計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)抗EGFR和PD-L1雙靶向抗體研究.pdf

1、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一種糖蛋白，該蛋白的過表達(dá)與肺癌、頭頸部癌、乳腺癌、前列腺癌以及結(jié)直腸癌等腫瘤的增殖及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Cetuximab是一種人-鼠嵌合抗EGFR單克隆抗體，能特異性靶向人表皮生長(zhǎng)因子受體，阻斷EGFR信號(hào)通路。雖然該抗體在結(jié)直腸癌的治療中取得了良好的療效，但在非小細(xì)胞肺癌的治療中與單純化療相比并沒有顯著性差異。
　　近期，采用抗體藥物阻

2、斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路在腫瘤治療的臨床前與臨床實(shí)驗(yàn)中取得了突破性進(jìn)展，Science、Nature和Cell等雜志大篇幅詳細(xì)介紹了借助PD-1/PD-L1阻斷性抗體，能夠改變腫瘤免疫微環(huán)境，進(jìn)而能夠更加有效殺傷腫瘤細(xì)胞。臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過抗體阻斷PD-1/PD-L1通路在NSCLC中表現(xiàn)出良好的治療效果。目前，美國(guó)FDA已批準(zhǔn)Atezolizumab用于NSCLC的臨床治療。
　　雖然抗體藥物已經(jīng)廣泛用于臨床腫瘤治療，

3、但是由于腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程的復(fù)雜性和多因素性決定了，僅僅依靠單一靶向的單克隆抗體藥物，大部分患者在臨床治療過程中會(huì)逐漸產(chǎn)生耐受和復(fù)發(fā)。因此，亟待提高腫瘤靶向抗體的療效。雙靶向抗體由于其能夠特異性識(shí)別多個(gè)靶點(diǎn)，其在殺傷腫瘤中的優(yōu)勢(shì)逐漸被研究人員所認(rèn)識(shí)，在抗腫瘤治療過程中顯示出優(yōu)勢(shì)。與此同時(shí)，一大批雙靶向抗體藥物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，但雙靶向EGFR與PD-L1的雙特異性抗體藥物的研究目前仍未有人報(bào)道。如何設(shè)計(jì)出針對(duì)NSCLC具有更好療效的新型

4、抗體藥物是本課題研究的一個(gè)重點(diǎn)。
　　本課題的研究目的:
　　通過計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)優(yōu)化抗體結(jié)構(gòu)，利用crossmab技術(shù)，構(gòu)建同時(shí)能夠靶向EGFR和PD-L1的雙特異性抗體，期望得到更為有效的治療非小細(xì)胞肺癌的靶向藥物。本課題的研究方案:
　　1.將EGFR單抗Cetuximab和PD-L1單抗Atezolizumab作為親本抗體，構(gòu)建EGFR/PD-L1雙特異性抗體，其不僅具有類似天然IgG抗體的Y型結(jié)構(gòu)，而且能夠同時(shí)

5、靶向EGFR和PD-L1分子;
　　2.利用FreeStyle293-F Cells哺乳動(dòng)物表達(dá)體系，表達(dá)EGFR/PD-L1雙特異性抗體，并對(duì)其進(jìn)行純化以及利用Western-blot技術(shù)對(duì)得到的抗體蛋白進(jìn)行鑒定;
　　3.利用EGFR-PD-L1 CrossMab，進(jìn)行與靶細(xì)胞結(jié)合能力以及直接介導(dǎo)細(xì)胞死亡活性的體外研究實(shí)驗(yàn)。
　　本課題的研究結(jié)果:
　　1.利用“knobs-into-holes”技術(shù)（即“杵

6、臼”技術(shù)）和“crossover”技術(shù)（即“交叉”技術(shù)）構(gòu)建EGFR/PD-L1 CrossMab抗體，分別構(gòu)建了C225H-knob/cmv、C225L/cmv、RG74H-CL-FChole/cmv、RG74LV-CH1/cmv四條真核表達(dá)載體;
　　2.將C225H-knob/cmv、C225L/cmv、RG74H-CLFChole/cmv、RG74LV-CH1/cmv四條真核表達(dá)載體瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染FreeStyle293-F