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1、《細(xì)胞生物學(xué)》題庫(kù)參考答案第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法一、名詞解釋一、名詞解釋1分辨率(resolution):分辨率是指能分辨出的相鄰兩個(gè)物點(diǎn)間最小距離的能力,這種距離稱為分辨距離。分辨距離越小,分辨率越高。一般規(guī)定:顯微鏡或人眼在25cm明視距離處,能清楚地分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力,稱為分辨率。人眼的分辨率是100μm光學(xué)顯微鏡的最大分辨率是0.2μm。2.熒光(fluescence):分子由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí),由于電子躍遷而由
2、被激發(fā)分子發(fā)射的光。物質(zhì)經(jīng)過紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況,第一種是自發(fā)熒光,如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后,能發(fā)出紅色的熒光,稱為自發(fā)熒光第二種是誘發(fā)熒光,即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過紫外線照射發(fā)出熒光,稱為誘發(fā)熒光。3.熒光顯微鏡(Fluescencemicroscope):以紫外線為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及
3、定位等。4.相差顯微鏡(Phasecontrastmicroscope):相差顯微鏡是荷蘭科學(xué)家Zermike于1935年發(fā)明的,用于觀察未染色標(biāo)本的顯微鏡?;罴?xì)胞和未染色的生物標(biāo)本,因細(xì)胞各部細(xì)微結(jié)構(gòu)的折射率和厚度的不同,光波通過時(shí),波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化,僅相位發(fā)生變化(振幅差),這種振幅差人眼無法觀察。而相差顯微鏡通過改變這種相位差,并利用光的衍射和干涉現(xiàn)象,把相差變?yōu)檎穹顏碛^察活細(xì)胞和未染色的標(biāo)本。相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別
4、是:用環(huán)狀光闌代替可變光闌,用帶相板的物鏡代替普通物鏡,并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。相差顯微鏡具有兩個(gè)其他顯微鏡所不具有的功能:①將直射的光(視野中背景光)與經(jīng)物體衍射的光分開②將大約一半的波長(zhǎng)從相位中除去,使之不能發(fā)生相互作用,從而引起強(qiáng)度的變化。5.放射自顯影(autadiography):放射自顯影的原理是利用放射性同位素所發(fā)射出來的帶電離子(α或β粒子)作用于感光材料的鹵化銀晶體,從而產(chǎn)生潛影,這種潛影可用顯影液顯示,成為可見的“
5、像”,因此,它是利用鹵化銀乳膠顯像檢查和測(cè)量放射性的一種方法。放射性核素的原子不斷衰變,當(dāng)衰變掉一半時(shí)所需要的時(shí)間稱為半衰期。各種放射性定。因此,針尖的移動(dòng)是隧道電流的作用,并且可以反映在熒光幕上。連續(xù)的掃描可以建立起原子級(jí)分辨率的表面像。12.酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(enzymecytochemistry):將細(xì)胞內(nèi)的酶與底物相互作用,再將酶反應(yīng)的產(chǎn)物作為反應(yīng)物質(zhì),在酶的作用部位進(jìn)行捕捉,使其在顯微鏡下具有可見性。這種在酶作用下產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物,
6、經(jīng)捕捉反應(yīng)來間接證明酶定位的反應(yīng)稱為酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)包括兩個(gè)反應(yīng):第一反應(yīng)是酶作用于底物的反應(yīng),稱酶反應(yīng),形成的產(chǎn)物稱為初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物第二反應(yīng)是捕捉劑與初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物的作用,稱捕捉反應(yīng),產(chǎn)生最終反應(yīng)產(chǎn)物:┌─────────酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)─────────┐│酶+條件初級(jí)捕捉劑│底物─────────→反應(yīng)產(chǎn)物───────→最終反應(yīng)產(chǎn)物(酶反應(yīng))(捕捉反應(yīng))13.免疫熒光技術(shù)(immunofluescence):將免疫
7、學(xué)方法(抗原抗體特異結(jié)合)與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出,從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。14.免疫電鏡(immunoelectronmicroscopy):將抗體進(jìn)行特殊標(biāo)記后用電子顯微鏡觀察免疫反應(yīng)的結(jié)果。根據(jù)標(biāo)記方法的不同,分為免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)。如免疫鐵蛋白技術(shù)是將含鐵蛋白通過一種低分子量的雙功能試劑與抗體結(jié)合,成為一種雙分子復(fù)合物,它既保留
8、抗體的免疫活性,又具有電鏡下可見的高電子密度鐵離子核心,因此用鐵蛋白標(biāo)記的抗體可通過電鏡免疫化學(xué)的方法在電鏡下定位細(xì)胞中的抗原。由于某些固定技術(shù)(如鋨酸固定)對(duì)抗體抗原的結(jié)合有干擾,因此應(yīng)采取較為溫和的樣品制備方法。15.染色體分選(chromosomesting):用流式細(xì)胞計(jì)分選特定的染色體,基本過程與細(xì)胞分選相似。不同的是,要用帶有熒光標(biāo)記的DNA探針同特異染色體結(jié)合,使待分選的染色體帶上標(biāo)記。在染色體分選中,使用的探針是同所感興
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