復方金銀花中藥漱口水的制備及其功效實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　牙周炎是造成中國成年人牙齒喪失的主要原因。目前，大多數(shù)學者認為，牙周炎是多因素疾病，其中牙菌斑生物膜的細菌及其毒性產(chǎn)物是引發(fā)牙周炎必不可少的始動因子。因此，控制和去除牙菌斑是牙周炎治療的關鍵。菌斑控制的常用方法為機械性菌斑控制法，包括齦上潔治、齦下刮治、刷牙等。在基礎治療的基礎上，以含有抗菌成分的漱口水作為輔助手段，能取得更好的菌斑控制效果。
　　漱口水在口腔疾病的預防及輔助治療中起著重要的作用。根據(jù)功能及成

2、分的不同，漱口水可分為防齲類漱口水、抗敏感類漱口水、抗生素類漱口水、抑制牙菌斑類漱口水、口氣清新類漱口水及中草藥類漱口水，在清除口腔異味、防齲齒、抗炎等方面有很好的效果，常作為牙周炎、牙齦炎、冠周炎及口腔潰瘍等疾病的輔助用藥。其中，抑制牙菌斑類漱口水作為自我菌斑控制手段的一種，可通過液體流動力進入牙刷、牙線、潔治器等器械不能到達的區(qū)域，補充機械性菌斑控制法的不足。目前，臨床上常用的漱口水中多含有抗生素、碘、乙醇等成分，如洗必泰、含碘新型

3、漱口水等，長期使用易引起牙面著色、口腔菌群失調(diào)、口腔黏膜刺激等問題。因此，尋找有效、安全、無酒精、可長期使用的漱口水成為牙周病防治的新熱點。
　　在中國，天然藥物的應用歷史悠久、且毒副作用小，取材方便，經(jīng)濟實惠，有的還具有殺菌消炎作用，因而廣泛用于基礎研究及臨床實踐。中藥制劑在口腔中的運用廣泛，大量研究表明中藥在治療牙周病、口腔潰瘍等疾病上具有良好的療效。但目前對于該類中藥的報道多為某種單一中草藥的作用，對中藥復方的研究較少，而中

4、藥復方更能體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特點，充分發(fā)揮藥物的協(xié)同作用及中醫(yī)藥多種有效成分多靶點作用。隨著人們對漱口水安全性的關注，中藥類漱口水的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)出來。市面上已有成品銷售的中藥類漱口水，但普遍存在色澤渾濁、口感較差或含有酒精等問題，使得其接受度較其他類漱口水低。且對于中草藥類漱口水的研究，從基礎到應用的系統(tǒng)研究較少，缺乏科學客觀的療效觀察，且對于其毒性及不良反應報道較少，未能給臨床應用提供實驗依據(jù)。中醫(yī)理論認為胃火熾熱、腎氣虛虧和氣血不足

5、是牙周炎的主要病因。茵陳、野菊花、金銀花、白芷、細辛生物活性強，被證實具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫等作用，且對包括口腔致病菌在內(nèi)的多種細菌具有抑制作用。將這5種藥物進行復方配伍，應用于防治牙周疾病中尚未見報道。
　　綜上所述，本研究擬從茵陳、野菊花、金銀花中提取單味藥液，并提取細辛+白芷混合藥液，通過均勻設計法獲得5種藥物的最佳配比，制備復方金銀花中藥漱口水，通過動物學實驗，研究該漱口水的毒性及對牙周疾病的功效，為進一步開發(fā)出安全有效的復方

6、金銀花中藥漱口水提供科學依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.采用揮發(fā)油提取法對茵陳、野菊花、金銀花、細辛、白芷5種藥物進行提取，制備茵陳、野菊花、金銀花單味藥液及細辛+白芷混合藥液，其中白芷與細辛的比例為33∶17。
　　2.采用瓊脂稀釋法測定各藥液的最低抑菌濃度。將P.gingivalis ATCC33277接種于含藥瓊脂平板上，37℃厭氧培養(yǎng)（80％N2、10％CO2、10％H2）72h，觀察菌落形成情況。
　　

7、3.收集健康牙齦組織，采用改良組織塊酶消化法進行人牙齦成纖維細胞原代培養(yǎng)，并通過免疫組化法鑒定細胞來源。
　　4.以茵陳、野菊花、金銀花及白芷+細辛為因素，以對牙齦卟啉單胞菌抑菌活性、生物膜形成抑制率及對人牙齦成纖維細胞毒性為考察指標，通過均勻設計法，篩選出最優(yōu)配比，并以此配比制備復方金銀花中藥漱口水原液。
　　5.將漱口水原液作用于大鼠口腔內(nèi)，每天3次，每次40μL。陰性對照組為滅菌水。每天觀察大鼠大體表現(xiàn)及記錄體重。作用

8、4周后，處死大鼠，取大鼠肝、脾、肺、腎組織，制作HE染色切片進行組織學觀察。
　　6.將30只大鼠隨機分為藥物作用組（T組）、陰性對照組（N組）及牙周炎造模組（P組）三組，采用絲線結(jié)扎+涂布牙齦卟啉單胞菌+高糖飲食法構(gòu)建大鼠實驗性牙周炎模型，造模期間觀察大鼠口腔內(nèi)牙周情況，第4周時從各組中隨機選擇處死大鼠，制作HE染色切片觀察造模情況。
　　7.將漱口水原液涂布于T組大鼠左側(cè)上頜第二磨牙齦緣，每天3次，每次20μL。N組涂布

9、滅菌水。P組不作任何處理。持續(xù)用藥20d后，處死所有大鼠，取造模牙及牙周組織制作HE染色切片進行觀察。
　　研究結(jié)果：
　　1.各單味藥液對牙齦卟啉單胞菌最低有效抑菌濃度分別為:茵陳40mg/mL，野菊花10mg/mL，金銀花10mg/mL，白芷+細辛(33∶17)40mg/mL。
　　2.通過二項式逐步回歸得出5種藥物的最佳配比為:茵陳55mg/mL，野菊花45mg/mL，金銀花40mg/mL，白芷+細辛(33∶17

10、)40mg/mL。
　　3.毒性實驗結(jié)果顯示:實驗組與陰性對照組大鼠體重無明顯差異，大鼠肝、脾、肺、腎組織未見明顯異常。
　　4.成功構(gòu)建大鼠實驗性牙周炎模型。大鼠口腔檢查及組織HE染色切片結(jié)果顯示:與P組及N組相比，T組牙周組織炎癥細胞浸潤減少，牙周膜纖維排列整齊。
　　研究結(jié)論：
　　1.通過均勻設計法篩選出的復方金銀花中藥漱口水無明顯急性毒性作用，且短期內(nèi)連續(xù)使用無毒性作用。
　　2.復方金銀花中藥漱