嗜水氣單胞菌脅迫下東北林蛙TLR4信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá)研究.pdf

1、近年來，由于棲息環(huán)境的破壞、水源污染、微生物侵襲、疾病流行等因素，導(dǎo)致兩棲動(dòng)物的種群數(shù)量呈逐年下降趨勢(shì)。已有研究表明，嗜水氣單胞菌（Aeromonashydrophila，Ah）作為一種普遍存在于兩棲類中的條件性致病菌，可以引起蛙類出血性敗血?。ㄋ追Q“紅腿病”），是影響其生存能力和種群數(shù)量下降的一個(gè)重要因素。在微生物侵襲時(shí)，機(jī)體Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)不僅可以識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathoge

2、n associated molecular pattern，PAMP)啟動(dòng)固有免疫應(yīng)答，而且能激活信號(hào)通路調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答。
　　本研究采用高通量測(cè)序獲得東北林蛙（R.dybowskii）TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA序列設(shè)計(jì)引物，通過熒光定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)東北林蛙在易感微生物嗜水氣單胞菌脅迫下，其腎臟、心臟、肝臟TLR4信號(hào)通路中TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB

3、 mRNA表達(dá)水平的變化，以期揭示東北林蛙被細(xì)菌感染后體內(nèi)TLR4信號(hào)通路中的相關(guān)分子的動(dòng)態(tài)效應(yīng)。
　　主要研究結(jié)果如下：
　　1、在嗜水氣單胞菌感染東北林蛙早期，其心臟、肝臟和腎臟中的TLR4 mRNA均在6h出現(xiàn)表達(dá)峰值。此時(shí)東北林蛙體內(nèi)的TLR4 mRNA是初始量的4-7倍。
　　2、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA在腎臟、心臟和肝臟中的達(dá)到峰值的順序依次是腎臟、肝臟、心臟，表明在嗜水氣單

4、胞菌感染東北林蛙后，腎臟中的TLR4信號(hào)通路被最先激活。
　　3、TLR4、MyD88和IRAK4 mRNA在腎臟中的高峰表達(dá)變化量也明顯高于心臟和肝臟，表明腎臟在嗜水氣單胞菌脅迫東北林蛙觸發(fā)的先天免疫中發(fā)揮主要作用。
　　4、與TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6相比，心臟、肝臟和腎臟NF-κB mRNA達(dá)到峰值時(shí)的表達(dá)量變化最為明顯，尤其是心臟和腎臟中，NF-κB mRNA的高峰表達(dá)變化量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他基因，表明N

5、F-κB作為轉(zhuǎn)錄因子被激活后在體內(nèi)大量表達(dá)，在TLR4信號(hào)通路連接天然免疫和適應(yīng)性免疫時(shí)發(fā)揮主要作用，且參與機(jī)體的適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)。在對(duì)抗嗜水單胞菌的后期防御機(jī)制中，心臟和腎臟發(fā)揮主要作用。
　　5、結(jié)果表明嗜水氣單胞菌激活了東北林蛙腎臟、心臟和肝臟的TLR4信號(hào)通路并誘發(fā)了通路中MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA的表達(dá)，使其參與東北林蛙機(jī)體的早期免疫應(yīng)答并發(fā)揮作用。TLR4首先被激活并快速表達(dá)，TLR4的