E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:口腔鱗癌（oral squamous cell carcinomas，OSCC）是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，占頜面部惡性腫瘤的80％以上[1]。近年來其發(fā)病率有逐年上升的趨勢。目前臨床上的治療方法以手術(shù)切除為主，輔以放療或者化療，但療效不理想，預(yù)后差，術(shù)后5年生存率僅為60％左右[2]。因此深入了解口腔鱗癌的發(fā)病機(jī)制、早期診斷及預(yù)后分析顯得十分迫切。E2F是1986年Rovesdi等在進(jìn)行腺病毒E2啟動(dòng)子激活的研究時(shí)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的

2、細(xì)胞因子[3]。E2F家族成員有8個(gè)，包括E2F1到E2F8，其中E2F1被研究的最多，其在細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡、增殖等方面都發(fā)揮著重要作用。目前已有一些研究證實(shí)E2F1在人類很多腫瘤中高表達(dá)，這表明E2F1發(fā)揮著癌基因的作用。但另外的一些研究卻提示E2F1也可能具有抑癌基因的作用。E2F1在腫瘤形成中是起癌基因作用還是抑癌基因作用可能與腫瘤抑制途徑有關(guān)，但其具體機(jī)制尚未完全清楚。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的一員，是目前發(fā)現(xiàn)

3、最強(qiáng)的凋亡抑制因子[4]。其主要作用為:1抑制細(xì)胞凋亡2誘導(dǎo)細(xì)胞分化3參與細(xì)胞有絲分裂4促進(jìn)血管生成?，F(xiàn)在的研究表明，Survivin在絕大多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)，而在成人大多數(shù)正常組織均測不到其表達(dá)。這個(gè)特點(diǎn)使其近年來成為腫瘤治療新的焦點(diǎn)。P53基因是1979年Lane等在SV40感染的小鼠細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，它是人類腫瘤中最常發(fā)生突變的腫瘤抑制基因，在細(xì)胞周期的調(diào)控中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是通過對口腔鱗癌組織病理標(biāo)本進(jìn)行E2F1、Surv

4、ivin、P53的檢測，了解E2F1、Survivin、P53在口腔鱗癌組織和正常粘膜組織中的表達(dá)情況，初步探討其與口腔鱗癌臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，為口腔鱗癌的早期診斷、治療及預(yù)后提供參考依據(jù)。
　　方法:收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院口腔科2013年1月至2014年12月期間52對手術(shù)切除的口腔鱗癌及其對應(yīng)的切緣正常粘膜組織標(biāo)本。所有的口腔鱗癌患者術(shù)前均未做放療或化療。標(biāo)本均為術(shù)后立即取材，分兩份，一份固定于4％甲醛溶液，石蠟包埋;另一

5、份固定于70％酒精，4℃保存。
　　1、免疫組織化學(xué)檢測E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織及正?？谇徽衬そM織中的表達(dá)
　　取各組包埋組織的蠟塊，用石蠟切片機(jī)連續(xù)切片，厚度為4μm，常規(guī)脫蠟至水，按照S-P試劑盒操作說明進(jìn)行操作，通過鏡下觀察，比較各組間E2F1、Survivin和P53蛋白表達(dá)的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、流式細(xì)胞術(shù)測定E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織及正?？谇徽衬そM織

6、中的表達(dá)
　　取70％乙醇固定的標(biāo)本，將其制作成單細(xì)胞懸液;加入E2F1、Survivin和P53一抗工作液，室溫下孵育30分鐘;加入羊抗鼠FITC-IgG二抗工作液，室溫下靜置1小時(shí);機(jī)檢。
　　3、結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)
　　3.1免疫組織化學(xué)
　　E2F1、P53染色陽性為細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕褐色的顆粒;Survivin染色陽性為細(xì)胞質(zhì)或胞核中呈現(xiàn)棕黃色的顆粒。以免疫組化半定量法評價(jià)其表達(dá)。
　　3.2流式細(xì)胞術(shù)蛋白

7、表達(dá)定量分析
　　以對數(shù)方式采集數(shù)據(jù)，以實(shí)驗(yàn)樣品蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度表示各組蛋白的含量。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間率的比較采用x2檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)，等級相關(guān)性比較采用Spearman相關(guān)性分析，P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著差異。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組化檢測E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織及正?？谇徽衬そM織中的表達(dá)

8、r>　　E2F1在口腔鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為75.00％（39/52），高于在正常口腔粘膜組織中的陽性表達(dá)率36.60％（18/52）(P＜0.01);Survivin在口腔鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為88.50％(46/52)，高于在正?？谇徽衬そM織中的陽性表達(dá)率3.80％(2/52)(P＜0.01);P53在口腔鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為82.70％（43/52），高于在正?？谇徽衬そM織中的陽性表達(dá)率11.50％（6/52）(P＜0.0

9、1)
　　2、流式細(xì)胞術(shù)檢測E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織及正?？谇徽衬そM織中的表達(dá)
　　E2F1在口腔鱗癌組織的均道值為393.47±10.48，高于正?？谇徽衬そM織的均道值280.35±22.38(P＜0.01)。Survivin在口腔鱗癌組織的均道值為412.38±18.80，高于正?？谇徽衬そM織的均道值78.69±29.66(P＜0.01)。P53在口腔鱗癌組織的均道值為400.98±10.45，高

10、于正?？谇徽衬そM織的均道值289.19±19.70(P＜0.01)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織和正?？谇徽衬そM織中的表達(dá)存在極顯著差異，與免疫組化結(jié)果相符合。
　　3、口腔鱗癌組織中E2F1、Survivin和P53的表達(dá)與病理及臨床特征的關(guān)系
　　免疫組化結(jié)果顯示E2F1的表達(dá)與細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期無明顯相關(guān)性(P＞0.05);Survivin和P53的表達(dá)與細(xì)胞分化、

11、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有相關(guān)性（P＜0.05）。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果與免疫組化結(jié)果相一致。兩種方法檢測均得到E2F1、Survivin和P53的表達(dá)與患者年齡、性別無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。
　　4、口腔鱗癌組織中E2F1、Survivin和P53表達(dá)的相關(guān)性
　　免疫組化結(jié)果顯示，口腔鱗癌組織中E2F1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別與Survivin和P53蛋白表達(dá)的強(qiáng)度呈強(qiáng)正相關(guān)(rs1=0.446，P1＜0.01;rs2=0.386

12、，P2＜0.01)。流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白的均道值與組化蛋白表達(dá)結(jié)果相一致，E2F1蛋白與Survivin和P53蛋白均道值分別呈強(qiáng)正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、E2F1、Survivin和P53在口腔鱗癌組織中高表達(dá)。
　　2、E2F1的表達(dá)與性別、年齡、細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期無關(guān);Survivin和P53的表達(dá)與細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，但與年齡及性別無關(guān)。
　　3、E2F1在口腔鱗癌組織中