LIGHT在鸚鵡熱嗜衣原體呼吸道感染中的作用及機制研究.pdf

1、目的：探討 LIGHT信號通路在鸚鵡熱嗜衣原體（Chlamydia psittaci，Cps）呼吸道感染過程中的作用及機制。
　　方法：野生型（Wild type，WT）小鼠和LIGHT基因敲除（Knock out，KO）小鼠各50只，每只小鼠鼻內(nèi)接種4.5×105IFU Cps，每天觀察記錄小鼠的進食、活動、體重變化及生存情況。在感染前和感染后第4、9、14天分別處死各組8只小鼠，其中4只小鼠的肺組織用于制備肺組織勻漿，體外感染

2、 Hela細(xì)胞，通過間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence assay，IFA）測定包涵體形成單位（inclusion forming unit，IFU）；另4只小鼠的右肺用于制備支氣管肺泡灌洗液（broncho-alveolar lavage fluid，BALF）并對其中浸潤的細(xì)胞進行計數(shù)，部分左肺經(jīng)多聚甲醛固定，用于制作石蠟切片并進行蘇木素-伊紅染色（hematoxylin and eosin St

3、aining，HE），以評估肺部病理損害，剩余部分左肺用于提取總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄-定量PCR法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)檢測IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4、IL-6和IL-12的mRNA水平。分離小鼠脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）檢測脾臟中 CD4+ T細(xì)胞、CD8+

4、 T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞（Regulatory T cell，Treg）的百分率。
　　結(jié)果：經(jīng)呼吸道感染Cps后，小鼠出現(xiàn)進食減少、活動下降、體重減輕等癥狀，并出現(xiàn)死亡。與WT小鼠相比，LIGHT KO小鼠上述癥狀出現(xiàn)更嚴(yán)重，并有更高的死亡率。肺組織病理結(jié)果顯示，Cps感染導(dǎo)致肺部出現(xiàn)充血、水腫和炎性細(xì)胞浸潤等病理改變，LIGHT KO小鼠的肺病理損害程度顯著重于WT小鼠。與之對應(yīng)，LIGHT KO小鼠BALF中浸潤的炎性細(xì)胞數(shù)

5、量顯著多于WT小鼠。IFA結(jié)果顯示，感染Cps后的第4、9、14天，LIGHT KO小鼠的肺部Cps載量均顯著高于WT小鼠；至感染后第14天，WT小鼠肺部Cps已被清除，而LIGHT KO小鼠肺部仍可檢出Cps。兩組小鼠脾細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞百分率和比例無明顯區(qū)別，但LIGHT KO小鼠的Treg細(xì)胞比例顯著高于WT小鼠。兩組小鼠感染 Cps后細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4、IL-6及IL-12的