多花木藍鹽脅迫的生理響應試驗方案

1、多花木藍鹽脅迫的生理響應試驗方案多花木藍鹽脅迫的生理響應試驗方案材料和樣品：多花木蘭種子、NaCl、完全培養(yǎng)液（硝酸鈣1克、磷酸二氫鉀0.25克、硫酸鎂0.25克、氯化鐵0.25克、氯化鉀或硝酸鉀0.25克）、蒸餾水。溶液培養(yǎng)皿設置：設置5組不同培養(yǎng)條件，選擇飽滿、均勻、外觀良好的種子，放入溶液培養(yǎng)皿中，每皿30粒，分別加入相同量的完全培養(yǎng)液及6ml不同濃度的NaCl溶液（濃度梯度：0gL、2gL、4gL、8gL、12gL），編號1、2

2、、3、4、5，第1組為對照組，實驗中每組設3個重復試驗。將培養(yǎng)皿置于溫室中培養(yǎng)，每天下午3時適當補充蒸發(fā)水分，以維持鹽分濃度的穩(wěn)定。培養(yǎng)相同時長，待多花木藍長出幼苗后，分別測定5組多花木藍幼苗的各項指標。一、多花木藍幼苗生長特性指標測定生長指標測定生長指標測定：記錄每組植株成活數(shù)量，計算成活率；用直尺和游標卡尺測量株高、莖粗、最大側根長。根系活力的測定根系活力的測定：TTC法材料、設備儀器及試劑（一）材料：水培的多花木藍根系。（二）儀器

3、設備：分光光度計；分析天平（感量0.1mg）；電子頂載天平（感量0.1g）；溫箱；研缽；三角瓶50ml；漏斗；量筒100ml；吸量管10ml；刻度試管10ml；試管架；容量瓶10ml；藥勺；石英砂適量；燒杯10ml、1000ml。（三）試劑：1）乙酸乙酯（分析純）；2）次硫酸鈉（Na2S2O4），分析純，粉末；3）1%TTC溶液：準確稱取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100ml，用時稀釋至各需要的濃度；4）磷酸緩沖液（115mol

4、L1，pH7）。5）1molL1硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55ml，邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000ml；6）0.4molL1琥珀酸：稱取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100ml即成。三、實驗步驟（1）TTC標準曲線的制作：取0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少許Na2S2O4粉搖勻后立即產生紅色的甲腙。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25ml、0.50ml、1.

5、00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲腙25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標準比色系列，以空白作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標準曲線。（2）稱取5組根尖樣品各0.5g，每組取三次，分別編號11、12、13，21、22、23，31、32、33，41、42、43，51、52、53，放入10ml燒杯中，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把

6、根充分浸沒在溶液內，在37℃下暗保溫1～3h，此后加入1molL1硫酸2ml，以停止反應。（與此同時做5個空白實驗，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研缽內磨碎，以提出甲腙。紅色提取液移入試管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌二、三次，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量為10ml，用分光光度計在波長485nm下比色，以空白試驗作參比測出吸光度，查標準曲線，即可求出四氮唑還原量。

7、的研缽中，1ml預冷的磷酸緩沖液在冰浴上研磨成漿，加緩沖液使終體積為5ml。取1.5～2ml于1000rpm下離心20min，上清液即為SOD粗提液。2.顯色反應取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支為測定管，另2支為對照管，按下表加入各溶液試劑（酶）用量ml終濃度（比色時）0.05molL磷酸緩沖液1.5130mmolLMet溶液0.313mmolL750μmolLNBT溶液0.375μmolL100μmolLEDTA－Na2液0.

8、310μmolL20μmolL核黃素0.32.0μmolL酶液0.052支對照管以緩沖液代替酶液蒸餾水0.25總體積3.0混勻后將1支對照管置暗處，其它各管于4000Lx日光下反應20min（要求各管受光情況一致，溫度高時間縮短，低時延長）。3.SOD活性測定與計算至反應結束后，以不照光的對照管做空白，分別測定其它各管的吸光度。結果計算已知SOD活性單位以抑制NBT光化還原的50％為一個酶活性單位表示，按下式計算SOD活性。SOD總活性

9、＝(Ack－AE)V(Ack0.5WVt)式中：Ack為照光對照管的吸光度，AE為樣品管的吸光度，V為樣品液總體積（ml）Vt為測定時樣品用量（ml），W為樣品鮮重（g），蛋白質含量單位為：mg蛋白／g鮮重。丙二醛丙二醛(MDA)(MDA)含量測定含量測定:硫代巴比妥酸法材料、儀器設備及試劑1實驗材料：多花木藍幼苗的葉片2.儀器：分光光度計，研缽，剪刀，恒溫水浴，試管20mL4，離心機。3.試劑：5%三氯醋酸；0.5%硫代巴比妥酸（用5