蘆薈屬植物系統(tǒng)分類方法建立及親緣關(guān)系初探.pdf

1、蘆薈屬(Aloe)植物種類繁多，變異多樣，種質(zhì)資源異常豐富。由于蘆薈和近緣屬間雜交可育，不斷出現(xiàn)一些新的屬間雜交種；且蘆薈屬內(nèi)同名異種和異名同種現(xiàn)象多有發(fā)生，造成不同種或亞種間的親緣關(guān)系比較混亂，而有關(guān)其種問親緣關(guān)系的研究資料甚少。本文綜合應(yīng)用AFLP分子標(biāo)記、植物化學(xué)和形態(tài)解剖學(xué)等方法，建立適合于蘆薈屬植物分類的方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，并初步探討其種間的親緣關(guān)系。本文主要研究結(jié)果如下： 1．提取蘆薈基因組DNA時(shí)用改良CTAB法，在2

2、％CTAB中附加2％的PVP和2％的β-巰基乙醇作為提取緩沖液。同時(shí)在第二遍用氯仿一異戊醇(24：1)抽提時(shí)，加入等體積的飽和酚。 2．對(duì)影響AFLP體系的多個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明Mg<'2+>濃度取1.3mM，引物濃度各取10uM，模板DNA即預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋20倍時(shí)，選擇性擴(kuò)增的效果較為理想。 3．用4對(duì)引物組合對(duì)18份蘆薈材料進(jìn)行AFLP分析，共得到131條可統(tǒng)計(jì)的條帶，其中多態(tài)性條帶有125條，占條帶總數(shù)的95.

3、4％，每對(duì)引物都可以將18份供試材料完全區(qū)分開。此外，有些供試樣品可根據(jù)特征帶直接鑒別?；贏FLP所得聚類圖可以將18種蘆薈分為四個(gè)類群。第Ⅰ組包括適意蘆薈、17號(hào)蘆薈、皂葉蘆薈和木銼蘆薈；第Ⅱ組包括草原蘆薈、粉綠蘆薈、5號(hào)蘆薈、不夜城蘆薈、12號(hào)蘆薈和4號(hào)蘆薈；第Ⅲ組包括庫拉索蘆薈、木立蘆薈和中華蘆薈；第Ⅳ組包括8號(hào)蘆薈、杰克遜蘆薈、多齒蘆薈、大衛(wèi)蘆薈和密刺蘆薈。 4．HPLC結(jié)果表明，18種蘆薈樣品中的化學(xué)成分在種類和含量

4、上均有較大差異。用半薄切片觀察蘆薈葉片橫切面發(fā)現(xiàn)，蘆薈表皮角質(zhì)膜的厚度、表面紋飾，同化組織細(xì)胞的層數(shù)、形狀和排列方式存在明顯的種間差異。 5．AFLP標(biāo)記與HPLC的聚類結(jié)果有一定的相關(guān)性，但是也存在一些差異，兩者采用了不同的分類變量，從不同的角度對(duì)蘆薈進(jìn)行聚類分析，因此它們所揭示的多樣性是有差別的。AFLP分類結(jié)果與形態(tài)學(xué)特征基本吻合，形態(tài)學(xué)標(biāo)記有一定的局限性，但是它可以作為DNA分子標(biāo)記的有效補(bǔ)充。 6．AFLP和H