western轉(zhuǎn)膜條件

1、western轉(zhuǎn)膜條件轉(zhuǎn)膜條件蛋白來(lái)源：RAW264.7總蛋白蛋白名稱(chēng)（可保密）：一些轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.45NC轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流400mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60~90minPS.其實(shí)吧，以我的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉(zhuǎn)膜時(shí)間真的不是那么重要，曾經(jīng)因?yàn)槭д`，轉(zhuǎn)了15min就拆下來(lái)了，但從麗春紅染色來(lái)看，跟平常實(shí)驗(yàn)也沒(méi)有太大的區(qū)別。蛋白來(lái)源：內(nèi)皮細(xì)胞總蛋白蛋白名稱(chēng)（可保密

2、）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.45PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓100V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60~70min設(shè)備名字是“BioRadmini”。蛋白來(lái)源：乳鼠心肌細(xì)胞和成年鼠心肌組織總蛋白和核蛋白蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF（預(yù)先用甲醇處理）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)恒壓12V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：3040min設(shè)備：“BioRadmini

3、”建議：最開(kāi)始做過(guò)濕轉(zhuǎn)（過(guò)夜的那種），太費(fèi)事費(fèi)時(shí)，效果也不如半干轉(zhuǎn)。蛋白來(lái)源：293T細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓90V110V，控制電流不要超過(guò)300mA。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：70min蛋白來(lái)源：腫瘤手術(shù)標(biāo)本蛋白名稱(chēng)（可保密）：轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量：33KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：350mA恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150min蛋白名稱(chēng)（可保

4、密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB用膜類(lèi)型、孔徑：millipePVDF膜0.45um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒流0.3A。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：180min設(shè)備：“BioRad”建議：電轉(zhuǎn)保持電壓在70V以上，保持低溫，如果電壓低過(guò)70就需要換緩沖液了。蛋白來(lái)源：白血病細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.45的NC膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)，90min，0.25A設(shè)備：“BioRad”建議：海綿厚度要

5、合適，一次轉(zhuǎn)磨用的海綿太薄，導(dǎo)致三明治沒(méi)夾緊，轉(zhuǎn)膜后拿出來(lái)一看，marker都變得七扭八歪。但是有前輩說(shuō)墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒(méi)經(jīng)歷過(guò)，不知道是不是會(huì)有這種情況。蛋白來(lái)源：腫瘤細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10200KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：millipePVDF膜0.45um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：120v恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：120min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)BioRad建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液只用2次，基本都轉(zhuǎn)上，5%BSA封閉，減少