上，進(jìn)行淺層靜止液體培養(yǎng)。,（2） 繼代和生根,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸鈣10，3%蔗糖；20-25℃，3000-4000LX，14-16hr光照；每3周繼代一次，單芽莖段約1厘米；原則試管苗用2年—3年。,馬鈴薯繼

10、代培養(yǎng)基：,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,馬鈴薯試管苗,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,煉苗室溫度：白天23~27℃，夜間不低于14℃。煉苗具體方法：移植前7d左右，將長有3~5片葉、高2~3cm的試管苗，在不開瓶口的狀態(tài)下，從培養(yǎng)室移至溫室排好。為防止強(qiáng)光、高溫灼傷試管苗，在溫室頂上加蓋一層黑色遮陽網(wǎng)。,(3) 馴化,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,1、指示植物鑒定在馬鈴薯的病毒鑒定中，汁液鑒定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和紡錘塊狀病毒很容易通過汁液

11、來接種。 2、鑒定寄主的準(zhǔn)備馬鈴薯常用的鑒定寄主植物有莧科的千日紅，茄科的洋酸漿、毛曼佗羅等。寄主植物應(yīng)在無蟲網(wǎng)室中培養(yǎng)。,（三）、馬鈴薯無病毒苗的鑒定材料,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,葉片洗凈后。在消毒的研缽中研成糊狀，用紗布濾出汁液，再用蒸餾水稀釋１０倍作為接種物(混入６００目的金剛砂)。 用左手心緊靠在鑒定寄主植物的背面，以右手指蘸取接種液，均勻的在葉背面擦過，以不造成葉片產(chǎn)生傷痕為度，最后把葉面上多余的接種物用

12、清水洗凈，放置在１５～２４的防蟲室中，一般５－１０天可發(fā)病。,３.接種液制備及接種,第一節(jié) 蔬菜脫毒與快繁,（１） 直接塊莖繁殖（２） 扦插繁殖（３） 組織培養(yǎng)切段繁殖 A：繼代培養(yǎng) B：低溫保存,（四）、馬鈴薯無病毒株的繁殖,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,二、番茄的組織培養(yǎng),（一）、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性,番茄的葉片為長羽狀，在葉軸上生有裂片，頂生裂片，小裂片，間裂片，這些裂片是葉的深裂，

13、缺刻的變化。兩性花，聚傘花序，漿果。蕃茄耐低溫，喜光照，對水分需求量極大，喜肥，適于微酸性或中性土壤。,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,（二）、番茄的組織培養(yǎng),1、外植體：幼嫩葉片 。2、消毒：用0.1%升汞浸泡4min，再用無菌水沖洗3-4次 。3、愈傷組織培養(yǎng)條件：MS + BA2mg/L + IAA1mg/L ，溫度25℃，每天光照10h，光照度2000lx 。4、分化培養(yǎng)：分化培養(yǎng)基MS+BA4中。5、生根培養(yǎng)：MS+IAA2

14、mg/L。6、煉苗栽植：將培養(yǎng)有根試管苗的瓶口打開。煅煉3d后取出，洗去根上帶有的培養(yǎng)基，移栽到營養(yǎng)土中，澆透水，并罩上塑料薄膜，以保溫保濕，4-5d后去掉薄膜，新葉長出時即定植田間。,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,（三）、番茄的胚培養(yǎng),1、外植體制備：授粉后30-40d收獲果皮完整的果實(shí)，果實(shí)放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCI中5min，用無菌蒸餾水充分淋洗。果實(shí)放在無菌吸水紙上，除去種子上的膠狀復(fù)被。 2、培養(yǎng)基：啟動：MS+硫

15、胺素0.3mg/L+2,4-D2mg/L+椰乳100ml/L，pH6.0；繼代： MS+ 2,4-D2mg/L；分化：MS+BA1.5mg/L；生根：MS+NAA2mg/L。 3、培養(yǎng)條件：愈傷組織啟動和繼代，用暗培養(yǎng)，27℃。芽再生和生根在室溫20-30℃.16h/d 的光照，2000lx。,第一節(jié)蔬菜脫毒與快繁,第二節(jié) 果樹的脫毒與快繁,葡萄,蘋果,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),草莓,一、蘋果的脫毒與

16、快繁,（一）、蘋果的形態(tài)特性和生物學(xué)特性,蘋果（Malus pumila）屬落葉喬木，樹木高大。果實(shí)為假果。 蘋果喜涼；喜光；適合在微酸性到中性土壤中栽種。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（二）、脫毒技術(shù),1、病毒種類：蘋果褪綠葉斑病毒、蘋果莖痘病毒和蘋果莖溝病毒等 。2、微尖嫁接脫毒：砧木：去頂?shù)碾x體培養(yǎng)幼苗，接穗：試管培養(yǎng)的無毒新稍；嫁接后培養(yǎng)生葉，移栽即可。3、熱處理脫毒：把植株置于38 ℃下25-50天。4、莖尖培養(yǎng)脫毒：把0.

17、1-0.3mm的莖尖離體培養(yǎng)。5、脫毒苗的鑒定：抗血清法，電子 顯微鏡法，ELISA法、指示植物法。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（三）、蘋果莖尖脫毒快繁技術(shù),1、材料與消毒：帶芽或莖尖的莖段；常規(guī)消毒，用無菌水洗3～5次 ；切莖尖約0.1～0.5mm。 2、芽的誘導(dǎo)：MS或LS+BA2+300～500CH或LH+3%蔗糖的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)芽的分化。3、繼代增殖培養(yǎng)：MS+BA0.5～1+CH300 培養(yǎng)基上增殖。4、生根培養(yǎng)：1/2M

18、S或 White，Nitsh附加IAA1、IBA0.2和GA33 等。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（四）蘋果花粉培養(yǎng),1、選材與預(yù)處理：選取中心花蕾吐紅，周圍花蕾明顯增大，但花序尚未分離的花蕾，置于冰箱中1-3℃預(yù)處理。2、消毒：70%的酒精浸約0.5min，再在10%漂白粉上清夜中浸15～20min。3、胚狀體誘導(dǎo)：接種到MS+2,4-D0.4 + KT0.2 + IAA4 + 3～8%蔗糖培養(yǎng)基上，25～30℃下培養(yǎng)。 4、生根

19、：同莖尖脫毒中所用方法。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（五）胚培養(yǎng),1、取材消毒：取授粉30～50d內(nèi)的幼果，用70%酒精擦拭。取出種子，剝出幼胚或成熟胚。 2、啟動培養(yǎng)：接種在BA0.25+IAA0.5的1/2MS培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為25～30℃和1500～2000lx光照14h。 3、分化增殖：移植到加有BA0.5～1.0和CH300的1/2MS培養(yǎng)基上 ，在光下培養(yǎng)條件同上。4、生根培養(yǎng)：同莖尖培養(yǎng)。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,二、

20、葡萄的脫毒與快繁,（一）、形態(tài)特征和生物學(xué)習(xí)性 葡萄屬落葉木質(zhì)藤本植物，葡萄地上部分的莖細(xì)。節(jié)上具有卷須，可向上攀援。葉近圓型或卵型，3～5裂。 葡萄原產(chǎn)于溫帶地區(qū)，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃時即受凍。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（二）、葡萄的組織培養(yǎng),1、選材接種：從生長旺盛的葡萄新梢頂端取1～2㎝的莖尖。消毒。分離出約2㎜長的莖尖，接種到培養(yǎng)基上。2、培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基（無機(jī)鹽減半為好），再添加B

21、A1～2，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，瓊脂0.6%，而B5培養(yǎng)基愈傷組織化嚴(yán)重，莖尖生長不好。3、苗分化：BA0.5，同時添加GA30.2，黑暗處理可促進(jìn)幼莖的伸成，提高成苗率。 4、根分化：將苗轉(zhuǎn)入MS+IAA0.4+NAA0.05培養(yǎng)基中進(jìn)行生根。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（三）、葡萄無病毒苗的培養(yǎng),葡萄受到26種病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的長勢減弱，產(chǎn)量降低，果實(shí)的糖分含量減少，風(fēng)味變劣。葡萄卷葉病是危害最大的病

22、毒病。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（三）、葡萄無病毒苗的培養(yǎng),1、熱處理脫毒：（1）葡萄無性系處理：材料置于38℃，CO21200×10-6的人工空氣侯箱內(nèi)。經(jīng)30min處理，較易從枝條尖端或休眠芽中除去扇葉病毒。（2）將感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38℃的環(huán)境中保持2個月，以后取出枝條和接種芽繼續(xù)生長。（3） 直接將葡萄蔓浸泡在50℃的 溫水中10～20min，可以治療皮爾斯病，但不能治療黃點(diǎn)病及卷葉病。

23、,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,2、組織培養(yǎng)脫毒技術(shù) （1）、莖尖接種后變綠、增大期的培養(yǎng)：在25℃，相對濕度80%，16h的長日照條件下水培生成的嫩莖取0.2～0.3mm 莖尖接種于 1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，瓊脂6.0，pH5.8培養(yǎng)基上。（2） 從畸形葉和莖葉伸長期：采用1/2MS，添加IAA0.2，BA0.1，KT0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L的培養(yǎng)基。（3）地上部和

24、地下部的伸長期：Galzy（1964）培養(yǎng)基，添加NAA0.1。,（三）、葡萄無病毒苗的培養(yǎng),第二節(jié)果樹脫毒與快繁,三、草莓的脫毒與快繁,（一）、形態(tài)特征和生物習(xí)性草莓（Fragaria）屬多年生草本植物，植株矮小，呈半平臥叢狀生長，基生三出復(fù)葉。果實(shí)為聚合瘦果生于花托上。 草莓喜光但又較耐陰，要求肥沃、疏松、透水、通氣的中性微酸性或微堿性土壤。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（二）、草莓脫毒苗的培養(yǎng),1、熱處理脫毒 將

25、草莓植株在40～41℃溫度下處理4～6周。 2、微莖尖脫毒（1）、初代培養(yǎng) ：取草莓頂芽，用自來水流水沖洗2～4h，然后剝?nèi)ネ鈱尤~片，消毒， 切取0.2mm的莖尖。接入MS + BA0.25 + NAA0.25培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件為22～25℃，日照16～18h光強(qiáng)3000lx。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,（二）、草莓脫毒苗的培養(yǎng),(2) 繼代培養(yǎng)：把芽叢割成芽叢小塊，轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基中，令其長大 。并進(jìn)行分株，擴(kuò)大繁殖。(3) 生根培養(yǎng)

26、：在培養(yǎng)基中加入NAA1或IBA1。,第二節(jié)果樹脫毒與快繁,第三節(jié) 花卉植物的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),一、蘭花的脫毒與快繁,蘭花系蘭科(Orchidaceae)植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無法大量繁殖生產(chǎn)，而且由于長期進(jìn)行無性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（一）蝴蝶蘭屬的培養(yǎng),1、莖尖

27、的培養(yǎng) (1)  取材消毒：將芽除去葉后，用水沖洗，再用10％的漂白粉表面滅菌15min。除去葉原基后，用5％的漂白粉中滅菌l0min，以后用無菌水沖洗3～5次。切取莖尖和腋芽，約2～3mm，接種到培養(yǎng)基中。 (2) 培養(yǎng)基：采用Vacin和Went培養(yǎng)基，添加15％CM進(jìn)行液體培養(yǎng)，或加9g／L的瓊脂進(jìn)行固體培養(yǎng)。    (3)培養(yǎng)條件：為溫度25℃，光照強(qiáng)度2000

28、Lx，照明16～24h。液體培養(yǎng)基用60r／min的速度進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。培養(yǎng)1個月即可形成原球莖球狀體，即可進(jìn)行繼代增殖。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（一）蝴蝶蘭屬的培養(yǎng),2.花梗腋芽的培養(yǎng) (1)采芽：將帶腋芽的花梗進(jìn)行沖洗，用10％的漂白粉溶液表面滅菌20min，除去腋芽的苞葉，再在5％的漂白粉溶液中表面滅菌3min，無菌水沖洗凈。僅取腋芽，接種到培養(yǎng)基上。 (2)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：用德蘭屬1號培

29、養(yǎng)基培養(yǎng)原球狀體，育苗用卡德蘭屬1號加10％香蕉汁；培養(yǎng)條件是光照強(qiáng)度2000Lx，光照時間每天13h，保持恒溫25℃。(3)繼代培養(yǎng)：用原球莖球狀體繁殖。 (4)育苗：不切塊繼續(xù)培養(yǎng)即可分化產(chǎn)生葉片，移到育苗的培養(yǎng)基，3～6個月可得到能栽植的苗。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（一）蝴蝶蘭屬的培養(yǎng),3.葉片的培養(yǎng)：(1)取材：葉片是從試管內(nèi)培養(yǎng)的材料上切取。取展開葉最上部先端、中央或基部約6～8mm

30、2 。(2)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：用 Kyoto改良培養(yǎng)基，加復(fù)合肥料3.5g／L、肌醇1000、煙酸1、維生素B11、NAAl、腺嘌呤10、BAl0、蔗糖2％、瓊脂1.0％。 25℃恒溫，光照500Lx,日照16h。 (3)繼代培養(yǎng)：用改良的Kyoto培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，或在Vacin和Went培養(yǎng)基中去掉蔗糖和瓊脂，加20％的CM的液體培養(yǎng)基進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。 (4)育苗：原球莖球狀體2～3個月即可萌芽，形成細(xì)苗，以后轉(zhuǎn)移到Kyoto

31、培養(yǎng)基，加10％的香蕉汁，經(jīng)數(shù)月后可得到能移f栽的大苗。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、卡特蘭的培養(yǎng),1.取材和消毒：選擇5～10cm長的嫩莖，從基部采芽。先用流水沖洗，切去葉片酒精，漂白粉等消毒。2.培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：MS基本培養(yǎng)基，附加維生素，氨基酸，NAA0.186mg／L，Kt0.02mg／L，GA30.173mg／L，蔗糖30g／L，瓊脂6g／L，不加CM。啟動培養(yǎng)溫度15～20℃，成活

32、以后，則保持在25℃。光照強(qiáng)度500-2000Lx，照明16～22h。3.防止培養(yǎng)材料變褐方法：(1)采芽后，用無菌水沖洗再接種 (2)  在培養(yǎng)基中加(50～100)×10-6蕓香甙。 (2)  開始培養(yǎng)到成活，保持溫度15～20℃。 (4) 調(diào)pH值至5.5，減輕褐化，提高成活率。 (5)避免6～8月采芽（由于多酚類物質(zhì)的積累，褐化較嚴(yán)重）。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁

33、,二、香石竹的組織培養(yǎng),香石竹為石竹科石竹屬草本植物，原產(chǎn)南歐地中海北岸。須根系，莖直立，多分枝，株高70～100cm，莖部半木質(zhì)化。葉線狀披針形，全緣，葉質(zhì)較厚，上半部向外彎曲，對生，基部抱莖?；ㄍǔ紊?～3朵聚傘狀排列。 石竹是一種中日性花卉。喜干燥、通風(fēng)，，喜冷涼，最適宜的生長溫度為19～21℃，忌高溫多濕。喜保肥、通氣、排水良好的腐殖質(zhì)或砂質(zhì)壤土，最適宜的土壤pH值為6～6.5。,（一）形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性

34、,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、組織培養(yǎng)育苗,1、取材滅菌： 取長勢健壯植株上較為粗壯的嫩芽，剝?nèi)コ墒烊~片，在清水中清洗后，常規(guī)消毒，切取0.3-0.4mm的莖尖。2、培養(yǎng)基：選用MS或White培養(yǎng)基。附加BA或KT 0．5～2mg／L(單位下同)；NAA、IAA濃度為0．2～2，2,4-D為0.1～1。3、分化增殖： 于MS附加BA2，IAA0.5進(jìn)行分化；于MS附加BA0.5～2、IAA0

35、. 5進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)。4、生根：于1/2MS上，溫度20～25℃，光照強(qiáng)度20001x．光照10～12h/d。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,三、菊花的組織培養(yǎng),菊花系多年生植物，株高60-180cm，莖直立粗壯，多分枝。葉形大，互生，葉片有深缺刻?；ㄐ騿紊蚓凵吘墳樯酄罨?，中部為筒狀花，也有全為舌狀或筒狀花的，形狀各異，種子為細(xì)小的瘦果，中間膨大，兩端突出。 適宜的生育溫度為15-

36、25℃，喜陽光充足，通風(fēng)良好，在光照條件下生長健壯。比較耐旱，不耐潮濕，忌低洼積水。秋菊、冬菊為典型的短日照植物，只有光照長度在12h以下時才能開花,（一）形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、菊花的組織培養(yǎng)快速繁殖,1、取材：外植體很多，如莖段、側(cè)芽、葉、花序梗、花序軸等，但最好采用莖尖或側(cè)芽，其次是花序軸。經(jīng)一般 滅菌過程后即可接種。 2、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：MS、B5、N6、Wh

37、ite 均可，多用MS。附加BA2～3mg／L，NAA0．02～0．2mg／L。 于22～28℃（24～26℃最佳）。光照12～16h/d，光強(qiáng)1000～4000Lx。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、菊花的組織培養(yǎng)快速繁殖,3、繼代培養(yǎng) ：可通過莖尖直接分化出新芽，或經(jīng)愈傷組織分化出新芽；也可用莖切段作微型扦插繁殖（MS或MS+NAA0.1） 。 4、生根和移栽 ：將無根幼苗轉(zhuǎn)入1／2 MS+NA

38、A(或IBA)0.1的培養(yǎng)基中，經(jīng)兩周即可生根（培養(yǎng)條件同上） 。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（三）、菊花花瓣的培養(yǎng),1、取材：在菊花開花前2～3d將整個花蕾剪下，沖洗十幾分鐘，用75％的酒精浸泡10～15min進(jìn)行表面滅菌，后用無菌水沖洗兩次，再用10％的漂白粉澄清液浸泡20min后。切取舌狀花約5mm見方大小 。 2、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：MS培養(yǎng)基，添加BAl～3mg/L，NAA0.5～2mg／L。

39、置于溫度25℃左右，光照強(qiáng)度2000Lx，每天照光12h的條件下培養(yǎng)，或獲得愈傷組織。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（四）、菊花的脫毒,危害菊花的病毒有：①菊花斑紋病毒；②菊花矮縮類病毒；③菊花輕斑駁病毒；④番茄不孕病毒。此外還有畸花病毒、綠花病毒、褪綠斑駁病毒、花葉病毒等。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,1、莖尖培養(yǎng)脫毒：取頂芽或腋芽經(jīng)表面消毒后，切取0.5mm以下莖尖進(jìn)行

40、培養(yǎng)脫毒。 2、熱處理脫毒：在35～36℃的條件下栽培2個月，可以達(dá)到脫毒的效果（但是熱處理只能除去菊花矮縮類病毒和番茄不孕病毒）。,四、非洲菊的組織培養(yǎng),非洲菊(Gerbera hybrida)屬菊科大丁草屬，多年生宿根草本花卉。全株具細(xì)毛，葉片基生，橢圓至長橢圓形。花序頂生，舌狀花較大，排列成一輪或數(shù)輪。 非洲菊性喜冬季溫和，夏季涼爽的氣候條件。最適生長溫度為20～25℃。4～5月和8～10月為盛花期。喜陽光充足的環(huán)境。

41、土壤要求有機(jī)質(zhì)豐富、排水良好、pH值為6～6.5的微酸性壤土。,（一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、非洲菊組織培養(yǎng)育苗,1、取材消毒：常用花托作為外植體，用0.1％的吐溫浸泡10～15min，取出洗凈后再放入0.1％氯化汞中消毒20min。將花托切成2-3mm見方的小塊。 2、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：初代培養(yǎng)基為MS+BA2mg／L(單位下同)十NAA0.2 + IAA0.2。培

42、養(yǎng)條件為24土2℃，光照強(qiáng)度為2000～30001x，每天光照12～16h。3、分化生根：轉(zhuǎn)入MS+Kt5+IAA0.2培養(yǎng)基進(jìn)行分化培養(yǎng)。待苗高2cm時，轉(zhuǎn)移到I／2 MS 十 NAA0.1生根培養(yǎng)基中生根。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,五、矮牽牛的組織培養(yǎng),矮牽牛(Petunia bybrida)，又名碧冬茄，茄科，矮牽牛屬。多年生草本植物，株高40～60cm，莖直立或臥倒，全身被短毛。上部葉片對生

43、，中下部葉片互生，卵圓形?；▎紊谥敾蛉~腋間，花冠喇叭狀，花色豐富，朔果卵形。矮牽牛原產(chǎn)南美洲。喜溫暖，向陽和通風(fēng)良好的環(huán)境條件，不耐寒，耐暑熱，在炎熱的夏季仍能正常開花，要求排水良好疏松的酸性沙質(zhì)土地。,（一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、矮牽牛組織培養(yǎng)育苗,1、葉片培養(yǎng) ：選擇嫩葉作為外植體，進(jìn)行常規(guī)消毒后將其切成5mm見方，接種到MS + BA0.5的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈

44、傷組織及叢生芽。所得芽叢接種于MS+BA0.05的繼代培養(yǎng)基上。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,2、莖尖莖段接種：選擇莖尖、帶芽的莖段作為外植體。消毒后，切取莖尖0.5cm或帶腋芽莖段lcm接種到MS+BA1+IBA0.02的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。1周后，芽開始萌動，逐漸長大成新梢。繼代可用切割莖段法進(jìn)行。,六、百合的組織培養(yǎng),百合是百合科(Liliaceae)百合屬植物的統(tǒng)稱，為多年生的草本植物。鱗莖無皮，廣卵形

45、，白色或黃白色，莖高30～90cm，直立，上葉多而散生，披針形。花單生或數(shù)花橫向著生莖頂，花朵呈喇叭狀、筒狀，有清香。百合屬于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以利于鱗莖發(fā)育。百合喜微酸性土壤，土壤pH值在5.5～6.5最為適宜。,（一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,（二）、繁殖方法,1、分球：使用百合老鱗莖(母球)生長過程中于莖軸上逐漸形成小鱗莖 進(jìn)行繁殖。2、鱗片扦

46、插：使用成熟鱗葉進(jìn)行扦插。3、葉插及分珠芽：使用地上莖進(jìn)行扦插，或使用腋生珠芽進(jìn)行繁殖。 4、播種。,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,1、花器的組織培養(yǎng)(1) 、取材和滅菌：采取開花前數(shù)日的花蕾?；ɡ俚谋砻嬗镁凭珳缇?，再在酒精燈上灼燒數(shù)秒鐘，在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)剝開花蕾，花絲，子房，花柱等分別切取3～5mm長，接種到培養(yǎng)基上。也可用花瓣和萼片培養(yǎng)。(2) 、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件：采用MS，K

47、C等培養(yǎng)基，蔗糖濃度以7.0％為適，發(fā)芽和子球形成率可達(dá)90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保溫20℃。,（三）、百合組織培養(yǎng)育苗,第三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,2、鱗片組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng)：切取0.5cm見方鱗片小塊接人MS+2,4-D1+IAAI+Kt0.5培養(yǎng)基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光強(qiáng)1200Lx條件下培養(yǎng)。 誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽。,（三）、百合組織培養(yǎng)育苗,第

48、三節(jié) 花卉植物的 脫毒與快繁,繼代培養(yǎng)：將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基（MS + NAA2 + IBAO.4 + Kt0.05）上，10周后，可分化出許多大小不等的鱗莖，并在小鱗莖的基部長出許多粗壯的根。,第四節(jié) 農(nóng)作物的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),一、甘薯的脫毒與快繁,甘薯（Ipomoea batatas L. Lam）屬于旋花科，是一年生植物。我國近年來甘薯種植面積

49、達(dá)到666.7萬公頃，占世界的80%以上。病毒病成為我國甘薯生產(chǎn)的最大障礙之一。 如：甘薯花椰菜花葉病毒（SPCLV），甘薯羽狀斑駁病毒（SPFMV），甘薯潛隱病毒（SPLV），甘薯脈花葉病毒（SPVMV），甘薯輕斑駁病毒（SPMMV），甘薯黃矮病毒（SPYDV），煙草花葉病毒（TMV），煙草條紋病毒（TSV），黃瓜花葉病毒（CMV）等。,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,（一）、甘薯脫毒,1、取材：

50、取枝條，去葉切成數(shù)段。每段帶一個腋芽。2、消毒：常規(guī)消毒。3、剝離莖尖：剝?nèi)ロ斞亢鸵秆可陷^大的幼葉，切取0.3-0.5毫米含1-2個葉原基的莖尖組織，接種在培養(yǎng)基上。4、莖尖培養(yǎng)培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基為MS+0.1-0.2mg/L IAA+0.1-0.2mg/L BA ；培養(yǎng)于溫度25-28℃，光照度1500-2000lx，光照14h/d的條件下。5、莖尖苗的初級快繁：將小植株切段進(jìn)行短枝扦插。切段直插于MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件

51、同莖尖培養(yǎng)。 6、脫毒鑒定：病毒病癥狀學(xué)診斷法、指示植物檢定法、電子顯微鏡檢定法、血清學(xué)檢測法,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,（二）、甘薯的快繁,1、脫毒苗的快繁：可使用1/2或1/4MS（大量元素）培養(yǎng)基進(jìn)行增殖。 2、原原種的繁育 ：在無病毒土壤上種脫毒苗，讓其結(jié)薯，即為原原種薯 。3、原種的繁育 ：以原原種為種植材料在無病毒土壤中栽種，結(jié)薯即為原種。4、種薯的繁育 ：種薯可分為不同的等級，一級種

52、薯的生產(chǎn)要求：在隔離地塊上栽培原種，地塊四周500米以內(nèi)的范圍內(nèi)不栽甘薯，種薯每種一年降一級。,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,（三）、脫毒試管苗的大規(guī)模移栽技術(shù)及管理方法,1．培育壯苗 2．適當(dāng)煉苗 3．精心移栽 4．控制濕、溫、光等條件 5．適時定植 6．嚴(yán)防病蟲害,第四節(jié) 農(nóng)作物的 脫毒與快繁,第五節(jié) 藥用植物的試管快繁,第9章常見植物的脫毒 與

53、快速繁殖技術(shù),一、蘆薈的試管快繁,百合科蘆薈屬植物共有300多種，為多年生常綠植物，分布于熱帶和來熱帶地區(qū)。由于蘆薈具有多種藥用功效和保健美容作用，近年來，蘆薈產(chǎn)業(yè)已經(jīng)在國內(nèi)外成為新的開發(fā)熱點(diǎn)。 蘆薈植株生長數(shù)年后才開花結(jié)實(shí)，種子一般也很少，而且種子細(xì)小，又不耐保存，存放一年后發(fā)芽率就很低。 生產(chǎn)上常用的扦插和分株法都不能在短時間內(nèi)提供大量種苗。因此，只有通過組織培養(yǎng)快繁方法，才能生產(chǎn)出大小一致、性狀穩(wěn)定的優(yōu)良

54、種苗。,第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,一、蘆薈的試管快繁,1．初代培養(yǎng)物的建立：采用莖段和腋芽作為外植體 ，以MS為基本培養(yǎng)基，NAA為0.2mg/L，BA3-5mg/L 2．取材與消毒 ：截取上端嫩芽或側(cè)芽，將生長點(diǎn)切成1-2cm的小塊，沖洗干凈，然后用2%洗潔精或飽和洗衣粉搖動5分鐘。然后用70%的酒精滅菌1分鐘，立即用0.15%升汞溶液再滅菌10分鐘。最后用無菌水沖洗4-5次。 3．培養(yǎng)條件：溫度

55、26±3℃，光照10-12h/d，照度為1000-1500lx，空氣濕度大，有利蘆薈生長。,第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,二、桔梗的組織培養(yǎng),桔梗為桔?？茖俣嗄晟荼局参铩Ｖ旮?0～90cm。根肥大肉質(zhì)，圓錐形，莖直立，葉片卵狀至卵狀披針形，先端尖，基部楔形或近圓形，邊緣有不規(guī)則鋸齒，花單生或數(shù)朵成疏生的總狀花序；花冠呈狀，藍(lán)紫色或白色，大型，直徑3～5cm。蒴果倒卵圓形，成熟時先端裂開。

56、 桔梗喜歡生長在陽光充足，溫暖濕潤，雨量充沛的丘陵地區(qū)。,（一）、形態(tài)特性和生物學(xué)習(xí)性,第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,（二）、桔梗的快繁,１、 播種：用種量0.5-1公斤/畝，播后畦面蓋稻草保濕。播后半月左右即可發(fā)芽出苗。 ２、 組織培養(yǎng)：一般用莖尖和莖段作為外植體，接種和培養(yǎng)方法參照其他作物的方法。 ３、 移栽：桔梗喜肥，生長期間宜多施追肥，一般結(jié)合中耕除草時追肥。第一次畝施稀淡人畜糞廢水10

57、00－1500公斤，第二次畝施豬烘水1500－2000公斤，促進(jìn)根部生長肥大，注意雨季排水。,第五節(jié) 藥用植物的 試管快繁,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,第9章常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),一、毛白楊的快繁,1、無菌苗的建立 采用休眠芽作外植體，經(jīng)消毒后，削取2mm長，帶有2~3個幼葉的莖尖 ，接種于MS + 0.5mg/LBA + 水解乳蛋白100mg/L的預(yù)培養(yǎng)基上，經(jīng)5~6d后，選

58、擇未污染的莖尖轉(zhuǎn)MS + 0.5mg/LBA + 0.02mg/LNAA + 賴氨酸100mg/L上。 培養(yǎng)室溫度25~27℃,日光燈連續(xù)照光，光照度為1000lx左右。經(jīng)2~3個月培養(yǎng)，部分莖尖即可分化出芽。,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,一、毛白楊的快繁,2、擴(kuò)大繁殖 （1）莖切段生芽擴(kuò)大繁殖法：取誘導(dǎo)出的幼芽，從基部切下，轉(zhuǎn)接到新的生根培養(yǎng)基上。（MS + 0.25mg/L IBA + 鹽酸硫胺素10mg/L + 蔗糖濃度

59、為1.5%）。 （2）葉切塊生芽擴(kuò)大繁殖法：從葉基部中脈處切取1~1.5cm²并帶有約0.5cm長葉柄的葉切塊，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上（MS+0.25mg/L IAA+3%蔗糖+7%瓊脂）。約經(jīng)10d培養(yǎng)，即可從葉柄的切口處觀察到有芽出現(xiàn)，之后逐漸增多成簇。,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,一、毛白楊的快繁,3、移栽與管理：打開瓶口煉苗，逐漸降低濕度，并逐漸增強(qiáng)光度，進(jìn)行馴化，使新葉逐漸形成蠟質(zhì)，產(chǎn)生表皮毛，逐漸恢復(fù)氣孔功能，減少水分

60、散失。初始光照應(yīng)為日光的1/10,每3d增加10%，經(jīng)過10～30d煉苗即可移入大田，避免中午強(qiáng)光。濕度，開始3d飽和濕度，其后每2～3d降低5%～8%，直到與大氣相同。,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,二、河北楊的快繁,1、無菌苗的建立 （1）取材 以春季萌發(fā)的新梢或由根部萌發(fā)的新枝條作為外植體來源。截取嫩枝上部4~5cm作為接種材料。（2）消毒、接種及培養(yǎng)條件 以70%的酒精消毒數(shù)秒，再用0.1%~0.2%的氯化汞消毒5~10min

61、，然后用無菌水沖洗3~4次。材料接種后置于25±2℃培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，每天用日光燈照明13h，光照度為2000~3000lx。（3）芽的分化 培養(yǎng)基是1/2MS大量元素+MS微量元素+0.3mg/L BA+0.05mg/L NAA+2.5%蔗糖+0.5%瓊脂，pH5.8。,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,二、河北楊的快繁,2.擴(kuò)大繁殖 采用分割帶芽愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)基為1/2MS大量元素+MS微量元素+MS有機(jī)成分+0.

62、3mg/L BA+2%蔗糖+0.6%瓊脂。3.根的誘導(dǎo) 當(dāng)不定芽長至2~3cm高時，將其轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上（1/2MS大量元素+MS微量元素+MS有機(jī)物+0.02mg/L NAA+1.5%蔗糖+0.06%瓊脂）。4.移栽管理,第六節(jié) 樹木的脫毒與快繁,(1)馬鈴薯莖尖培養(yǎng)脫毒程序：①取材；②消毒；③接種；④培養(yǎng)基；⑤病毒鑒定。病毒鑒定方法主要有指示植物法、癥狀鑒定法。      &#

63、160;   (2)蘋果花粉培養(yǎng)階段組成：①選取適期花蕾；②花蕾預(yù)處理和消毒；③誘導(dǎo)胚狀體形成；④誘導(dǎo)生根；⑤移栽。(3)蘋果的栽培管理要注意幾個問題：①育苗技術(shù)；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉時期；⑤整形和修剪技術(shù)。(4)葡萄莖尖培養(yǎng)經(jīng)過下列變化：莖尖接種后變綠，增大期；形成畸形葉期；芽形成和伸長期；形成小葉和葉伸長期；生根期；地上部和地下部伸長期；上盆期.(5)在葡萄栽培棚架是應(yīng)用最廣泛的類型。

64、,本章小結(jié)：,第9章 常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),(6)草莓脫毒苗的培養(yǎng)主要有微莖尖培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)兩種。一般用嫁接法進(jìn)行病毒鑒定。無毒苗的繁殖程序分為五步：鑒定出無毒苗、原種種苗培養(yǎng)、原種種苗繁殖、良種種苗繁殖和生產(chǎn)用苗繁殖。(7)蝴蝶蘭脫毒：莖尖培養(yǎng)——原球莖——繼代培養(yǎng)——增殖——生根煉苗。通過原球莖增殖的方法，可大大提高繁殖速度，實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭生產(chǎn)的工廠化育苗。(8)香石竹的莖尖脫毒培養(yǎng)一般結(jié)合熱處理

65、：將帶毒植株進(jìn)行盆栽，放入人工控制箱內(nèi)，采用38-40℃高溫處理6-8周，再切1mm大小的莖尖培養(yǎng)。,本章小結(jié)：,第9章 常見植物的脫毒 與快速繁殖技術(shù),(9) 菊花的繼代增殖，多數(shù)是誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生叢生芽而獲得大量的試管苗。菊花生根有兩種方法：嫩莖試管生根；無根嫩莖的扦插。(10)百合經(jīng)莖尖培養(yǎng)脫毒、鑒定合格后，可通過兩種增殖方式：①經(jīng)愈傷組織增殖；②是誘導(dǎo)分化不定芽。 (11) 侵染甘薯的病毒有十幾種，