擬南芥活性氧不敏感型突變體的篩選及其特征分析.pdf

1、河南大學(xué)碩士學(xué)位論文擬南芥活性氧不敏感型突變體的篩選及其特征分析姓名：何金環(huán)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：宋純鵬董發(fā)才2001.1.1河南大掌200l屆碩士掌位論文中文摘要l多種環(huán)境脅迫會(huì)導(dǎo)致活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)產(chǎn)生，主要包括H20202：，OH和102等，大量研究表明過氧化氫(H202)可能作為第二信使參與植物細(xì)胞的許多生理代訪過程，因而有關(guān)Hz02信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究就愈顯重要。但到目

2、前為止，有關(guān)植物細(xì)胞中H202信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)節(jié)及其與胞內(nèi)其它信號(hào)分子的時(shí)空關(guān)系還知之甚少。而突變體分析作為剖析復(fù)雜生物學(xué)過程的強(qiáng)有力的工具，已被廣泛用于植物發(fā)育和代謝途徑的研究。毫無疑問擬南芥活性氧不敏感突變體的篩選，不僅將為人們滌入研究活性氧在細(xì)胞內(nèi)的作用提供良好的實(shí)驗(yàn)材料，而且還將大大加深人們對(duì)H202信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的再認(rèn)識(shí)。：、本實(shí)驗(yàn)以擬南芥(Arabidbpsisthaliana)為材料，采HjO3％乙酰甲基磺酸(ethylmeth

3、anesulfonate，EMS)化學(xué)誘變及H202氧化脅迫選擇，以幼苗根在重力作用下的彎曲生長(zhǎng)為指標(biāo)(root—bendingassay)，篩選得到活性氧不敏感突變體(reactiveoxygenspeciesinsensitive，ros)，并對(duì)篩選到的突變體進(jìn)行初步的遺傳和生理生化特性分析。，j通過雜交實(shí)驗(yàn)對(duì)突變體進(jìn)行遺傳分析，F(xiàn)1和F2對(duì)H202不敏感性在10～mol／LH202L培養(yǎng)基上檢測(cè)。結(jié)果顯示Fl代全部不抗H202，F(xiàn)

4、。代白花授粉所得的F2代，不抗與抗≯近似3：1的性狀分離。證明突變株對(duì)活性氧不敏感性狀為隱性單基因突變所致。H202作用F，突變體根的生長(zhǎng)、氣孔變化都表現(xiàn)出對(duì)H202抑制作用的減弱，即突變體對(duì)H202的響應(yīng)發(fā)生了變化。運(yùn)用GBC916紫外一可見分光光度計(jì)進(jìn)一步分析11，0，對(duì)突變體膜脂過氧化的情況，結(jié)果表明隨著H202濃度的升高，野生型和ros突變體胞內(nèi)的MDA含量均有所增加，但rOS突變體比野生型增加幅度明顯減小。FOS突變體胞內(nèi)MD