EoNPV感染兩近緣種茶尺蠖的差異研究.pdf

1、小茶尺蠖Ectropis obliqua和灰茶尺蛾Ectropis grisescens為茶尺蠖兩近緣種，是茶園中最主要的食葉類害蟲。由于二者在外觀形態(tài)、生物學(xué)習(xí)性方面極其相似，一直以來(lái)作為茶尺蠖一個(gè)種進(jìn)行田間防治。近年來(lái)，在茶園使用茶尺蠖核型多角體病毒(E.obliqua nucleopolyhedrovirus，EoNPV)進(jìn)行防治時(shí)出現(xiàn)不同地區(qū)防治效果差異性較大的現(xiàn)象，進(jìn)而研究明確茶尺蠖存在兩近緣種。本文使用三種不同濃度EoNPV

2、處理小茶尺蠖和灰茶尺蛾，比較分析EoNPV對(duì)兩近緣種茶尺蠖致死率的差異，進(jìn)一步驗(yàn)證田間防治中EoNPV對(duì)小茶尺蠖和灰茶尺蛾的防治效果差異。同時(shí)，采用濃度為1×107 PIB/mL的EoNPV喂飼小茶尺蠖和灰茶尺蛾，檢測(cè)病毒粒子在兩近緣種茶尺蠖體內(nèi)增殖動(dòng)態(tài)的差異，以期探索EoNPV對(duì)兩近緣種茶尺蠖致死率差異原因。結(jié)合灰茶尺蛾感染EoNPV后的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析，篩選免疫相關(guān)的抗菌肽基因，采用qPCR檢測(cè)兩近緣種茶尺蠖體內(nèi)抗菌肽基因表達(dá)差異，進(jìn)

3、一步從抗菌肽基因表達(dá)的角度解釋EoNPV對(duì)兩近緣種茶尺蠖產(chǎn)生致死率差異的機(jī)理。通過以上實(shí)驗(yàn)本研究得到以下三個(gè)結(jié)論:
　　1.三種不同濃度EoNPV病毒液處理小茶尺蠖和灰茶尺蛾，毒效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度EoNPV對(duì)小茶尺蠖的累計(jì)致死率存在顯著差異(P＜0.05)，而對(duì)灰茶尺蛾的累計(jì)致死率并沒有顯著差異(P＜0.05);同時(shí)，比較同一濃度EoNPV對(duì)兩近緣種茶尺蠖致死率的差異發(fā)現(xiàn)，EoNPV對(duì)小茶尺蠖的累計(jì)死亡率極顯著高于灰茶尺蛾，表

4、明小茶尺蠖對(duì)EoNPV敏感性高，而灰茶尺蛾對(duì)EoNPV敏感性低。
　　2.通過檢測(cè)病毒粒子在兩近緣種茶尺蠖體內(nèi)增殖動(dòng)態(tài)發(fā)現(xiàn)，在EoNPV處理后18h，小茶尺蠖體內(nèi)的病毒拷貝數(shù)開始快速增殖;而灰茶尺蛾體內(nèi)則是在36h后開始快速增殖。小茶尺蠖體內(nèi)EoNPV快速增殖時(shí)間早于灰茶尺蛾，且在EoNPV處理后的不同時(shí)間點(diǎn)小茶尺蠖體內(nèi)病毒的絕對(duì)拷貝數(shù)均顯著高于灰茶尺蛾，這說(shuō)明小茶尺蠖體內(nèi)更適宜EoNPV的增殖，這可能也是EoNPV病毒對(duì)小茶尺蠖

5、的致死率顯著高于灰茶尺蛾的原因。
　　3.進(jìn)一步采用qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，病毒處理后gloverin、attacin和moricin3個(gè)基因在兩近緣種茶尺蠖體內(nèi)均表達(dá)上調(diào)，gloverin基因在12 h達(dá)到最大值，moricin基因在48 h達(dá)到最大值，且gloverin和moricin基因在灰茶尺蛾中表達(dá)量顯著高于小茶尺蠖，而attacin基因在兩近緣種茶尺蠖體內(nèi)則沒有上述表達(dá)規(guī)律，推測(cè)gloverin和moricin兩個(gè)基因在兩近