高糖調(diào)節(jié)MC3T3-E1細(xì)胞雌激素受體功能研究.pdf

1、目的：
　　本實驗室前期發(fā)現(xiàn)高糖和雌激素可通過β-catenin途徑調(diào)節(jié)骨形成功能。由于現(xiàn)有部分報道提示ER和β-catenin在成骨細(xì)胞發(fā)揮協(xié)同作用，因此，本研究的目的是，觀察高糖和雌激素對成骨細(xì)胞ER表達(dá)的調(diào)節(jié)及其與β-catenin的相互作用。
　　方法：
　　采用Western-blot方法，觀察不同濃度、時程高糖對成骨前體細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞ERα和ERβ蛋白表達(dá)。選擇適宜濃度與時程，觀察高糖與雌激素單

2、獨(dú)或聯(lián)合時對ER蛋白表達(dá)、分布和轉(zhuǎn)錄活性的影響。ER分布采用免疫熒光法，ER轉(zhuǎn)錄活性采用雙熒光素酶報告基因檢測方法。同時，還采用MTT、茜素紅染色的方法檢測高糖與雌激素對成骨細(xì)胞增殖、礦化活性的影響。采用LiCl抑制β-catenin降解，觀察LiCl對高糖所致ER功能的影響。
　　結(jié)果：
　　雌激素受體的蛋白表達(dá)水平隨著葡萄糖濃度的升高呈劑量依賴性升高趨勢；在33mmol/L高糖培養(yǎng)下加入雌二醇，雌激素受體表達(dá)水平較雌激素

3、組反而呈降低趨勢。免疫熒光實驗結(jié)果顯示：高糖組（33mmol/L）和雌二醇組細(xì)胞雌激素受體較正常組（5.5mmol/L）表達(dá)增加，且核內(nèi)分布高，而高糖聯(lián)合雌二醇共同作用后，受體數(shù)量和入核較高糖或雌二醇組更低。熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示：雌激素受體轉(zhuǎn)錄活性在高糖誘導(dǎo)下呈降低趨勢，雌二醇組可升高ER轉(zhuǎn)錄活性，高糖組加入雌二醇后，其轉(zhuǎn)錄活性較雌二醇作用組呈降低趨勢。根據(jù)MTT、茜素紅染色結(jié)果顯示：高糖（33mmol/L）誘導(dǎo)后，MC3T3-

4、E1細(xì)胞活性及礦化能力都受到抑制，而高糖與雌二醇共同作用后，MC3T3-E1細(xì)胞活性及礦化能力較雌二醇組呈抑制趨勢。加入高糖（33mmol/L）與LiCl(5mmol/L)共同作用后，ER表達(dá)水平較高糖組顯著性降低。而LiCl可以升高高糖誘導(dǎo)下的ER轉(zhuǎn)錄活性。
　　結(jié)論：
　　1.高糖可上調(diào)ER蛋白表達(dá)，同時可下調(diào)ER轉(zhuǎn)錄活性，后者可能與β-catenin表達(dá)有關(guān)。
　　2.雌激素可上調(diào)ER蛋白表達(dá)和轉(zhuǎn)錄活性，這些作用