分光光度計(jì)的性能檢查

1、分光光度計(jì)的性能檢查（1）波長(zhǎng)校正：使用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)在更換光源燈、重新安裝、搬運(yùn)或檢修后以及儀器工作不正常時(shí)都要進(jìn)行波長(zhǎng)校正。就是正常工作的儀器每隔一個(gè)月也要檢查一次波長(zhǎng)必要時(shí)進(jìn)行校正這樣才能保證波長(zhǎng)讀數(shù)與通過(guò)樣品的波長(zhǎng)符合保證儀器的最大靈敏度。方法常用譜釹濾光片校正法適用于721型儀可見(jiàn)光區(qū)的波長(zhǎng)校正常以585nm或529nm處的吸收峰或T%為標(biāo)準(zhǔn)。鑒于721型儀器的出射光波長(zhǎng)較寬不易將573nm和585nm的兩峰或兩谷分開(kāi)

2、校正時(shí)易產(chǎn)生誤差故推薦用529nm處的峰或谷為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行波長(zhǎng)校正。校正時(shí)將儀器按要求預(yù)熱。要求電源電壓穩(wěn)定。波長(zhǎng)度盤(pán)置580nm處T%調(diào)至最大在比色杯處放一白紙條觀察是否有光強(qiáng)均勻、邊緣無(wú)光暈或雜光的光斑如不符合要求可調(diào)節(jié)燈泡位置使其符合要求是為波長(zhǎng)校正的粗調(diào)。再把靈敏度扭置于“1”（最低檔）波長(zhǎng)度盤(pán)對(duì)準(zhǔn)529nm電表機(jī)械零點(diǎn)為零在光路空白時(shí)調(diào)T%為100%T并反復(fù)查零點(diǎn)和100%T穩(wěn)定情況。將譜釹濾光片插入光路慢慢旋轉(zhuǎn)波長(zhǎng)度盤(pán)找到透光

3、率最低的一點(diǎn)（向左右微旋波長(zhǎng)度盤(pán)時(shí)該點(diǎn)透光率值均增加）這一點(diǎn)即為波長(zhǎng)529nm。檢查波長(zhǎng)度盤(pán)的指示值是不是529nm如指示值為534nm此時(shí)波長(zhǎng)工誤差為5nm超出規(guī)定（1nm）必須進(jìn)行調(diào)整。調(diào)整方法：將波長(zhǎng)度盤(pán)對(duì)準(zhǔn)529nm從光路取出譜釹濾光片光路空白時(shí)調(diào)電表指針到100%T再將譜釹濾光片插入光路。打開(kāi)儀器左側(cè)小蓋板找到波長(zhǎng)校正螺絲（3個(gè)中左側(cè)柄長(zhǎng)的一個(gè)）；反時(shí)針?lè)较蛭⑽⒄{(diào)節(jié)（負(fù)誤差時(shí)順時(shí)針?lè)较颍┦闺姳碇羔樀闹甘綯%為最低。反復(fù)檢查波長(zhǎng)

4、誤差情況直到符合儀器技術(shù)指標(biāo)為止。蓋好左側(cè)小蓋板校正結(jié)束。有些高檔儀器如島津UV260型雙光束分光光度計(jì)可使用氫燈或置譜釹濾光片于測(cè)定比色槽內(nèi)編入濾工掃描程序后儀器即可自動(dòng)地在一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)校正。高檔分光光度儀的光學(xué)系統(tǒng)密封在一個(gè)單元組件內(nèi)若發(fā)生故障波長(zhǎng)不準(zhǔn)常須請(qǐng)制造商派專人修理。其它尚有譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等可參考有關(guān)資料。（2）線性檢查：線性檢查包括儀器線性及測(cè)定方法線性兩個(gè)方面的檢查。線性誤差表現(xiàn)為

5、溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系出現(xiàn)正偏離或負(fù)偏離的現(xiàn)象。這種偏離按比耳定律的現(xiàn)象來(lái)自兩個(gè)方面：一是溶液本身不符合比耳定律這種現(xiàn)象叫做化學(xué)偏離；二是儀器本身各種因素的影響使吸光度測(cè)定值與濃度之間不成線性關(guān)系這種現(xiàn)象叫儀器偏離。此處研究的是后者。儀器偏離的因素很多如雜光、有限帶寬、檢測(cè)器噪聲、環(huán)境條件變化、波長(zhǎng)的變動(dòng)、比色杯的誤差、輻射光的非平行性、檢測(cè)器本身的非線性等。儀器線性檢查常用一種在一定波長(zhǎng)及一定濃度范圍內(nèi)確知其服從比耳定律的有色

6、物質(zhì)配成不同濃度的溶液來(lái)檢查儀器本身是否能如實(shí)地反映有色物質(zhì)的濃度變化。這種檢查方法與任何被測(cè)物質(zhì)呈色反應(yīng)等方法學(xué)上的問(wèn)題無(wú)關(guān)。用測(cè)得的吸光度對(duì)濃度作圖在理想情況下應(yīng)是一條直線。常用的方法是用0.8、1.6、2.4、4.0mgL伊文藍(lán)濃度系列來(lái)檢查波長(zhǎng)用610nm。（3）雜光（散光）檢查：在吸光度測(cè)定中凡檢測(cè)器感受到的不需要的輻射都稱為雜光。雜光對(duì)吸光度測(cè)定法的準(zhǔn)確性有嚴(yán)重的影響但卻往往被忽視。雜光的來(lái)源有：①儀器本身的原因如單色器的設(shè)

7、計(jì)、光源的光譜分布、光學(xué)原件的老化程度、波帶寬度以及儀器內(nèi)部的反射及散射等；②室內(nèi)光線過(guò)強(qiáng)而漏入儀器儀器暗室蓋不嚴(yán)；③樣品本身的原因如樣品有無(wú)熒光、樣品的散射能力強(qiáng)弱等。雜光檢測(cè)方法：①紫外光區(qū)的雜光監(jiān)測(cè)可用100.1gL的碘化鈉溶液在240nm處測(cè)定的吸光度應(yīng)大于2.00。此外也可用12gL的氯化鉀溶液在220nm處測(cè)其透光度即為雜光量一般應(yīng)小于1%T。以上測(cè)定均用石英杯以蒸餾水校零。②在可見(jiàn)光區(qū)可使用譜釹濾光片或硫酸鎳法檢查。先用譜

8、釹濾片校正波長(zhǎng)然后用黑紙片擋住比色杯光路（進(jìn)口儀器帶有比色杯樣黑色標(biāo)柱）之后調(diào)整0%T再用空氣做空白調(diào)100%T。插入譜釹濾光片在585nm處測(cè)定其測(cè)定值即為雜光水平。（4）比色杯的質(zhì)量檢查：比色杯一般由玻璃、石英或熒石制成光徑1.0或0.5cm光線通過(guò)時(shí)有一部分光為空氣與玻璃接觸面的反射而損失（4%）另一部分（很少）為玻璃吸收。比色杯的質(zhì)量除其原料外再就是玻璃的厚度均勻上下一致各杯彼此相配。廠家多以四個(gè)一套供應(yīng)且杯口上部外面標(biāo)有箭頭箭

9、頭對(duì)光源側(cè)使用。盡管如此在使用前還是應(yīng)作質(zhì)量檢查。常用伊文藍(lán)法：將一定量的2.0mgL的伊文藍(lán)溶液注入比色杯中比色杯內(nèi)液面應(yīng)相等。用一個(gè)比色杯作標(biāo)準(zhǔn)用紅色濾光片（波長(zhǎng)600～610nm）用水校零后將此杯的讀數(shù)準(zhǔn)確調(diào)至50%T接著讀取其余杯的透光度。透光度相差在0.5%T范圍內(nèi)者為合格。（5）穩(wěn)定性檢查：檢查方法：將分光光度計(jì)及附件接于0.5kVA以上的可調(diào)變壓器先調(diào)電壓為220V波長(zhǎng)固定在650nm在光路比色杯裝以空白液調(diào)讀數(shù)為90%T

10、處再將電壓升至230V及降至190V觀察透光度的漂移值。若介于88.5%～91.5%T之間為合格。在電源電壓不變的條件下在3分鐘內(nèi)其讀數(shù)漂移不應(yīng)超過(guò)標(biāo)尺上限值的0.5%。（6）重復(fù)性檢查：在波長(zhǎng)、工作狀態(tài)、電源電壓、比色杯配套等合格的前提下進(jìn)行重復(fù)檢查。在用交流電源供電時(shí)儀器對(duì)一種溶液重復(fù)測(cè)定的讀數(shù)值差應(yīng)小于或等于標(biāo)尺上限值的1%。試驗(yàn)方法：將分析純重絡(luò)酸鉀于120～150攝氏度烘干2小時(shí)干燥器中冷卻。精稱509.1mg于1000ml容