共軛亞油酸抑制乳腺脂肪合成相關(guān)基因的表達研究.pdf

1、哺乳動物乳腺脂肪合成的機制仍然還有許多未知之處,近來研究發(fā)現(xiàn)在食物中添加油脂,特別是共軛亞油酸,對于哺乳動物乳腺脂肪合成具有調(diào)節(jié)作用。因此本試驗就通過在奶牛和小鼠日糧中加入共軛亞油酸研究其對于乳腺的脂肪合成相關(guān)基因表達的調(diào)控。分為以下五個部分:
　　 (1)試驗采用熒光定量PCR檢測了泌乳小鼠乳腺中與脂肪合成和分泌相關(guān)的20個基因的mRNA豐度和表達差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乳腺中脂肪酸攝取的基因(LPL)、羧化酶(ACACA)、脫氫酶(

2、SCD)和脂肪滴形成蛋白(XDH,BTN1A1,ADFP)都具有高mRNA表達豐度(>5％),CD36,FASN和AGPAT6具有中等mRNA表達豐度(>1％),與妊娠期乳腺的基因表達相比,這些基因mRNA的表達均有顯著上調(diào)。調(diào)節(jié)因子中SREBF基因的mRNA具有中等的表達豐度(2.22％),并且在泌乳期mRNA的表達有10倍上調(diào),而PPARγ基因的mRNA表達豐度很低(0.02％),并且與妊娠期相比mRNA的表達沒有顯著變化。

3、　　 (2)CLA能夠降低乳脂肪的合成,但其中的機制并不清楚。因此試驗選取了16頭泌乳中期的奶牛,分為對照組(基礎(chǔ)日糧),共軛亞油酸鈣低劑節(jié)組(基礎(chǔ)日糧+50g/頭/天),中劑量組(基礎(chǔ)日糧+100g/頭/天),高劑量組(基礎(chǔ)日糧+200g/頭/天),試驗共進行14天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)日糧中添加共軛亞油酸鈣對于奶牛的乳產(chǎn)量、乳蛋白和乳糖沒有影響,但是顯著降低了乳脂肪的含量,對照組奶牛乳脂肪含量為3.54 g/100ml,共軛亞油酸鈣低、中和高

4、劑量組奶牛乳脂肪含量分別為2.94 g/100l、2.58 g/100ml和2.21g/100ml。檢測脂肪酸組成發(fā)現(xiàn)與對照組相比,共軛亞油酸鈣組奶牛乳汁的中、短鏈脂肪酸(C6、C10、C12、C16)含量顯著降低(P<0.05),而長鏈脂肪酸(C18、c18:1)的含量有顯著增加(P<0.05)。計算脂肪酸產(chǎn)量,發(fā)現(xiàn)添加共軛亞油酸鈣顯著降低各種脂肪酸的產(chǎn)量(P<0.05)。
　　 (3)試驗選取了8頭泌乳中期的奶牛隨機分為2組

5、飼喂不同日糧,分別是對照組(基礎(chǔ)日糧+棕櫚酸鈣200g/頭/天),共軛亞油酸鈣組(基礎(chǔ)日糧+共軛亞油酸鈣200g/頭/天),試驗共進行14天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比,日糧中添加共軛亞油酸鈣對于奶牛乳蛋白、乳糖含量沒有顯著影響,但是顯著降低了乳脂肪含量,對照組奶牛乳脂肪含量為3.26g/100ml,共軛亞油酸鈣組奶牛乳脂肪含量為2.44 g/100ml。檢測脂肪酸組成發(fā)現(xiàn)共軛亞油酸鈣顯著降低了乳汁的中、短鏈脂肪酸(C6、C8、C10、C16

6、)含量(P<0.05),而顯著增加了長鏈脂肪酸(C18、C18:1、C18:2)的含量(P<0.05)。計算脂肪酸產(chǎn)量,發(fā)現(xiàn)添加共軛亞油酸鈣顯著降低各種脂肪酸的產(chǎn)量。對奶牛乳腺脂肪合成基因表達檢測發(fā)現(xiàn),CLA顯著降低了乳腺組織脂肪合成酶(ACACA、FASN、SCD、LPL)基因的表達,并且也抑制了調(diào)節(jié)岡子SREBF和INSIG1的基因表達,這些結(jié)果表明CLA處理能夠抑制乳腺組織對于外源性脂肪酸的攝取和細(xì)胞的自身合成,在這其中SREBF

7、可能起到主要作用。
　　 (4)試驗選取泌乳昆明鼠在12 h光照和12 h黑暗的條件下喂養(yǎng),環(huán)境溫度20～25℃,隨機分為對照組(2％花生油):低劑量組(0.5％CLA+1.5％花生油)；中劑量組(1％CLA+1％花生油)；高劑量組(1.5％CLA+0.5％花生油),每組6只。母鼠分娩當(dāng)天起將每窩仔鼠一律調(diào)整為8只,并白分娩當(dāng)天起每天按時記錄每組母鼠體重,母鼠采食量及仔鼠窩重至泌乳第14天。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CLA飼喂期間母鼠的體重沒有

8、顯著變化,但采食量顯著降低。仔鼠的體重在出生時沒有差異,隨著試驗的進行,高劑量組仔鼠的窩重增加緩慢,從第8天開始顯著低于對照組(P<0.01),到試驗結(jié)束時對照組仔鼠窩重為67.93g,而對照組為51.82 g(P<0.001),高劑量組母鼠的泌乳鼙和乳汁乳脂肪含量與對照組相比也有顯著降低,而乳蛋白和乳糖的含量沒有顯著差異。檢測乳腺脂肪合成相關(guān)基因的表達發(fā)現(xiàn),與對照組相比,高劑量組母鼠乳腺組織的SCD、LPL、FASN、ACACA基因表

9、達顯著降低(p<0.05),并且調(diào)節(jié)因子SREBF、INSIG1、PPARγ和PPARGC1a mRNA的表達也顯著下調(diào)。
　　 (5)試驗將泌乳鼠隨機分為1.5％亞油酸組(對照組)、1.5％CLA組(試驗組),每組6只,從第4天飼喂日糧至第15天,結(jié)果發(fā)現(xiàn)母鼠采食量和仔鼠窩重與對照組相比有顯著降低(P<0.05),CLA組母鼠的泌乳量顯著減少,但是乳腺和肝臟的重量沒有顯著差異(P>0.05),檢測母鼠血液發(fā)現(xiàn),CLA組母鼠血液