外文翻譯--麥冬多糖脂質(zhì)體可以提高雞的非特異性和特異性免疫應(yīng)答（譯文）

1、中文 7600 字出處：Fan Y, Ma X, Zhang J, et al. Ophiopogon polysaccharide liposome can enhance the non-specific and specific immune response in chickens[J]. Carbohydrate polymers, 2015, 119: 219-227.英文題目 英文題目：Ophiopogon polysac

2、charide liposome can enhance the non-specific and specific immune response in chickens麥冬多糖脂質(zhì)體可以提高雞的非特異性和特異性免疫應(yīng)答 麥冬多糖脂質(zhì)體可以提高雞的非特異性和特異性免疫應(yīng)答摘要 摘要：本實(shí)驗(yàn)研究的目的是探討麥冬多糖脂質(zhì)體（OPL）的免疫增強(qiáng)活性。在非特異性免疫應(yīng)答實(shí)驗(yàn)中，吞噬和細(xì)胞因子分泌是在在體外和體內(nèi)的巨噬細(xì)胞中進(jìn)行。在特異性免疫應(yīng)

3、答的實(shí)驗(yàn)研究中，OPL 的活性是在雞中測量的，那個(gè)實(shí)驗(yàn)所用的雞是被接種了紐卡斯?fàn)柌∫呙绮⑶姨魬?zhàn) ND 病毒 49 天。結(jié)果表明，OPL能顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能和在體外誘導(dǎo) IL-2 和 IL-6 的分泌；OPL 在高 與中劑量組能顯著提高吞噬指數(shù)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，增加 T 淋巴細(xì)胞亞群的比例（CD4 +和 CD8 +） ，提高抗體效價(jià)和提高在體內(nèi)的保護(hù)率。此外，其療效顯著優(yōu)于麥冬多糖（OP） 。這些結(jié)果表明，用脂質(zhì)體包裹后的 OP

4、 的免疫增強(qiáng)活性 顯著增強(qiáng)。關(guān)鍵詞 關(guān)鍵詞：麥冬多糖脂質(zhì)體、免疫增強(qiáng)活性、非特異性免疫應(yīng)答、特異性免疫應(yīng)答?？s寫 縮寫：OP- ophiopogon polysaccharide 麥冬多糖;OPL- ophiopogon polysaccharide liposome 麥冬多糖脂質(zhì)體; ND-Newcastle disease 紐卡斯?fàn)柌? IL- interleukin 白細(xì)胞介素; PHA-phytohemagglutinin 植物

5、血凝素 ;MTT-3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide 3（V/V）-二苯基溴化; PBS-phosphate buffered saline 磷酸鹽緩沖鹽水; DMSO- dimethyl sulfoxide 二甲基亞砜; NDV-Newcastle disease virus 紐卡斯?fàn)柌《?VC-vaccine control 疫苗控制 ;

6、 BC-blank control 空白對照; BL-blank liposome 空白脂質(zhì)體; CC-cell control 單元控制 。 1. 1.簡介 簡介動(dòng)物疫病對我國養(yǎng)殖業(yè)有嚴(yán)重和廣泛的影響，比如，紐卡斯?fàn)柌。萘鞲胁《荆i繁殖與呼吸綜合征等經(jīng)常發(fā)生，帶來業(yè)務(wù)上的巨大損失。這些疾病大多 屬于病毒性傳染病。目前，由于缺乏特異性治療，疫苗仍然是預(yù)防和控制病毒 感染性疾病的主要手段。然而，大多數(shù)疫苗尤其是基因工程疫苗在免疫增強(qiáng)劑的

7、幫助下可以取得令人滿意的效果，免疫增強(qiáng)劑在提高疫苗的效果上起著至關(guān) 重要的作用 (Zhao et al., 2014)。而我們所使用的化學(xué)劑目前在臨床上有一些缺點(diǎn)，如易累積，單目標(biāo)，副作用大等(Harandi, Medaglini, Shattock, Ma, Guo, Wang, Hu, Zhang et al., 2013)。作為一種天然高分子活性物質(zhì)，多糖不僅能激活免疫細(xì)胞，提高抗體水平，促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放和激活補(bǔ)體，而 且在

8、病毒控制和治療癌癥上也起著重要的作用(Schepetkin et al., 2013; Sheu, Lyu, 采用逆相蒸發(fā)法制備 OPL。首先，膽固醇和磷脂分別用氯仿溶解，然后將含 OP（4 毫克每毫升）的 PBS 注入氯仿溶液?；旌蟿驖{，通過超聲在冰浴中形成穩(wěn)定的油包水型（W / O）乳液。第二，乳液采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)形成膠 體，然后加入 20 毫升 PBS 到水合物中攪拌 15 分鐘。第三，所得混合物均勻再利用超聲波超聲 20

9、分鐘形成均勻的脂質(zhì)體。最后，該脂質(zhì)體使用 0.45 和 0.22 um 微孔膜先后過濾。根據(jù)參考用魚精蛋白和硫酸苯酚法檢測 OPL 的包封率 (Gunter,Gunter, Jarkowski, & Rosier, 1982)。OPL 的包封率為 64.95%，平均顆粒尺寸、zeta 電位和 PDI 分別為 245.3 nm、?4.56 mV 和 0.326。本文的粒徑分布譜和透射電子顯微鏡觀察在補(bǔ)充數(shù)據(jù)被顯示。在體外試驗(yàn)中，

10、OPL 是被溶解成 2 倍系 列稀釋成五個(gè)濃度培養(yǎng)。在體內(nèi)，它是用 PBS 稀釋成三個(gè)劑量。它們的內(nèi)毒素量達(dá)到了中國獸藥標(biāo)準(zhǔn)藥典（小于 0.5 EU mL?1） ，它們被存儲在 4?C 用于實(shí)驗(yàn)。2.3 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一天大的白羅曼雞（雄性）被安置在裝有空調(diào)的 37?C 房間的電線籠(40 cm × 60 cm × 100 cm)中，其房間在審前階段的開始時(shí)每天光照 24 小時(shí)。溫度逐漸下降到室溫，光照時(shí)

11、間為每天 12 小時(shí)，并在接下來的日子里一直保持下去。雞喂食所用的商業(yè)飲食由陜西正大有限公司飼料廠所提供的。動(dòng)物及其護(hù)理相 關(guān)的所有程序符合國際公認(rèn)的原則，同樣發(fā)現(xiàn)了由中國政府頒發(fā)的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指南。2.4 2.4 關(guān)于非特異性免疫應(yīng)答的 關(guān)于非特異性免疫應(yīng)答的 OPL OPL 活性 活性2.4.1 2.4.1 腹腔巨噬細(xì)胞的分離和培養(yǎng) 腹腔巨噬細(xì)胞的分離和培養(yǎng)根據(jù)以往的報(bào)告，用輕微修改的腹腔灌洗法分離巨噬細(xì)胞(Sánche

12、z-Fidalgo et al., 2013)。雞（14 日齡）被腹腔注射 2 毫升 6%淀粉–肉湯。兩天后，腹膜腔用 20 毫升 PBS 洗滌，收集巨噬細(xì)胞腹腔液。在以 2000 rpm 離心 10 分鐘后，收集細(xì)胞，用 PBS 洗兩次。然后將細(xì)胞懸浮在 RPMI-1640 中，在 37.5?C 潮濕的含5% CO2 的大氣中在種子培養(yǎng)板（1×106 個(gè)細(xì)胞每毫升）上培養(yǎng) 2 小時(shí)。非貼壁細(xì)胞用兩次培養(yǎng)液輕輕洗去，貼壁細(xì)胞是

13、巨噬細(xì)胞。用臺盼藍(lán)法測定的細(xì)胞活 力從不在 95%以下。2.4.2 2.4.2 關(guān)于體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞吞噬功能的 關(guān)于體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞吞噬功能的 OPL OPL 活性 活性采用中性紅吸收法測定巨噬細(xì)胞的吞噬功能(Chen, Zhang, Shen, & Wang, 2010)。在培養(yǎng) OPL 或 OP 48 小時(shí)后，加入 100 uL 中性紅溶液（0.075%，w / w） 培養(yǎng) 4 h。棄上清液后，用 PBS 清洗兩

14、次細(xì)胞去除沒有被巨噬細(xì)胞吞噬的中性 紅。然后將 DMSO（100 uL?1）加入到溶解的巨噬細(xì)胞中。在 490 nm 處的吸光度用酶標(biāo)儀測定。2.4.3 2.4.3 IL-2 IL-2、IL-6 IL-6 的測定 的測定細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板。在接受治療或無藥 48 h 后，盤子在 1000×g 離心10 分鐘，并收集培養(yǎng)上清液用 ELISA 試劑盒（biosamite 生物技術(shù)有限公司， 上海，中國）根據(jù)制造商的指示，測

15、定 IL-2、IL-6 的含量分別為多少。2.4.4 2.4.4 在體內(nèi)的吞噬指數(shù)的 在體內(nèi)的吞噬指數(shù)的 OPL OPL 活性 活性根據(jù)先前描述的方法通過碳粒廓清測定巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)(Wang, Wang, Li, Shi, & Zhong, 2009)。九十只 14 日齡雛雞被隨機(jī)分為六組。五個(gè)實(shí)驗(yàn)組的雞 分別被肌肉注射 1 毫升的 OPL 劑量為高等（4 毫克每毫升） 、中等（2 毫克每毫 升）和低等（1 毫克每毫升） ，