納米碳酸鈣攜載25-羥基膽甾醇用作骨修復(fù)的體外研究.pdf

1、隨著創(chuàng)傷、感染、腫瘤、意外等因素造成的骨組織缺損現(xiàn)象越來(lái)越多，骨修復(fù)方法以及材料的研究越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外科研工作者的重視。新型的骨修復(fù)材料需要具備組織相容性，良好的生物可降解性以及優(yōu)良的骨誘導(dǎo)性。目前研究比較多的是組織工程骨，但組織工程骨需要將細(xì)胞、生物活性分子負(fù)載到支架材料上，制備工藝復(fù)雜且成本較高，因此研究具有成骨誘導(dǎo)性的骨修復(fù)材料依然是骨修復(fù)研究的重中之重。碳酸鈣作為自然骨的組成成分之一，具有良好的生物相容性和一定的骨傳導(dǎo)性，且與羥

2、基磷灰石相比，碳酸鈣具備更好的生物可降解性，因此碳酸鈣具有應(yīng)用于骨修復(fù)材料的潛力。25-羥基膽甾醇具有良好的成骨誘導(dǎo)性，但其成骨誘導(dǎo)活性需要鈣離子的協(xié)助，因此本課題將25-羥基膽甾醇與制備的納米碳酸鈣復(fù)合，研究其對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化的影響，以期得到一種良好的骨修復(fù)材料。具體實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果如下：
　　1）利用共沉淀法，在聚丙烯酸的調(diào)控下合成納米碳酸鈣顆粒（Rod-CC NPs），得到的納米碳酸鈣為表面粗糙的實(shí)心棒狀，平均長(zhǎng)徑短徑分別

3、為240和90nm，平均長(zhǎng)徑比為2.6，大小均一，分散性較好，晶型主要為方解石和少量的球霰石。其表面ζ電位為-22.25±0.35mV，具備良好的水分散性；通過(guò)體外模擬實(shí)驗(yàn)研究了Rod-CC NPs的降解性能，結(jié)果顯示Rod-CC NPs在pH7.4的條件下降解了22.6％，在pH5.6條件下降解了45.2%；
　　2）將Rod-CC NPs培養(yǎng)細(xì)胞后做細(xì)胞切片，用透射電鏡觀察細(xì)胞對(duì)顆粒的吞噬，結(jié)果顯示，Rod-CC NPs可以被

4、包裹在囊泡內(nèi)運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)中；利用CCK-8法和細(xì)胞活死染色的方法驗(yàn)證納米顆粒的生物相容性，結(jié)果顯示Rod-CC NPs具有良好的細(xì)胞相容性，且有促進(jìn)MC3T3-E1生長(zhǎng)的趨勢(shì)；
　　3）將Rod-CC NPs與25-HC進(jìn)行簡(jiǎn)單的混合得到Rod-CC/25-HC復(fù)合物，復(fù)合物具有良好的分散性，且與納米顆粒復(fù)合之后可以明顯提高25-HC的細(xì)胞相容性；
　　4）利用CCK-8法驗(yàn)證Rod-CC NPs、25-HC以及Rod-CC

5、/25-HC組對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示Rod-CC NPs和Rod-CC/25-HC組都可以顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖；
　　5）通過(guò)檢測(cè)共培養(yǎng)3、7、14天后細(xì)胞的堿性磷酸酶活性，western blot法檢測(cè)共培養(yǎng)21天后骨鈣蛋白和骨唾液蛋白的分泌以及熒光定量PCR法檢測(cè)對(duì)應(yīng)基因mRNA的表達(dá)，證明Rod-CC NPs、25-HC以及Rod-CC/25-HC組對(duì)成骨細(xì)胞的分化都有一定的促進(jìn)作用，且Rod-CC NPs及Rod