化學(xué)修飾對Trigger Factor分子伴侶功能的影響.pdf

1、細(xì)胞中蛋白的穩(wěn)態(tài)由眾多的蛋白因子來維持，這些因子共同形成一個可協(xié)調(diào)的穩(wěn)態(tài)網(wǎng)絡(luò)。分子伴侶是穩(wěn)態(tài)網(wǎng)絡(luò)成員中重要的一員，并且參與到所有的維持蛋白穩(wěn)態(tài)的活動中。新生蛋白通常需要分子伴侶的協(xié)助才可以有效地折疊成有功能的三維結(jié)構(gòu)。分子伴侶能夠協(xié)助新生肽鏈的折疊，確保新生肽鏈不會錯誤折疊或者聚集。大腸桿菌Trigger Factor（TF）是核糖體結(jié)合分子伴侶，是大腸桿菌內(nèi)新生肽鏈遇到的第一個分子伴侶。
　　TF的結(jié)構(gòu)中存在有一些特殊的區(qū)域，推

2、測與TF功能相關(guān)。為了了解這些區(qū)域?qū)F功能的作用，本研究通過定點突變方法將所選擇的14個位點對應(yīng)的氨基酸殘基用半胱氨酸殘基替換，隨后選取碘乙酰胺、碘乙酸、2-溴乙胺和N-苯基馬來酰亞胺對半胱氨酸殘基進(jìn)行化學(xué)修飾從而改變局部理化性質(zhì)；進(jìn)而以溶菌酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶作為底物蛋白，檢測TF突變體幫助變性蛋白質(zhì)重新折疊以及阻止變性蛋白聚集的能力。通過比較化學(xué)修飾前后TF分子伴侶活性的差異，分析了這些區(qū)域在TF分子伴侶功能中的作用。研究結(jié)