微粒子病概況

1、微粒子病概況 家蠶微粒子病（ Pebrine disease ）是微粒子原蟲(chóng)寄生而引起的蠶病，是蠶桑生產(chǎn)上危害嚴(yán)重而又長(zhǎng)期得不到根治的一種病害。 歷史上曾給歐洲、日本、中國(guó)等世界主養(yǎng)蠶國(guó)家的蠶業(yè)生產(chǎn)以毀滅性的打擊。我國(guó)元代司農(nóng)司王盤(pán)編寫(xiě)的《農(nóng)桑輯要》（1273年）中已有記載關(guān)于該病的病征以及淘汰病蛾、選留完好“蠶種”，目的是“惟在謹(jǐn)謀于始，使不為后日之患也?！碑?dāng)時(shí)稱它為“灰頭病”。在19世紀(jì)中期，法國(guó)養(yǎng)蠶業(yè)受到一種嚴(yán)重的蠶病危害，由

2、于這一打擊，它的產(chǎn)繭量由二千萬(wàn)千克，下降到六百萬(wàn)千克?？墒钱?dāng)時(shí)不知到底是什么病，更不知道致病的病原物究竟是什么東西，但是由于它所表現(xiàn)的一般癥狀，皮膚上有散狀不規(guī)則的小黑斑點(diǎn)，就象在蠶體表上撒了一層胡椒沫似的，所以當(dāng)時(shí)就流行地俗稱它是“胡椒病”（法國(guó)南部的方言，稱胡椒為 Pebrine ）。所以英語(yǔ)中最早就用Pebrine一字來(lái)表示微粒子?。蝗毡咀钤绶Q它是“黑痣病”。后來(lái)知道它體內(nèi)有微粒子，德國(guó)人稱為 Korperchen ，就是微小粒子

3、的意思，到1883年由日本人練木喜三正式譯為“微粒子病”，這樣?xùn)|方人就統(tǒng)一了這名稱。,19世紀(jì)后期，法國(guó)的蠶絲業(yè)由于逐年嚴(yán)重蠶病危害而瀕臨破產(chǎn)。1845年微病在法國(guó)的de Vancleuse省爆發(fā)，隨后蔓延至意大利及其它歐洲國(guó)家。這樣法國(guó)開(kāi)始從亞洲購(gòu)種，主要是日本。到19世紀(jì)末期，該病就在全世界流行。由于蠶繭量的驟減，1865年法國(guó)各省的養(yǎng)蠶家聯(lián)合署名向政府請(qǐng)求減稅，要求推進(jìn)蠶病科學(xué)的研究。當(dāng)時(shí)正享有盛名的化學(xué)家 巴斯德（louis P

4、asteur) 受政府委托于著手Pebrine研究，取得了巨大成果，從而拯救了幾乎毀滅的法國(guó)蠶桑業(yè)。隨后法國(guó)、日本、印度、中國(guó)等養(yǎng)蠶國(guó)家進(jìn)行了微粒子病的一系列的研究，為預(yù)防和治療微粒子病積累了大量經(jīng)驗(yàn)，由19世紀(jì)大多數(shù)蠶業(yè)國(guó)危害率的20%下降到目前的1%水平。 我國(guó)勞動(dòng)人民在實(shí)踐中亦積累了不少防微經(jīng)驗(yàn)，制定了一系列的預(yù)防措施。1929年開(kāi)始，首先在江蘇、浙江等省成立蠶種取締所，負(fù)責(zé)對(duì)蠶種生產(chǎn)、檢驗(yàn)等的監(jiān)督管理工作。特別是建國(guó)以

5、來(lái)，在黨和政府大力發(fā)展蠶桑生產(chǎn)、重視蠶業(yè)科學(xué)研究、對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)進(jìn)行了一系列改革，建立了完善的原蠶繁育制度、監(jiān)管制度等，從而有效地控制了本病的危害。于1986年將該病列入農(nóng)牧漁業(yè)部動(dòng)物檢疫所《動(dòng)物檢疫》目錄，明確為口岸檢疫對(duì)象。但是近年來(lái)，在我國(guó)廣大的蠶區(qū)蠶種場(chǎng)又有流行的傾向，微粒子病發(fā)生覆蓋率達(dá)87%。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，1991年全國(guó)因微粒子病損失蠶種157萬(wàn)張，淘汰率8.65%，1992年淘汰201萬(wàn)張，淘汰率7。34%。比廣東全省一年用種

6、還多，光四川省1991年就損失40萬(wàn)張，95年僅江蘇省在春蠶期因微粒子病發(fā)生而使生產(chǎn)損失近一億元人民幣，可見(jiàn)該病在我國(guó)又有死灰復(fù)燃之勢(shì)。對(duì)此，我們必須引起足夠重視，并加以防患。1989年農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)司在“八五”期間專門(mén)成立了防微指導(dǎo)小組，國(guó)家把防治微粒子病研究列為“八五”攻關(guān)課題，并在“九五”攻關(guān)研究中仍在繼續(xù)探討防微研究。,家蠶微粒子病病原分類(lèi)學(xué)位置 原生動(dòng)物界（kingdom） 原生動(dòng)物亞界 微孢子蟲(chóng)門(mén)（ phylum Mic

7、rospora Sprague ，1977） 微孢子蟲(chóng)綱（ class Microsporea Dephy ，1963） 微孢子蟲(chóng)目（ Order Microsporida Balbiani ，1882） 無(wú)多孢子膜亞目（ Apansporoblastina ） 微粒子科（ Nosematidae Labbe ，1899） 微孢子蟲(chóng)屬（ Genus Nosema Naegeli ，1875） 學(xué)名： Species Nose

8、ma bombycis Naegeli .1875；簡(jiǎn)稱 N.b,微粒子孢子的穩(wěn)定性 發(fā)育溫度為10～35℃，孢子發(fā)育適溫是20～30℃之間，10℃以下或35℃以上孢子都不發(fā)育。接種后在2ds內(nèi)保護(hù)在40℃48hr，沒(méi)有新孢子形成，而從第3天開(kāi)始即形成耐熱性的發(fā) 育階段，停止高溫后即有新孢子形成。孢子對(duì)環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力。如在干燥的母蛾體內(nèi)保護(hù) 3 年仍有感染致病能力；在水中浸5個(gè)月仍有活力；被雞、豬等食下，從其糞便中排出的孢子仍有

9、很強(qiáng)的感染力。對(duì)理化因素的穩(wěn)定性如表1。,表1 微粒子孢子對(duì)理化因素的穩(wěn)定性 條件處理 濃度（%） 溫度（℃） 失活時(shí)間 日光 / 39～40 7h 干熱 / 110 10min 濕熱 / 100 10min 煮沸 / 100 5min 福爾馬林 2 （甲醛） 25 40min 漂白粉 1 (有效Cl) 25 30min 克孢靈 100ppm(ClO2) 25

10、 5min(孢子不變形),,微孢子生活史 微粒子病的病原是一類(lèi)原生動(dòng)物。它的生活周期有孢子，芽體，裂殖子，孢子芽母細(xì)胞等不同發(fā)育階段。其中孢子階段能在普通光學(xué)顯微鏡下清楚觀察而其它發(fā)育階段則是在寄主的細(xì)胞內(nèi)，需經(jīng)特殊染色處理或在電鏡下才能觀察到。 1、孢子: 在微孢子蟲(chóng)綱里孢子的形態(tài)各屬不同，寄生家蠶里的具褶孢子蟲(chóng)屬M(fèi)27，M32是卵圓形或長(zhǎng)卵圓形，大小為3.6～3.8×2～2.3um，其大小在一定范圍內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。但

11、由于寄主發(fā)育階段及寄生部位不同而有差異。在光學(xué)顯微鏡下觀察活的孢子，孢壁均勻、光滑，呈強(qiáng)折光性，而呈現(xiàn)淡綠色，比重為1.3～1.35。 各屬孢子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)基本相似，有孢膜、孢質(zhì)，具1或2個(gè)核、極絲、極體等。 ① 孢子壁： 又稱皮膜或被殼，表面光滑，厚約0.5um。分三層，即外膜、中間膜及內(nèi)膜。外層及內(nèi)層較薄，中層較厚，含幾丁質(zhì)。 ② 孢子原生質(zhì)： 在成熟孢子的中央有一腰帶狀的原生質(zhì)，具有兩個(gè)核（2n染色體），其前后端各有一個(gè)空泡

12、，原生質(zhì)含有DNA及RNA。,③ 極囊： 包括極帽、極絲和極體。在孢子前端的孢子壁與極帽連接，象一個(gè)錨的樣子。極絲一端從極帽伸出，繞過(guò)孢子原生質(zhì)而達(dá)到孢子后部，以傾斜的螺旋狀纏繞12～13圈。極絲另一端與孢子原生質(zhì)連接。此外，極囊中還含有極體和空泡。 ④ 極絲： 一條中空的細(xì)長(zhǎng)管，長(zhǎng)70～130um，為孢子的10～30倍，在電鏡下可觀察到橫切面有兩個(gè)不同密度電子云的層次，表明它是中空的。孢子原生質(zhì)在成熟孢子的中央，呈腰帶狀，具雙核（

13、結(jié)合核染色體為2n）。當(dāng)孢子被敏感宿主吞食后，極絲從前端的極帽處迅速外翻。極絲很堅(jiān)硬，外翻后可穿過(guò)宿主的圍食膜和中腸上皮。同時(shí)孢質(zhì)通過(guò)空心的極絲管?chē)姵?，因此極絲有如一根接種針，注射孢質(zhì)到宿主細(xì)胞內(nèi)，使孢質(zhì)不受宿主消化管中消化液的影響，安全地進(jìn)入新的區(qū)域。這種極絲外翻現(xiàn)象又稱之為發(fā)芽。（見(jiàn)圖） ⑤ 孢子發(fā)芽： 當(dāng)活孢子進(jìn)入桑蠶消化道，受堿性消化液作用，迅速吸收水分而膨脹，依靠壓力將極絲彈出，同進(jìn)孢子原生質(zhì)迅速地通過(guò)中空的極絲而釋放出來(lái)

14、。當(dāng)孢子原生質(zhì)的核結(jié)合為一時(shí)稱芽體。發(fā)芽后的孢子成為空殼，光澤消失而稍凹陷。人為地用化學(xué)物質(zhì)處理孢子如H2O2、鹽酸、硝酸、醋酸、碘液、蠶消化液、堿液或涂片后經(jīng)干濕處理后加蓋壓片即可誘導(dǎo)發(fā)芽。,⑥ 極體（polaroplast） 是一極薄的片狀結(jié)構(gòu)，它在孢子的前端，圍繞著極絲基部，按Hunger和Varra意見(jiàn)，極體是一個(gè)膨脹的胞器，極體吸收水分，可提供極絲外翻時(shí)孢子的內(nèi)壓力。 2、芽體（planont） 孢子發(fā)芽后釋放出孢子原生質(zhì)

15、，稱芽體，又稱游走體、浮游體。圓形，大小0.5～1.5um。具單核、無(wú)膜、有折光性，含豐富的DNA。侵入中腸上皮細(xì)胞的芽體即可在其中定位，并分裂形成有膜的裂殖子。侵入體腔的芽體可直接寄生于血細(xì)胞，并在其中形成“感染細(xì)胞”，進(jìn)行二次感染其他組織器官的病原。 3、裂殖子（Meront） 芽體侵入寄主細(xì)胞后即行定位，形成被膜，稱裂殖子。卵圓形，大小為1.5～3um。吉姆薩氏染料染色則核染成紅色，細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)色。裂殖體有多種酶以分解寄主細(xì)胞

16、中的養(yǎng)分并加以吸收利用。以二分裂法增殖，可見(jiàn)到呈啞鈴狀的分裂過(guò)程，具雙核，分裂后形成孢子芽母細(xì)胞。有人認(rèn)為裂殖子要經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂才能形成孢子芽母細(xì)胞。,4、孢子芽母細(xì)胞 具雙核，能形成肥厚被膜，由于收縮運(yùn)動(dòng)與寄主細(xì)胞質(zhì)分離，進(jìn)一步分化成多層的孢子壁，出現(xiàn)極囊及極絲等內(nèi)部結(jié)構(gòu)，最后單個(gè)地形成孢子。 抗芽體單克隆抗體能與浮游在體腔內(nèi)的芽體樣游走體發(fā)生反應(yīng)，但抗孢子抗體不與游走體發(fā)生反應(yīng)。 孢子芽母細(xì)胞內(nèi)部構(gòu)造出現(xiàn)了原始高爾基體。在整個(gè)發(fā)育階

17、段缺少線粒體，僅有核糖體和若干膜系統(tǒng)。 由于孢子形成過(guò)程中電子密度較高，難于進(jìn)行固定和包埋，不易觀察。佐藤（1982）改良固定法，克服了這些困難，據(jù)他們觀察認(rèn)為，成熟的孢子也是雙核，從孢子形成到再形成芽體這一階段沒(méi)有核合體存在（指雙核細(xì)胞采取連核排列的形式）。 在組織培養(yǎng)的微粒子原蟲(chóng)，可以仔細(xì)觀察到它的發(fā)育周期及再感染的過(guò)程。家蠶微粒子病病征 微粒子病是目前唯一發(fā)現(xiàn)能感染家蠶各個(gè)發(fā)育階段的一種慢性病，感染時(shí)期不同，可出現(xiàn)不同的病

18、征及病變。群體的癥狀是：蠶大小不勻，發(fā)育不齊，多遲眠蠶及半脫皮蠶。輕癥病蠶一般能上蔟、結(jié)繭、化蛹及羽化產(chǎn)卵。 （一） 蠶期的病征 小蠶期的癥狀：經(jīng)卵傳染的蟻蠶，收蟻后經(jīng)3d仍不疏毛，體色深暗，體軀瘦小，發(fā)育緩慢。重病者一齡中死亡，輕者可延到二至三齡，但絕不能發(fā)育到四齡。蟻蠶食下感染，病征大致同上，但多出現(xiàn)遲眠蠶或不眠蠶。,二至三齡感染，在大蠶期發(fā)病，其癥狀有“起縮蠶”：4～5齡蠶起蠶后發(fā)病，在各齡響食后，表皮縮皺，體呈銹色。“半脫皮

19、及不蛻皮蠶”：眠蠶中發(fā)病，由于蠶體質(zhì)虛弱，蛻皮困難而成為半蛻皮或不蛻皮蠶，也有死于眠中。“不結(jié)繭蠶”：熟蠶后期發(fā)病，多數(shù)不能結(jié)繭，病蠶在蔟中徘徊，不吐絲，倒掛在簇上死去或?yàn)椤皰煳残Q”，或漫然吐絲，結(jié)不正形繭或薄皮繭，也有的成為落地蠶及裸蛹。尸體不易腐爛變色。尸體萎縮，多呈銹色。壯蠶發(fā)病，有些可能在病蠶表皮上可見(jiàn)到黑褐色小病斑，狀似胡椒，成“斑點(diǎn)蠶”。病斑的顯現(xiàn)，與品種有關(guān)，歐系品種最為明顯，國(guó)內(nèi)現(xiàn)行二化性品種比較模糊，多化性品種較少見(jiàn)。

20、 （二） 蛹、蛾期的病征 病蛹的表皮無(wú)光澤，反應(yīng)遲鈍，腹部松弛，有的體壁上出現(xiàn)大小不等的黑斑。病情輕的較健康蠶羽化早，但病程重的，大多成死籠繭，即使能蛹化，但羽化遲緩。 病蛾外觀的病征：大肚蛾，是常見(jiàn)的病蛾之一，腹部膨大，體伸長(zhǎng)，節(jié)間膜松馳，甚至可透視到內(nèi)部的卵粒；拳翅蛾，羽化后長(zhǎng)期不能展翅，或展開(kāi)不全，有時(shí)翅上生出水泡或有若干黑斑；禿蛾，病蛾羽化時(shí)鱗毛易脫落，胸、腹部光禿無(wú)鱗毛，有時(shí)腹部鱗毛成片地變成焦黃色。病蛾交配能力差，

21、產(chǎn)卵不正常，卵粒較小。但病勢(shì)輕的與正常蛾不易區(qū)別。 （三） 卵的病征 重病蛾產(chǎn)的卵，卵形不整齊，大小不一，排列不齊，有重疊卵，產(chǎn)附差，容易脫落，不受精卵及死卵多。點(diǎn)青、轉(zhuǎn)青期參差不一，孵化不齊，遲出的卵發(fā)病率較高。病卵往往引起漿膜細(xì)胞異常，卵色變淡，這些卵多在催青中死亡。有病卵雖發(fā)育成蟻蠶，但不能孵化或孵化途中死亡。輕癥病蛾所產(chǎn)的卵與正常卵無(wú)差異。但是在后期感染蠶，都看不到病征，羽化、交尾、產(chǎn)卵均正常。,家蠶微粒子病病變 微粒子

22、原蟲(chóng)可通過(guò)消化道而感染，除幾丁質(zhì)的外表皮，氣管的螺旋絲及前、后部消化管壁外，能侵入蠶體各種組織器寄生，如消化管、血細(xì)胞、肌肉、脂肪、馬氏管、氣管、絲腺、生殖腺及體壁等組織。解剖病蠶，觀察各組織的病變?nèi)缦拢?1、 消化管 微粒子孢子在消化管內(nèi)發(fā)芽，侵入消化管上皮細(xì)胞后在其中繁殖，在消化管上出現(xiàn)斑點(diǎn)或黑點(diǎn)的病斑。感染細(xì)胞內(nèi)充滿孢子，腫大，乳白色突出管腔。最后破裂，孢子散逸，隨糞便排出。病勢(shì)漸進(jìn)消化管功能減退。 蠶食下孢子2～3天，在中腸

23、前部與后部首先出現(xiàn)少量分散黑褐色胡椒狀斑點(diǎn)，比病原孢子形成提前4～6天。第3～4天斑點(diǎn)數(shù)量增多，并部分連成團(tuán)塊，色澤加深，第5～6天黑斑團(tuán)塊數(shù)量增多，面積擴(kuò)大，并開(kāi)始向中腸全域擴(kuò)展，此時(shí)肉眼可見(jiàn)。第7～8天黑斑團(tuán)周緣逐漸乳白、繼而潰爛，第9～10天黑斑消失，中腸組織乳白糜爛。蠶的前腸與后部末見(jiàn)有黑斑形成。最后上皮細(xì)胞破裂，孢子散逸，隨糞排出。 2、 馬氏管 被寄生的馬氏管壁細(xì)胞呈乳白色或淡黃色，形成許多點(diǎn)狀的小突起，象增加許多彎曲，

24、并引起尿酸的排泄障礙。也有出現(xiàn)馬氏管與中腸壁愈合。 3、 絲腺 前、中、后部的絲腺細(xì)胞均可被寄生，寄生后形 成乳白色膿泡狀的斑塊，肉眼可見(jiàn)，可作為確診該病的依據(jù)之一。絲腺內(nèi)腔充滿液狀的絲蛋白，不適于微粒子的寄生。絲腺被寄生后，喪失分泌絹絲物質(zhì)的能力。因此，重癥微粒子病蠶多不結(jié)繭或僅結(jié)薄皮繭。,4、 體壁 微粒子原蟲(chóng)侵入蠶體壁及真皮細(xì)胞后，在其中形成孢子，使真皮細(xì)胞形成空洞，膨脹而破裂。在這過(guò)程中受到血液中顆粒細(xì)胞的包圍，形成褐斑，這

25、些褐斑常被新生的真皮細(xì)胞填補(bǔ)覆蓋，形成一個(gè)囊狀物。實(shí)際上這是蠶的一種防御機(jī)能，將微粒子原蟲(chóng)圍困而消滅之。因此，在蠶體外表看到許多胡椒狀的小褐斑，這種病斑可因蛻皮而消失。舊皮殼殘存有孢子，成為新的傳染源。 5、 生殖細(xì)胞 微粒子原蟲(chóng)能侵染卵巢外膜、卵母細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞；睪丸外膜及精母細(xì)胞等，是造成經(jīng)卵傳染的根源。 6、血細(xì)胞 主要侵染顆粒細(xì)胞、原血細(xì)胞及漿細(xì)胞。經(jīng)接種后48～72h可在血細(xì)胞內(nèi)形成裂殖子，4～8d后形成孢子。用吉姆薩

26、氏染料染色，可以觀察到微粒子原蟲(chóng)侵染的過(guò)程及細(xì)胞病變。被寄生的血細(xì)胞表現(xiàn)為著色性減退，體積增大，直徑可達(dá)32～54um。由于血細(xì)胞的崩潰和懸浮的孢子使血液混濁。7、 肌肉組織 在肌肉組織的裂殖子是沿著肌纖維的方向寄生的。組織內(nèi)的肌質(zhì)大部分被融化形成空洞，最后僅有一些離散的肌核及肌鞘。肌肉附近的結(jié)締組織同樣受到破壞。因此，病蠶行動(dòng)遲緩、呆滯，體軀瘦小，萎縮。 8、 脂肪組織 被寄生的脂肪組織膨大變形，組織間連絡(luò)松馳甚至崩潰，這也是

27、造成血液混濁的原因之一。,家蠶微粒子病致病過(guò)程 經(jīng)口進(jìn)入消化管的活孢子，受消化液的刺激而發(fā)芽，彈出極絲，在極體的擠壓下，將孢質(zhì)彈出孢外，進(jìn)入中腸上皮細(xì)胞或體腔，其中進(jìn)入中腸上皮細(xì)胞內(nèi)即定位，進(jìn)行分裂增殖，最后形成孢子。 進(jìn)入體腔的孢質(zhì)被膜包圍形成芽體，可直接寄生于血球，并在其中形成所謂“感染細(xì)胞”，短極絲孢子進(jìn)行二次感染（又稱之為二次感染體），成為其它組織器官的病原。芽體進(jìn)入組織細(xì)胞后，即為裂殖體，它不能轉(zhuǎn)移到另一細(xì)胞，直接進(jìn)行

28、分裂，形成孢子體、孢子芽乃至形成孢子。 微粒子原蟲(chóng)的致病作用，主要是奪取蠶的養(yǎng)分。,傳染來(lái)源 微粒子原蟲(chóng)的傳染來(lái)源比較廣泛，包括: 1、病蠶、蛹、蛾的尸體及病卵； 2、排泄物，如蠶糞、熟蠶尿、蛾尿； 3、脫離物，如病卵殼、蛻皮殼、鱗毛及蠶繭等。其中孢子分散傳播各處，成為傳染來(lái)源。 4、患病的野外昆蟲(chóng)亦是重要的傳染來(lái)源。桑園等處的害蟲(chóng)如野蠶、桑螟、桑尺蠖、紅腹燈蛾等與家蠶微粒子孢子蟲(chóng)能互相傳染，也是主要的傳染來(lái)源。 1

29、978年據(jù)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)蠶桑系調(diào)查，從桑園等處采集害蟲(chóng)近7萬(wàn)頭，進(jìn)行微孢子鏡檢，其檢出率達(dá)3.5%。這些野外昆蟲(chóng)患病尸體、排泄物、泄出物污染桑葉而傳染給家蠶。 日本廣瀨安春等（1969～1979）對(duì)102種25000頭昆蟲(chóng)進(jìn)行檢查，結(jié)果在65種昆蟲(chóng)中檢出了微粒子蟲(chóng)，其中有12種昆蟲(chóng)的微孢子蟲(chóng)可以感染家蠶，有2種昆蟲(chóng)的三種微孢子蟲(chóng)可以胚種傳染。1957年Hungary（匈牙利）Machay認(rèn)為蠶室周?chē)?0種以上鱗翅目昆蟲(chóng)可感染家蠶微孢子蟲(chóng)。

30、自然界微孢子蟲(chóng)存在復(fù)雜的廣泛交叉感染網(wǎng)。 1995～1997年，廣東蠶研所在廣東翁源、曲江、仁化、韶關(guān)、清遠(yuǎn)、羅定、德慶、化州、湛江及廣州地區(qū)等地捕捉近萬(wàn)頭389種野外昆蟲(chóng)，從44種昆蟲(chóng)中分離到微孢子蟲(chóng)，并確認(rèn)其中10種昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)蠶有食下和胚種傳染，另有三種有食下傳染，但未證實(shí)有否胚種傳染。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，在檢毒時(shí)，每個(gè)視野發(fā)現(xiàn)一粒孢子，則這只病蛾就有50萬(wàn)粒孢子，能引起超過(guò)5萬(wàn)頭蟻蠶或5千頭四令起蠶發(fā)病。,傳染途徑 微粒子病的傳染途

31、徑主要是食下傳染和胚種傳染兩種。 1、 食下傳染 分卵殼傳染和桑葉傳染兩種方式。 ①卵殼傳染：在蠶卵殼表面因粘附有微粒子孢子，當(dāng)蟻蠶孵化時(shí)，咽下附有孢子的卵殼而感染。 ②桑葉傳染：蠶食下被微粒子孢子污染的桑葉而染病。在養(yǎng)蠶過(guò)程中傳染的機(jī)會(huì)很多，除了蠶室、蠶具及桑室等消毒不徹底而造成食下傳染外，也可通過(guò)桑園患病的害蟲(chóng)尸體、排泄物、脫離物等污染桑葉被蠶食下傳染；此外把未經(jīng)堆漚腐熟的病蠶糞直接施用于桑園供作肥料時(shí)，其中的微孢子污染

32、桑葉；水源被微粒子孢子污染而用于桑園抗旱用水或作為桑葉補(bǔ)濕用水被蠶食下傳染等。食下傳染既危害普通絲繭育蠶，也危及蠶種生產(chǎn)。,2、 胚種傳染（經(jīng)卵傳染） 是本病傳染的特點(diǎn)，也是主要的傳染途徑。雌蠶在四至五齡感染本病，就有造成胚種傳染的可能。 胚種傳染的途徑：雌蠶感染微粒子病后，其芽體隨血液侵入卵巢膜或包卵膜的上皮細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而侵入卵管中的卵原細(xì)胞。隨著蠶的發(fā)育，卵原細(xì)胞由一個(gè)分化為一個(gè)卵細(xì)胞和七個(gè)滋養(yǎng)細(xì)胞，（見(jiàn)圖）在這個(gè)過(guò)程中，微孢子可寄

33、生于卵細(xì)胞或滋養(yǎng)細(xì)胞，也可同時(shí)寄生二種細(xì)胞，因此，會(huì)出現(xiàn)以以下三種不同的寄生情況： （1）有病的卵細(xì)胞吸收有病的滋養(yǎng)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)。這種卵最終不能形成胚子，而成為不受精卵或死卵。 （2）有病的卵細(xì)胞吸收無(wú)病的滋養(yǎng)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)。這種卵也不能形成胚子，而成為不受精卵或死卵。 （3）無(wú)病的卵細(xì)胞吸收有病的滋養(yǎng)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)。這種卵有進(jìn)一步發(fā)育的可能，也會(huì)導(dǎo)致胚種傳染的發(fā)生。而能否發(fā)生胚種傳染，則要看病原進(jìn)入胚子的時(shí)期。從卵產(chǎn)下直到胚子的形成

34、過(guò)程中遭到病原感染（即發(fā)生期感染），這些胚子不能再繼續(xù)發(fā)育，而成為死卵；當(dāng)胚子發(fā)育到反轉(zhuǎn)期后，寄生在卵黃球的微粒子原蟲(chóng)隨養(yǎng)分進(jìn)入胚子的消化道即經(jīng)臍孔而感染，這樣的卵孵化出的蟻蠶則成為經(jīng)卵傳染的個(gè)體。同一病蛾所產(chǎn)的卵中，以遲產(chǎn)出的卵感染率高。,發(fā)病規(guī)律 1、感染與發(fā)病期： 染微粒子病的發(fā)病期因感染的方式不同而異。胚種傳染的蟻蠶在1～3齡期發(fā)病，最長(zhǎng)不能發(fā)育到4齡（但也有少數(shù)在5齡期發(fā)病的）；蟻蠶至2齡期感染，發(fā)病期因感染的程度而異，僅

35、食下少量孢子可發(fā)育到4齡，少數(shù)可上簇，但多數(shù)在蔟中死蠶或僅結(jié)薄皮繭。因此1～2齡蠶感染對(duì)絲繭育影響大；4～5齡期感染，一般能正常發(fā)育、營(yíng)繭、羽化、交配和產(chǎn)卵，而成為胚種傳染來(lái)源，所以這時(shí)期感染對(duì)種繭育的威脅極大。 2、蠶座內(nèi)感染規(guī)律： 1）微粒子病是一種慢性蠶病，蠶在患病過(guò)程中形成大量孢子，隨糞便排出或粘附在脫皮殼中，污染蠶座，造成蠶座內(nèi)的再感染。 由經(jīng)卵傳染的蟻蠶排出的孢子，可傳染給一至二齡健蠶，稱為第一期感染。第一期感染

36、的蠶能正常發(fā)育到三至四齡，從四齡前開(kāi)始排出孢子，又被其它健康蠶食下而感染，稱為第二期感染。第二期感染的病蠶，能正常上蔟，營(yíng)繭以至化蛾，但產(chǎn)下的卵成為經(jīng)卵傳染的來(lái)源。,2）蠶座內(nèi)感染的程度與混育病蠶的數(shù)量有關(guān)。早期即使混入小量病蠶，但由于混育時(shí)間長(zhǎng)，傳染機(jī)會(huì)增加，損失將會(huì)更大。據(jù)調(diào)查，在收蟻時(shí)混入3%的病蠶，到熟蠶時(shí)發(fā)病率可達(dá)50～60%，如延續(xù)到發(fā)蛾后檢查，將會(huì)全部染病，無(wú)法制種。由此可見(jiàn)，該病蠶座內(nèi)感染的嚴(yán)重性。 3）蠶感染微粒子

37、病發(fā)病率的高低，因蠶品種、發(fā)育時(shí)期及飼育環(huán)境不同而異。中國(guó)系統(tǒng)的蠶種對(duì)微粒子病抵抗力較強(qiáng)，歐洲系統(tǒng)的蠶種對(duì)微粒子病抵抗力最弱，日本系統(tǒng)的蠶種對(duì)微粒子病抵抗力介于兩者之中；（中國(guó)系>日本系>歐洲系），多化性品種抗病力較強(qiáng)，一化性品種較弱，二化性品種介于其中。小蠶、起蠶及餓蠶易感染，發(fā)病率高。病蠶以眠起蠶排出的孢子數(shù)最多；飼育環(huán)境濕度大、蠶座潮濕，蠶容易食下被污染的殘桑而增加傳染的機(jī)會(huì)。反之，濕度低、蠶座干燥，殘桑易凋萎，減少食

38、下傳染的機(jī)會(huì)。 高溫對(duì)微粒子病有一定的抑制作用。據(jù)試驗(yàn)證明，用漸進(jìn)催青法，蛹期高溫處理，蠶卵溫湯浸種，熱空氣和高溫鹽酸處理微粒子病卵均能降低發(fā)病率。,微粒子病的診斷 （一）肉眼鑒定 患微粒子病的蠶、蛹、蛾、卵都出現(xiàn)病征。蟻蠶疏毛期長(zhǎng)，體軀瘦小，遲眠遲起，群體大小發(fā)育不齊，大蠶期體軀縮小，無(wú)光澤呈銹色，常有褐色病斑。本病的病斑和煤灰斑、桑毛蟲(chóng)螫傷癥病斑不同，要注意區(qū)別。病蛹的反應(yīng)力弱。病蛾鱗毛易脫落成禿蛾，焦尾蛾；不受精卵、死卵多。

39、但這些癥狀并不是本病特有的，在蠶期必須結(jié)合解剖檢查絲腺有無(wú)乳白色膿瘡、中腸有否出現(xiàn)斑點(diǎn)才能確診。 （二） 顯微鏡檢查 有無(wú)微粒子孢子是確診的依據(jù)。檢查卵或蟻蠶可取整體；病蠶、蛹、蛾可取血液、消化管或腹部。用1%氫氧化鈉研磨，制成臨時(shí)標(biāo)本鏡檢（600×）。 鏡檢時(shí)成熟孢子為卵圓形，不成熟孢子為梨形或紡綞形。折光性強(qiáng)，呈淡綠色，邊緣整齊，常沉在標(biāo)本的下層。 鏡檢時(shí)若混入與微粒子孢子相類(lèi)似的花粉、真菌孢子等，可用藥物及染色加以區(qū)別

40、。如加入碘液，可使花粉被染成紫色；加入30%鹽酸或硝酸，在27℃放置10min，則微粒子孢子變形消失，真菌孢子形狀不變，是因其纖維素的細(xì)胞壁能抵抗酸的腐蝕。 （三）血清學(xué)診斷 為了將與微粒子病病原以外的微孢子蟲(chóng)類(lèi)孢子區(qū)別開(kāi)來(lái)，可用抗微粒子孢子的血清來(lái)診斷，分三類(lèi)： 1、 凝集反應(yīng) ：玻片凝集、乳膠凝集、炭素凝集反應(yīng)。 2、 標(biāo)記抗體技術(shù)的診 斷：熒光抗體法、酶標(biāo)抗體法。 3、 單克隆抗體的酶標(biāo)抗體法 ：酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA

41、）、直接Indirect-ELISA法、Direct-ELISA法、IGSS法等。 （四）分子生物學(xué)診斷 核酶探針?lè)?、PCR法（聚合酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)）、核酸序列分析。,微粒子病的預(yù)防 微粒子病的發(fā)生和蔓延與蠶體質(zhì)、病原體及環(huán)境條件三者有密切關(guān)系。在生產(chǎn)過(guò)程中企圖以單一的防治措施來(lái)達(dá)到防病的目的是不可能的。經(jīng)過(guò)多年的實(shí)踐證明，在掌握該病發(fā)病規(guī)律的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同地區(qū)和不同季節(jié)，針對(duì)發(fā)病的主要矛盾，將各種防治方法和養(yǎng)蠶技術(shù)結(jié)合起來(lái)，采取綜

42、合防治措施，才能收到預(yù)期效果。 一）制造無(wú)毒蠶種是防止胚種傳染、消滅本病為害的根本措施。 1、 母蛾檢查 。母蛾鏡檢是發(fā)放無(wú)毒蠶種的重要關(guān)卡，越是高一級(jí)的制種越要嚴(yán)格。原原種、原種參制的母蛾均全部入蛾盒，經(jīng)處理后進(jìn)行顯微鏡檢查。方法是：將產(chǎn)卵后的母蛾根據(jù)蠶種批號(hào)對(duì)號(hào)入蛾盒或蛾袋中，在120°F～140°F（約48～60℃）的高溫下，經(jīng)6～7hr殺蛾。絕對(duì)避免超過(guò)180oF（約82℃）以上高溫，保持通風(fēng)干燥，防止發(fā)

43、霉，以免影響微粒子病的檢出率。雜交種實(shí)行隨機(jī)抽樣，抽取代表性的參制母蛾進(jìn)行檢查。廣東省近年已全面推廣集團(tuán)檢查，每批母蛾鏡檢完畢后，統(tǒng)計(jì)該批毒率，對(duì)照蠶種監(jiān)管條例要求，原原種0.2%，原種0.4%，普通種1%（外省0.5%），超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的全部淘汰。在毒率許可范圍內(nèi)的要將有毒蛾所產(chǎn)的病卵或整張蠶種剔除或淘汰。廣東生產(chǎn)的是平附種，檢到N.b后則整張?zhí)蕴馐〉纳a(chǎn)的是散卵，故很可能是帶標(biāo)準(zhǔn)毒率以下微粒子的合格蠶種。,2、 補(bǔ)正檢查 一般只對(duì)原

44、原種和原種進(jìn)行補(bǔ)正檢查，是對(duì)經(jīng)母蛾檢查后，可能出現(xiàn)差錯(cuò)，為了慎重起見(jiàn)，可取原種卵檢查。方法是： ①提前催青檢查 每蛾區(qū)挖取10～20粒卵，對(duì)號(hào)貼在紙上，注明品種、批次后，提早用較高的溫度（28～30 ℃）、80%相對(duì)濕度催青，促進(jìn)早孵化，將孵化后的蟻蠶分區(qū)進(jìn)行鏡檢。如發(fā)現(xiàn)N.b（微粒子）孢子，按監(jiān)管條例處理。 ②卵殼鏡檢 利用孵化收蟻后的卵殼進(jìn)行鏡檢，發(fā)現(xiàn)N.b孢子的應(yīng)立即淘汰。 3、 預(yù)知檢查 是確切掌握原蠶飼育中有無(wú)微粒子病的

45、發(fā)生和及早確定該批種繭是否能夠制種的方法，它對(duì)減少經(jīng)濟(jì)損失和防止病原擴(kuò)散等都有積極作用。主要是對(duì)遲眠蠶、發(fā)育不良蠶、死蘢繭和促進(jìn)化蛾檢查。其方法主要有遲眠蠶檢查和促進(jìn)化蛾檢查兩種。 A、遲眠蠶檢查：在原蠶飼養(yǎng)中，將各齡各區(qū)的遲眠蠶、發(fā)育不正常蠶、半蛻皮蠶等按區(qū)號(hào)入盒，保護(hù)溫度29℃，相對(duì)濕度90～95%的高溫多濕環(huán)境中（1～3齡小蠶每區(qū)抽取遲眠蠶10～15頭，大蠶時(shí)每區(qū)取5～8頭），待自然死亡后檢查，如發(fā)現(xiàn)微粒子孢子的區(qū)號(hào)，應(yīng)立即淘汰

46、，同時(shí)對(duì)用過(guò)的蠶具等進(jìn)行徹底消毒，嚴(yán)防病原蔓延傳播。根據(jù)微粒子病發(fā)生和流行情況以及本批次蠶生長(zhǎng)發(fā)育情況，有必要時(shí)還需對(duì)落地蠶或死蘢繭等進(jìn)行檢查。檢查方法可與遲眠蠶相同，若發(fā)現(xiàn)微粒子，應(yīng)視情況將繭燒毀或烘干作絲繭處理。 B、促進(jìn)化蛾檢查：蠶發(fā)育到蛾期，微粒子病原體已充分繁殖，而形成孢子體，易于檢出。故檢查蛾體是比較準(zhǔn)確的，但實(shí)踐證明，一般促進(jìn)化蛾檢查，病毒檢出率卻很低，只有母蛾檢查時(shí)病毒率的1／3左右。促進(jìn)化蛾檢查目的是決定該批種繭能否

47、制種。其方法是從各飼養(yǎng)批中取早熟蠶約100頭，放在小簇中營(yíng)繭，用27～29℃，80～85%相對(duì)濕度中保護(hù)，這樣比大批蠶種提早2～4天出蛾，發(fā)蛾后每批逐蛾鏡檢，如發(fā)現(xiàn)有毒批次，可根據(jù)病率決定是否制種。,二）嚴(yán)格消、防毒，防止食下傳染 食下傳染是微粒子病的重要傳染途徑，蠶座內(nèi)感染是本病主要的傳染形式。四、五齡蠶期感染是胚種傳染來(lái)源。必須根據(jù)這些規(guī)律對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境、蠶室、蠶具、桑室等以及蠶體蠶座進(jìn)行認(rèn)真嚴(yán)格的消毒，建立以消滅微粒子孢子為中心的綜

48、合防治體系。根據(jù)目前消防毒的水平，強(qiáng)調(diào)要做好以下幾方面的工作： 1、消毒藥物的選擇。目前生產(chǎn)上使用的消毒藥物繁多，針對(duì)本病病原的特點(diǎn)，最好使用漂白粉（1%）、次氯酸鈉（0.5～1%）、克孢靈（50ppm），有條件的的可選用福爾馬林（2%）等。無(wú)論選用那種藥物進(jìn)行消毒都必須達(dá)到一定濃度和依照正確的操作規(guī)程，才能達(dá)到消滅病原的目的。 2、嚴(yán)格消防毒。妥善處理好病蠶、病蛾、病蛹及蠶沙的堆放，及時(shí)消除桑園害蟲(chóng)，以防止傳染蔓延。同時(shí)要防止蠶座

49、內(nèi)傳染，堅(jiān)決淘汰遲眠蠶和弱小蠶，經(jīng)常用漂白粉防僵粉、復(fù)方蠶座凈等消毒藥進(jìn)行蠶體蠶座的消毒，把消毒防病工作貫徹到養(yǎng)蠶全過(guò)程。 3、加強(qiáng)專業(yè)村、專業(yè)戶以及專用桑園的建立，推廣江浙提倡的“三專一遠(yuǎn)”（即專室、專具、專人、小蠶室要遠(yuǎn)離大蠶室、蔟室）的養(yǎng)蠶制度。廣東則提倡共同催青、小蠶共育及大小蠶分養(yǎng)的制度。這些措施都獲得良好的防治效果。 4、蠶卵溫水浸種是廣東省蠶區(qū)沿用的方法，對(duì)預(yù)防不同化性蠶品種的微粒子病發(fā)生有一定效果。在產(chǎn)卵后經(jīng)自然溫度

50、保護(hù)7～10h，將蠶卵放入53.3～55.5℃ 的溫水中浸10～15s，取出后涼干，這樣能抑制微粒子原蟲(chóng)，減輕發(fā)病率。,三）治療技術(shù) 1、 化學(xué)藥物治療 煙曲霉素、苯來(lái)特(Benomlyt)、托布津、7313（1-H-2，1、4-苯并噻二嗪-3-氨基甲酸甲酯）、7323（4-（鄰-胺基苯基）-3-硫脲基甲酸甲酯）以及多菌靈（苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯）等對(duì)微粒子病均有較好的治療效果。目前生產(chǎn)上推廣應(yīng)用的是以多菌靈為主劑的防微靈。在5

51、00～700ppm范圍內(nèi)添食，對(duì)1～4齡蠶感染N.b的，防治效果達(dá)100%，5齡第1～2天添食仍有較好的治療效果，到5齡第3天后添食，治療效果為37～50%。它主要是抑制家蠶微孢子蟲(chóng)裂殖體的分裂增殖。 2、 物理方法治療 ①溫湯浸種：主要對(duì)預(yù)防多化性蠶品種的微粒子病發(fā)生有一定效果，方法是：產(chǎn)卵后經(jīng)自然溫度保護(hù)7～10小時(shí)，將蠶卵放入53.3～55.5℃的溫水中浸10～15秒鐘，以上方法均能抑制微粒子原蟲(chóng)，減輕發(fā)病率。 ②熱空