山羊B細胞刺激因子(gBAFF)及γ-INF誘導的溶酶體巰基還原酶(gGILT)的克隆、表達及生物學功能的研究.pdf

1、本論文共分為3個部分：
　　第一部分:綜述B淋巴細胞刺激因子(BAFF)以及γ-IFN誘導的溶酶體巰基還原酶(GILT)的研究進展；
　　第二部分:山羊B淋巴細胞刺激因子(BAFF)的克隆、表達和生物活性研究。BAFF是TNF家族的重要成員，對B細胞的分化和存活起著重要的作用。本實驗室通過RT-PCR法，從山羊脾臟組織中擴增得到843bp的goatBAFF基因(簡稱gBAFF)。gBAFF的開放讀碼框(ORF)由280個氨基

2、酸組成，其中胞外可溶段包含152個氨基酸，其氨基酸序列擁有TNF特征：跨膜區(qū)、潛在的弗林酶切位點和三個半胱氨酸殘基。預測的三維結構顯示，gBAFF與人、鼠等的BAFF結構相似。實時定量PCR分析表明gBAFF主要在淋巴組織脾臟中表達。為了增強目的蛋白的可溶性，我們在BL21(DE3)中表達了用pSUMO載體構建的gsBAFF重組蛋白(SUMO-gsBAFF)，隨后經(jīng)鎳柱親和層析得到純化的重組蛋白，并進行了SDS PAGE和western

3、 blot分析。體外MTT檢測和流式細胞分析表明：SUMO-gsBAFF能夠促進山羊淋巴細胞的存活；SUMO-gsBAFF和anti-IgM共刺激能夠促進小鼠脾臟B淋巴細胞的存活。這些結果暗示，BAFF能夠作為一個潛在的免疫因子增強山羊免疫系統(tǒng)的功能。
　　第三部分:山羊GILT的克隆、表達和活性研究。干擾素-γ，誘導的溶酶體巰基還原酶(GILT)對MHCⅡ抗原呈遞過程中的二硫鍵還原起著重要作用。本實驗通過RT-PCR法，從山羊脾

4、臟中擴增得到山羊GILT基因(簡稱gGILT)。gGILT由244個氨基酸組成，分子量約為27.6 kDa，并且擁有GILT蛋白的特征性結構序列：CXXC基序CQHGX2ECX2NX4C和5個半胱氨酸殘基。在氨基酸水平上，gGILT與牛GILT的相似性高達93.03％。系統(tǒng)進化分析也顯示gGILT與牛GILT的同源性最高。實時定量PCR結果表明，gGILT的表達具有組織特異性，并且經(jīng)過LPS刺激后，其在淋巴細胞和外周血單核細胞中的表達量