中國南海柳珊瑚形態(tài)學研究和18SrDNA基因分子系統(tǒng)學研究.pdf

1、柳珊瑚(Gorgonian)是指屬于腔腸動物門(Coelenterata)、珊瑚蟲綱(Anthozoa)、八放珊瑚亞綱(Octocorallia)、軟珊瑚目(Alcyonacea)的硬軸珊瑚亞目(Scleraxonia)、全軸珊瑚亞目(Holaxonia)和鈣軸珊瑚亞目(Calcaxonia)中珊瑚的珊瑚統(tǒng)稱。柳珊瑚是重要的海洋藥用動物。本研究對我國海南三亞灣和湛江徐聞柳珊瑚的資源情況各做了一次補充調(diào)查，利用柳珊瑚外部形態(tài)特征如群體外部

2、特征(顏色、分枝、珊瑚萼的大小和分布情況)和骨針特征(骨針形狀、大小和顏色)進行了分類鑒定研究，發(fā)現(xiàn)許多新記錄種；通過2種樣品前處理方式和4種不同的DNA提取方法相結(jié)合，提取柳珊瑚Echinogoriaaurantiaca(Valenciennes)基因組DNA，并對其18SrRNA基因進行了克隆和序列分析，比較研究了哪一種方法更容易提取DNA；同時對4種中國柳珊瑚的18SrDNA基因進行了測序，結(jié)合從Genbank中搜索到的另外24條

3、柳珊瑚序列構(gòu)建柳珊瑚系統(tǒng)發(fā)育樹，進行了柳珊瑚分子系統(tǒng)學研究。主要內(nèi)容與結(jié)果如下： 1.三亞灣雙帆石(間于東島和西島之間)柳珊瑚資源情況調(diào)查。共得到柳珊瑚12種，分別屬于5科8屬。同時，根據(jù)柳珊瑚形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，研究了三亞灣柳珊瑚系統(tǒng)分類關(guān)系。其中BebryceindicaThomoson，1905為新記錄。 2.湛江徐聞柳珊瑚資源情況調(diào)查。這是第一次系統(tǒng)報道徐聞柳珊瑚的資源，共得到柳珊瑚16種，分別屬于7科14屬。根據(jù)柳珊

4、瑚群體顏色及骨針的形態(tài)學特征系統(tǒng)闡述了徐聞燈樓角柳珊瑚的系統(tǒng)分類關(guān)系。本次研究結(jié)合國際上最新的柳珊瑚分類系統(tǒng)，對國內(nèi)原有的形態(tài)分類作了修正，這更將促進中國柳珊瑚資源情況為國際上認同和了解。叢柳珊瑚Paraplexaurasp.、Dichotellasp1，Dichotellasp2為新記錄屬，鞭柳珊瑚EllisellamaculataStuder,1878，為新記錄。 3.幾種不同柳珊瑚DNA提取方法的比較研究。由于柳珊瑚DNA

5、非常容易降解，難以提取，本研究通過2種樣品前處理方式和4種不同的DNA提取方法相結(jié)合，提取柳珊瑚Echinogoriaaurantiaca(Valenciennes)基因組DNA，并對其18SrRNA基因進行了克隆和序列分析。實驗結(jié)果表明，對于2種樣品前處理方式，采用純酒精進行樣品前處理比PBS(磷酸緩沖液)進行樣品前處理效果要好。在4種不同的DNA提取方法中，以CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)法提取基因組DNA效果最好，其余三種方法如

6、PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)法，高鹽法和酚/氯仿法的提取效果較差。并且不同樣品的鈣質(zhì)沉淀對DNA都有一定程度的吸附。另外，本研究通過PCR擴增、克隆測序得到柳珊瑚18SrRNA基因序列，并將其序列與Leptogorgiachilensis的18SrRNA基因序列在DNA序列上和RNA二級結(jié)構(gòu)上對比分析。結(jié)果表明，柳珊瑚18SrRNA基因序列非常保守，其變異率為1.21％。RNA二級結(jié)構(gòu)也非常保守，兩者大部分莖環(huán)結(jié)構(gòu)表現(xiàn)相同，少數(shù)結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出

7、差異性。RNA二級結(jié)構(gòu)對于柳珊瑚的分子系統(tǒng)發(fā)育分析可能有一定的參考價值。 4.柳珊瑚18SrDNA基因的分子系統(tǒng)學研究。本研究在國內(nèi)第一次報道了柳珊瑚18SrDNA基因的分子系統(tǒng)學研究。通過對4種柳珊瑚的18SrDNA基因的測序，結(jié)合Genbank中搜索到的24條其他柳珊瑚的18SrDNA序列，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明柳珊瑚可分為兩個進化枝，系統(tǒng)樹清楚表明了進化枝一的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，但未能很好反映進化枝二的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。進化枝一的