DNA的硅藻土純化法與臍橙番茄紅素β環(huán)化酶基因篩選及上游序列分析.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文DNA的硅藻土純化法與臍橙番茄紅素β環(huán)化酶基因篩選及上游序列分析姓名：余宏傲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：徐昌杰20060501塑堅(jiān)查堂堡!：蘭竺絲蘭!蔓!塑壁簍絲些鯊!些堂塑堂竺堂!型：些墮蘭型墮絲絲!：鱟!型!鯊i——摘要論文分為三部分。第一部分為DNA的純化研究，先研究了硅藻土在質(zhì)粒DNA純化上的應(yīng)用，系統(tǒng)研究了硅藻土各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)質(zhì)粒DNA純化的影響，最后將硅藻土純化應(yīng)用于果樹基因綃DNA提取和純化；篩

2、二部分為應(yīng)用PCR法從橙基因組文庫(kù)篩選番茄紅紊p環(huán)化酶等位基因2(LCYb2)；第11分為已篩選番茄紅素B環(huán)化酶等位基因1(LCrb1)的上游I芋iq分析。研究取得了以下主要結(jié)果。1研究表明，沉降速度為6cm／min、lcm／min和025cm／min的硅藻土顆粒的DNA吸附能力約分別為0009gg／mg、O3ltglmg和25gg／mg。沉降速度為025一Icm／min的硅藻土顆粒可應(yīng)用于DNA純化。為吸附1ggLDNA，以加入20斗

3、I硅藻土懸浮液(約含10mg硅藻土顆粒)最為合適，回收率達(dá)77，31％。2應(yīng)用改良硅藻土法純化一長(zhǎng)為14953bp的低拷貝質(zhì)粒pLZl4，所得質(zhì)粒純度達(dá)2387％，比來純化前提高了1l06倍，經(jīng)純化的pLZl4質(zhì)粒測(cè)序信號(hào)強(qiáng)、無誤認(rèn)堿基，而未經(jīng)純化的質(zhì)粒測(cè)序時(shí)信號(hào)弱、錯(cuò)誤普遍存在。應(yīng)用硅藻土法我們成功去除臍橙果肉，多酚含量較高的多年生果樹老葉中雜質(zhì)，得到純度和含量均較高的DNA。獲得的DNA凝膠電泳條帶清晰，無拖尾和明顯滯留。3根據(jù)部分

4、番茄紅素D環(huán)化酶等位糍因2(LCFb2)設(shè)計(jì)特異引物，通過特異引物與通用引物配芹1篩選得到了僅在文庫(kù)和基因組DNA上擴(kuò)增的引物。該引物應(yīng)用于文庫(kù)篩選時(shí)發(fā)現(xiàn)，目標(biāo)噬菌體稀釋鋪板后，PCR條帶變?nèi)酰浦奁浞敝衬芰γ黠@弱于噬菌體文庫(kù)的平均值，本研究通過多種方法優(yōu)化篩選，提高目標(biāo)噬菌體的繁殖能力￡SaT曰標(biāo)噬菌體在篩選過程中出現(xiàn)的幾率，為繼續(xù)篩選打下了基礎(chǔ)。4將己篩選的含番茄紅素p環(huán)化酶等位基因】(LClCbl)的噬菌體提取鈍化后測(cè)序獲得其上游