大熊貓基因資源庫構(gòu)建及糞便高質(zhì)量DNA提取方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、1.本文以大熊貓的成纖維細(xì)胞和肝組織細(xì)胞為材料，以pBeloBAC11為載體，構(gòu)建了大熊貓基因組的細(xì)菌人工染色體DNA文庫。該文庫包含了93700個克隆，分別保存于977塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。經(jīng)過對100個隨機(jī)抽樣的克隆分析表明，插入片段的平均大小為160kb，相當(dāng)于大熊貓基因組的5倍，即5個庫容量。酶切10個克隆證明，經(jīng)過100代繁殖后，其插入片段仍穩(wěn)定不變。 2.采用RNeasyMiniKit提取大熊貓肝臟和腦組織的總RNA

2、，經(jīng)oligotex試劑盒純化得到mRNA。利用SMART(switchingmechanismat5’endofRNAtranscript)技術(shù)，構(gòu)建了肝臟和腦組織的全長cDNA文庫。在構(gòu)建完成的文庫中，肝臟文庫含有約5.0×106個重組子，而腦組織文庫含有約3.5×106個重組子。在2個文庫中，插入的cDNA長度為400bp-4kb，重組率高達(dá)90％以上。鑒定結(jié)果表明，大熊貓肝臟和腦組織cDNA文庫質(zhì)量良好，為進(jìn)一步篩選和克隆大熊貓

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