深圳市龍崗區(qū)部分蚊傳蟲媒病毒的分子流行病學研究.pdf

1、目的：了解深圳市龍崗區(qū)成蚊攜帶蟲媒病毒的情況,探討相關病毒株的分子流行病學特征,為蚊媒傳染病的預防與控制提供依據。
　　方法：2009~2011年,在龍崗區(qū)的龍城、南灣、坂田等10個街道及21個大運場館室內外環(huán)境設立監(jiān)測點,按照《全國病媒生物監(jiān)測方案》監(jiān)測方法采集成蚊標本。采用SYBR GreenⅠ實時熒光RT-PCR進行乙腦病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、登革病毒(Dengue virus

2、,DV)和NamDinh病毒(Nam Dinh virus,NDiV)等蟲媒病毒的檢測,分析成蚊病毒感染情況;用C6/36與BHK-21細胞進行相關病毒的分離工作,以TaqMan-MGB實時熒光RT-PCR與基因擴增技術進行病毒鑒定。測序基因擴增片段,用ClustalX、Mega4、DNASTAR等軟件對測序結果進行同源性分析與構建系統(tǒng)進化樹。
　　結果：共采集成蚊25556只,隸屬3屬7種,分別是按蚊屬的中華按蚊、微小按蚊、嗜人

3、按蚊;庫蚊屬的三帶喙庫蚊和致倦庫蚊;伊蚊屬的東鄉(xiāng)伊蚊和白紋伊蚊。致倦庫蚊23962只,為優(yōu)勢蚊種,占93.8％;東鄉(xiāng)伊蚊637只,占2.5%;白紋伊蚊有408只,占1.6%;三帶喙庫蚊385只,占1.5%;其他種類占0.6%。
　　SYBR GreenⅡ實時熒光RT-PCR檢測結果顯示,有2批致倦庫蚊和1批三帶喙庫蚊標本檢出乙腦病毒核酸陽性,白紋伊蚊和東鄉(xiāng)伊蚊標本各1批檢出登革病毒核酸陽性;4批致倦庫蚊標本檢出Nam Dinh病毒

4、核酸陽性。
　　4批NDiV核酸陽性標本能引起C6/36細胞出現典型的細胞病變(CPE),但不引起B(yǎng)HK-21細胞的病變。SYBR GreenⅠ實時熒光PCR檢測JEV和DV核酸陽性的標本接種C6/36細胞和BHK-21細胞后,未能分離到相關病毒。
　　用TaqMan-MGB實時熒光RT-PCR檢測NDiV分離物中病毒核酸隨時間推延的增殖情況,檢測結果顯示0天、3天、6天、9天分離物的Ct值呈梯度減少,表明隨分離時間的增加,

5、培養(yǎng)液中病毒核酸含量同步遞增。
　　對4株深圳NDiV進行RdRp基因和部分ZmHel1基因的擴增,擴增產物在2%瓊脂糖電泳均出現目的條帶。4株分離株RdRp基因核苷酸序列間同源性在99.8~100.0%之間,氨基酸序列同源性為99.7~100.0%;深圳分離株的RdRp基因核苷酸和氨基酸序列與越南代表株NDiV(02VN178)的同源性均達99%以上;系統(tǒng)進化樹分析,深圳NDiV分離株與越南NDiV代表株的親緣性最近,同屬一個進