過(guò)柱子的方法

1、1稱量。200300目硅膠，稱3070倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。2。攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢?。如果洗脫劑是石油醚乙酸乙酯丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說(shuō)明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無(wú)水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無(wú)水氯化

2、鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對(duì)酸敏感，不能用氯仿體系過(guò)柱。3。裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約13體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會(huì)有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。4。壓實(shí)。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至910體積。無(wú)論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進(jìn)行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過(guò)柱時(shí)由于柱床萎縮產(chǎn)生開

3、裂。5。上樣。干法濕法都可以。海沙是沒(méi)必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會(huì)沖壞硅膠表面。6。過(guò)柱和收集。柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強(qiáng)度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；12g上樣量，50g硅膠（200300目），2050ml收一餾分。7。檢測(cè)。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會(huì)損失較多產(chǎn)品，紫

4、外的靈敏度一般比噴顯劑底12個(gè)數(shù)量級(jí)。8。送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或?yàn)橐后w，可過(guò)一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。關(guān)于柱層析和TLC之我的體會(huì)(轉(zhuǎn)載)層析和TLC是有機(jī)化學(xué)工作者必須下苦功夫的兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這兩項(xiàng)技術(shù)掌握與否，對(duì)于提高實(shí)驗(yàn)的效率至關(guān)重要。常見(jiàn)的例子是：在柱層析時(shí)，由于層析柱中的硅膠填料裝得不均勻（沒(méi)有填嚴(yán)實(shí)），使得柱子在淋洗過(guò)程中就因?yàn)槌霈F(xiàn)

5、太多氣泡變花，導(dǎo)致分離效果不好。更常見(jiàn)的例子是：層析柱雖然裝得不錯(cuò)，但是由于淋洗劑選擇不恰當(dāng)，結(jié)果導(dǎo)致幾十毫克產(chǎn)品，用了幾百毫升淋洗劑都還沒(méi)有完全分離。分離同樣的東西，熟手可能只需要半個(gè)小時(shí)，而一個(gè)層析技術(shù)不過(guò)關(guān)的人可能半天都不能得到純品。由此可見(jiàn)，這兩項(xiàng)技術(shù)掌握與否，對(duì)于提高工作效率，減輕工作量，減少有機(jī)溶劑的使用，從而對(duì)身心健康和環(huán)境保護(hù)都有明顯的作用。柱層析關(guān)鍵在于柱子是否裝好和淋洗劑是否選擇恰當(dāng)。而淋洗劑的選擇則是通過(guò)TLC確定

6、。這里要指出的一點(diǎn)是：TLC的作用除了跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，檢測(cè)試劑和原料純度外，一個(gè)重要的用途就是為柱層析選擇適當(dāng)?shù)牧芟磩?。首先談柱層析：裝柱子（添硅膠）時(shí)，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長(zhǎng)了也會(huì)由于擴(kuò)散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑“走柱?/p>

7、”，本法最大的優(yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒(méi)有氣泡。一般把兩種溶劑混合時(shí)采用高極性低極性的體積比為13的混合溶劑如果有分開的跡象再調(diào)整比例達(dá)到最佳效果，如果沒(méi)有分開的跡象，最好是換溶劑。對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開劑里往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來(lái)中和硅膠的酸性。當(dāng)然，選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無(wú)疑是較好的選擇。這里要特別強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)是：分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關(guān)系

8、。不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細(xì)程度，酸性強(qiáng)弱不同，從而導(dǎo)致產(chǎn)品在某個(gè)廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個(gè)廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。溫度對(duì)分離效果影響也很明顯。我們實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有空調(diào)，我在實(shí)驗(yàn)過(guò)程發(fā)現(xiàn)，在夏天分離相同的產(chǎn)品，所需的淋洗劑極性要比在冬天小很多，這一點(diǎn)大家也是可以理解的。鑒于此，使用的硅膠，不用時(shí)一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅膠板一定要保存在干燥器里面，或使用前在紅外烘箱里干

9、燥一段時(shí)間。在利用TLC跟蹤反應(yīng)時(shí)，在點(diǎn)板的時(shí)候往往是反應(yīng)體系的混和溶液點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)A，每種難揮發(fā)的原料各點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)BCD等等，然后所有的原料和反應(yīng)體系的混合溶劑再共同點(diǎn)一個(gè)混合點(diǎn)X，這些點(diǎn)在板上的位置如圖所示：AXBCD這樣的好處是展開后可以清楚地看見(jiàn)每個(gè)點(diǎn)的位置，把A這個(gè)點(diǎn)展開后的各個(gè)層份的點(diǎn)與BC等原料比較，從而判斷原料消失沒(méi)有，點(diǎn)混合點(diǎn)X的目的在于，方便觀察，因?yàn)橛袝r(shí)候，板展開后，各點(diǎn)的位置有些變形，或者由于邊緣效應(yīng)等等，使得判斷不易

10、。利用TLC判斷物質(zhì)的純度時(shí)，往往要和NMR相結(jié)合，因?yàn)槟撤N樣品在這種展開劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，并不等于在別的展開劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。但有趣的是，由于HNMR可鑒別的純度也就在95%左右，有時(shí)候HNMR現(xiàn)示較純的東西，一點(diǎn)板就會(huì)發(fā)現(xiàn)有幾個(gè)點(diǎn)。所以，兩者要結(jié)合使用。但是自己以前的樣品，則可以只通過(guò)點(diǎn)板來(lái)判斷純度。總結(jié)的不錯(cuò)，挺全面的。請(qǐng)問(wèn)樓主，轉(zhuǎn)自何處？糾正以下幾個(gè)錯(cuò)誤：（1）“硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右”，柱長(zhǎng)一般根據(jù)樣品量和分

11、離難度確定。（2）“最后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)。接著是用淋洗劑“走柱子”，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度?！埃盟没驓獗贸榫托辛?，上面加壓下面抽不易操作也沒(méi)必要。（3）“濕法較方便，熟手一般采用此法”，上樣方法根據(jù)樣品性質(zhì)和數(shù)量選擇，大量固體樣品用干法（伴樣法），與生熟無(wú)關(guān)。（4）“由于層析柱和薄板的不同，即使兩者使用的硅膠都相同，但是