新型雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器的研制與應(yīng)用.pdf

1、第一部分新型雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器研制
　　 研究背景：
　　 肝功能衰竭是各種肝病的終末期表現(xiàn)。患者病情危重,病死率高。肝臟移植手術(shù)是目前公認(rèn)有效的治療方法。但由于供體缺乏、高額的治療費(fèi)用以及患者需長(zhǎng)時(shí)間服用免疫抑制劑等原因,極大地限制了肝移植手術(shù)的廣泛開(kāi)展。以體外培養(yǎng)肝細(xì)胞為基礎(chǔ)的生物人工肝等治療手段的出現(xiàn),有望使部分患者肝功能自行恢復(fù)或順利完成肝移植手術(shù)。然而,如何合理設(shè)計(jì)新型生物反應(yīng)器,實(shí)現(xiàn)體外肝細(xì)胞的大規(guī)

2、模培養(yǎng)及其培養(yǎng)過(guò)程中肝細(xì)胞功能與活率的有效維持,仍是目前強(qiáng)烈限制生物人工肝發(fā)展的瓶頸問(wèn)題,也是目前亟待解決的重要課題。
　　 生物反應(yīng)器是整個(gè)BAL的核心部分,其性能將直接關(guān)系到生物人工肝的支持效果。理想的生物人工肝生物反應(yīng)器應(yīng)滿(mǎn)足如下條件:1.為肝細(xì)胞提供良好生長(zhǎng)和代謝環(huán)境；2.實(shí)現(xiàn)有效的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、氧氣及代謝產(chǎn)物雙向物質(zhì)傳輸；3.保護(hù)肝細(xì)胞免受體內(nèi)的免疫損傷；4.可進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模,滿(mǎn)足臨床治療需求；5.最大可能減小反應(yīng)器內(nèi)

3、的培養(yǎng)死腔。為此,國(guó)內(nèi)外學(xué)者研制出了各種結(jié)構(gòu)形態(tài)的生物反應(yīng)器,主要有四種模式:中空纖維型、單層平板培養(yǎng)型、灌流平板/支架型、包裹式微球/懸液或柱狀反應(yīng)器及其它結(jié)構(gòu)復(fù)雜的復(fù)合式生物反應(yīng)器等。雖然經(jīng)過(guò)二十余年發(fā)展,已有部分生物人工肝生物反應(yīng)器已進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn),但目前仍未有一種理想的生物反應(yīng)器可充分滿(mǎn)足臨床運(yùn)用需要。
　　 大量研究表明,由美國(guó)航空航天局(NASA)設(shè)計(jì)的50ml小體積旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(The Rotary Cell

4、Culture System,以下簡(jiǎn)稱(chēng)RCCS-1),由于其獨(dú)特的低剪切力、高效物質(zhì)交換,持續(xù)模擬微重力培養(yǎng)環(huán)境可增強(qiáng)體外培養(yǎng)細(xì)胞與細(xì)胞間接觸,形成三維結(jié)構(gòu)樣組織,促進(jìn)細(xì)胞增殖分化,改善及維持體外培養(yǎng)細(xì)胞功能,目前已成功廣泛地運(yùn)用于胚胎干細(xì)胞、角膜細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞等多個(gè)組織工程領(lǐng)域中。
　　 為進(jìn)一步深入研究微重力生物反應(yīng)器作為一種新型生物人工肝生物反應(yīng)器的可行性本課題組引進(jìn)了美國(guó)航空航天局(National Aero

5、nautics and SpaceAdministration簡(jiǎn)稱(chēng)NASA)設(shè)計(jì)的500ml體積的新型旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器(Rotary Culture MWTM,簡(jiǎn)稱(chēng)RCMW),但經(jīng)過(guò)反復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究表明,美國(guó)航空航天局生產(chǎn)的RCMW微重力生物反應(yīng)器在設(shè)計(jì)上存在嚴(yán)重的缺陷,完全不能滿(mǎn)足生物人工肝生物反應(yīng)器的需求,為此,本課題擬通過(guò)對(duì)RCMW微重力生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)上存在的問(wèn)題進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn),設(shè)計(jì)出一種具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型雙向旋轉(zhuǎn)灌注式微

6、重力生物反應(yīng)器,為新一代生物人工肝生物反應(yīng)器的發(fā)展開(kāi)辟一個(gè)新的方向與思路。
　　 研究目的：
　　 通過(guò)對(duì)RCMW微重力生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)上存在的問(wèn)題進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn),設(shè)計(jì)出了一種新型雙向旋轉(zhuǎn)灌注式微重力生物反應(yīng)器。
　　 研究方法：
　　 在美國(guó)NASA公司RCMW微重力生物反應(yīng)器的基礎(chǔ)上,通過(guò)內(nèi)芯及循環(huán)模式優(yōu)化構(gòu)建,形成由流向控制器、細(xì)胞培養(yǎng)罐、培養(yǎng)液池、蠕動(dòng)泵動(dòng)力系統(tǒng)、膜肺、供氣系統(tǒng)組成的新型雙向旋轉(zhuǎn)灌注微

7、重力生物反應(yīng)器系統(tǒng)。人肝細(xì)胞(CL-1)在RCMW微重力生物反應(yīng)器(RCMW組)、外置氧合器RCMW微重力生物反應(yīng)器(RCMW高氧組)及雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器(雙向反應(yīng)器組)中,持續(xù)微載體三維培養(yǎng)7天,并通過(guò)MTT染色、細(xì)胞計(jì)數(shù)、培養(yǎng)上清中ALT、AST、白蛋白、尿素濃度等指標(biāo)測(cè)定,比較各組肝細(xì)胞活力、數(shù)量和功能差異。
　　 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量的方差

8、分析,每組不同時(shí)間點(diǎn)之間的分析采用單組的重復(fù)測(cè)量方差分析,同一時(shí)間點(diǎn)的不同組別之間采用單向方差分析,當(dāng)方差不齊時(shí)采用Welch方法。多重比較當(dāng)方差齊性時(shí)采用LSD方法,當(dāng)方差不齊時(shí)采用Tamhane'sT2方法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05.
　　 研究結(jié)果：
　　 美國(guó)NASA公司商品化RCMW微重力生物反應(yīng)器存在微載體/細(xì)胞堵塞,雙向物質(zhì)交換效率低下及出現(xiàn)培養(yǎng)死腔等缺點(diǎn);而改進(jìn)后雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器中雙向物質(zhì)交換效率

9、明顯提高,微載體/細(xì)胞均勻分布于整個(gè)培養(yǎng)罐中,不存在培養(yǎng)死腔。倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)及MTT細(xì)胞活力染色結(jié)果可見(jiàn),雙向反應(yīng)器組人肝細(xì)胞(CL-1)的數(shù)量與活力均明顯優(yōu)于RCMW組及RCMW高氧組。生長(zhǎng)曲線(xiàn)結(jié)果顯示,RCMW組、RCMW高氧組及雙向反應(yīng)器組人肝細(xì)胞密度均為先升高后逐漸下降,分別于第2天、第3天、第5天達(dá)肝細(xì)胞密度峰值8.8±0.57×105個(gè)/ml、12.92±0.98×105個(gè)/ml、32.58±1.44×105個(gè)/ml,且

10、雙向反應(yīng)器組人肝細(xì)胞密度于第2至7天均明顯高于RCMW組及RCMW高氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。肝細(xì)胞功能結(jié)果顯示,RCMW組、RCMW高氧組及雙向反應(yīng)器組白蛋白、尿素合成功能均為先升高后逐漸下降,分別于第3天、第3天及第5天達(dá)峰值,且雙向反應(yīng)器組上清白蛋白、尿素濃度于第1至7天均明顯高于RCMW組及RCMW高氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。此外,雙向反應(yīng)器組上清ALT、AST濃度于第1至7天均明顯低于RCMW組

11、及RCMW高氧組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 研究結(jié)論：
　　 本研究通過(guò)對(duì)RCMW微重力生物反應(yīng)器設(shè)計(jì)上存在的問(wèn)題進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn),成功設(shè)計(jì)出了一種新型雙向旋轉(zhuǎn)灌注式微重力生物反應(yīng)器,可有效解決商品化RCMW微重力生物反應(yīng)器中存在的各種設(shè)計(jì)缺點(diǎn),大大提高體外培養(yǎng)人肝細(xì)胞的密度、活率及功能,有望成為新一代生物人工肝生物反應(yīng)器。
　　 第二部分雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器人肝細(xì)胞、肝星形細(xì)胞共培養(yǎng)研究<

12、br>　　 研究背景：
　　 如何能盡最大可能地模擬肝細(xì)胞體內(nèi)生存的微環(huán)境,使肝細(xì)胞能持續(xù)大量增殖分化,保持較高生物活性,且較好地保持肝細(xì)胞的各種生物功能是目前限制生物人工肝體外肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)發(fā)展的瓶頸問(wèn)題。為此,人們不斷改進(jìn)肝細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。
　　 體內(nèi)肝臟細(xì)胞由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、肝星形細(xì)胞及庫(kù)否細(xì)胞等肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞組成。它們?cè)阱e(cuò)綜復(fù)雜的三維細(xì)胞外基質(zhì)中,通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞與細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)間的相互通訊,精確地

13、發(fā)揮著各自特異的生物學(xué)功能。這些重要的體內(nèi)生理調(diào)節(jié)作用對(duì)于體內(nèi)肝細(xì)胞功能與活性具有重要的作用。目前很多肝細(xì)胞體外培養(yǎng)研究中都在嘗試盡可能地模擬體內(nèi)這種生理結(jié)構(gòu),并經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究已經(jīng)表明,通過(guò)與庫(kù)否細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等肝內(nèi)外非實(shí)質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng),可顯著增強(qiáng)并維持體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的各種肝特異性功能。肝星形細(xì)胞位于肝葉Disse間隙內(nèi),可合成大量ECM、攝取并貯存維生素A。正常肝組織內(nèi)星形細(xì)胞的數(shù)量雖然不多(約占肝小葉的1％),但其

14、細(xì)胞表面細(xì)長(zhǎng)突起和皺折大大增加了其與肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞微絨毛的接觸面,從而形成以星形細(xì)胞為中介的三位一體的結(jié)構(gòu)功能單位,稱(chēng)為星形細(xì)胞單位。將肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和星形細(xì)胞混合培養(yǎng)可望獲得與肝小葉相似的功能,為生物人工肝提供具有良好生理功能的肝細(xì)胞來(lái)源。
　　 本課題在前期工作中研制成功具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器,與目前現(xiàn)存的其它類(lèi)型生物反應(yīng)器培養(yǎng)系統(tǒng)相比,有如下優(yōu)點(diǎn):低剪切力,對(duì)細(xì)胞損傷小:高效的雙向物質(zhì)交換:持續(xù)模擬微重力環(huán)境

15、有利于細(xì)胞增值分化,有利于細(xì)胞與細(xì)胞間接觸,形成三維結(jié)構(gòu)樣組織易于細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)為最大可能地模擬肝細(xì)胞體內(nèi)生存的微環(huán)境,使肝細(xì)胞能持續(xù)大量增殖分化,保持較高生物活性,較好地保持肝細(xì)胞功能,本課題擬在前期雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器微載體人肝細(xì)胞的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步進(jìn)行微載體人肝細(xì)胞、人肝星形細(xì)胞三維共培養(yǎng)研究。
　　 研究目的：
　　 通過(guò)人肝細(xì)胞、肝星形細(xì)胞微載體三維共培養(yǎng)進(jìn)一步提高肝細(xì)胞數(shù)量、活力及功能。

16、>　　 研究方法：
　　 人肝細(xì)胞在微載體三維靜置培養(yǎng)(微載體靜置單培養(yǎng)組)、微載體人肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞三維靜置共培養(yǎng)(微載體靜置共培養(yǎng)組)、雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器微載體三維培養(yǎng)(雙向反應(yīng)器單培養(yǎng)組)及雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器微載體人肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞三維共培養(yǎng)(雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組)四種不同培養(yǎng)條件下連續(xù)培養(yǎng)7天。通過(guò)掃描電子顯微鏡、倒置顯微鏡觀察及MTT染色比較各組肝細(xì)胞生長(zhǎng)的形態(tài)、細(xì)胞活力差異,并通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、培

17、養(yǎng)上清中ALT、AST、白蛋白、尿素濃度等指標(biāo)測(cè)定,比較各組肝細(xì)胞數(shù)量和功能差異。
　　 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量的方差分析,每組不同時(shí)間點(diǎn)之間的分析采用單組的重復(fù)測(cè)量方差分析,同一時(shí)間點(diǎn)的不同組別之間采用單向方差分析,當(dāng)方差不齊時(shí)采用Welch方法。多重比較當(dāng)方差齊性時(shí)采用LSD方法,當(dāng)方差不齊時(shí)采用Tamhane'sT2方法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05.
　

18、　 研究結(jié)果：
　　 倒置顯微鏡、掃描電子顯微鏡及MTT細(xì)胞活力染色結(jié)果可見(jiàn),微載體靜置共培養(yǎng)組及雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組中,多個(gè)微載體間借“細(xì)胞橋”相互聚集在一起組成較大的微載體細(xì)胞組織塊,細(xì)胞數(shù)量及活力均明顯優(yōu)于相應(yīng)的微載體靜置單培養(yǎng)組及雙向反應(yīng)器單培養(yǎng)組。生長(zhǎng)曲線(xiàn)結(jié)果顯示,微載體靜置單培養(yǎng)組、微載體靜置共培養(yǎng)組、雙向反應(yīng)器單培養(yǎng)組及雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組四組肝細(xì)胞密度均為先升高后逐漸下降,四組分別于第3天、第4天、第5天及第5天達(dá)

19、峰值:8.22±0.60×105/ml、13.80±1.12×105/ml、32.62±2.51×105/ml和39.38±3.67×105/ml雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組肝細(xì)胞峰值密度明顯高于其它三組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。微載體靜置共培養(yǎng)組肝細(xì)胞密度于第3至7天均明顯高于微載體靜置單培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組肝細(xì)胞密度于第2至7天均明顯高于雙向反應(yīng)器單培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05

20、)。雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組肝細(xì)胞密度于第1至7天均明顯高于微載體靜置共培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。肝細(xì)胞功能結(jié)果顯示,雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組上清尿素、白蛋白峰值濃度明顯高于其它三組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。微載體靜置共培養(yǎng)組上清尿素濃度、白蛋白濃度于第2至7天均明顯高于微載體靜置單培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組上清尿素濃度、白蛋白濃度于第2至7天均明顯高于雙向反應(yīng)器單培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)

21、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雙向反應(yīng)器共培養(yǎng)組上清尿素濃度、白蛋白濃度于第1至7天均明顯高于微載體靜置共培養(yǎng)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 研究結(jié)論：
　　 1、人肝細(xì)胞、肝星形細(xì)胞共培養(yǎng)能進(jìn)一步提高肝細(xì)胞的功能表達(dá)、延長(zhǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間。
　　 2、雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器微載體人肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞三維共培養(yǎng)是維持肝細(xì)胞大量增殖分化并保持肝細(xì)胞功能一種較為理想的體外肝細(xì)胞培養(yǎng)模式。
　　

22、第三部分肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)保護(hù)液的研制
　　 研究背景：
　　 肝細(xì)胞是生物人工肝(BAL)系統(tǒng)的核心。生物人工肝(BAL)對(duì)肝功能衰竭病人的肝支持作用完全依賴(lài)于所用肝細(xì)胞的特異性生物學(xué)功能。目前認(rèn)為,生物人工肝要達(dá)到理想支持效果至少需要1010以上數(shù)量級(jí)的細(xì)胞,而在保障細(xì)胞活性的條件下,肝細(xì)胞數(shù)量越多,其支持及治療效果將越佳,因此,肝細(xì)胞體外大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)已成為生物人工肝技術(shù)發(fā)展的核心技術(shù)。雖然肝細(xì)胞體外大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)已

23、取得了許多重大的進(jìn)展,如新型生物反應(yīng)器研制及共培養(yǎng)等培養(yǎng)模式優(yōu)化等,但肝細(xì)胞在體外大規(guī)模培養(yǎng)過(guò)程中仍容易受到氧氣營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足、代謝產(chǎn)物蓄積等各種因素的損傷,從而導(dǎo)致肝細(xì)胞的活性及功能下降。
　　 目前研究表明,在肝細(xì)胞體外大規(guī)模培養(yǎng)過(guò)程中,各種損傷因素所引起的肝細(xì)胞凋亡正是導(dǎo)致肝細(xì)胞活性與功能下降的主要原因。為此,本課題擬通過(guò)研制肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)保護(hù)液,有效減輕規(guī)?；囵B(yǎng)中各種培養(yǎng)環(huán)境因素對(duì)肝細(xì)胞造成的損傷,并抑制肝細(xì)胞凋亡

24、的發(fā)生,從而達(dá)到進(jìn)一步提高并維持肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)的密度和功能狀態(tài)的效果。
　　 研究目的：
　　 研制一種肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)保護(hù)液配方,可在同等條件下有效減輕規(guī)模化培養(yǎng)中各種培養(yǎng)環(huán)境因素對(duì)肝細(xì)胞造成的損傷,以進(jìn)一步提高肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)的密度和功能狀態(tài)。
　　 研究方法：
　　 根據(jù)國(guó)內(nèi)外研究成果及前期預(yù)實(shí)驗(yàn),自行研制出肝細(xì)胞保護(hù)液配方,成分主要包括黃芪、丹參、果糖、胰島素及維生素C等。人肝細(xì)胞在RCMW微重

25、力生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)(RCMW組)、RCMW微重力生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)+肝細(xì)胞保護(hù)液(RCMW保護(hù)液組)、雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)(雙向反應(yīng)器組)及雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器微載體培養(yǎng)+肝細(xì)胞保護(hù)液(雙向反應(yīng)器保護(hù)液組)四種不同培養(yǎng)條件下連續(xù)培養(yǎng)7天,通過(guò)倒置顯微鏡觀察及MTT染色比較各組肝細(xì)胞生長(zhǎng)的形態(tài)、細(xì)胞活力差異,并通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)、培養(yǎng)上清中ALT、AST、白蛋白、尿素等指標(biāo)測(cè)定,比較各組肝細(xì)胞數(shù)量和功能情況。以評(píng)

26、價(jià)上述保護(hù)液配方在RCMW及雙向旋轉(zhuǎn)灌注微重力生物反應(yīng)器兩種不同的大體積(500ml)生物反應(yīng)器中的肝細(xì)胞保護(hù)效果。
　　 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量的方差分析,每組不同時(shí)間點(diǎn)之間的分析采用單組的重復(fù)測(cè)量方差分析,同一時(shí)間點(diǎn)的不同組別之間采用單向方差分析,當(dāng)方差不齊時(shí)采用Welch方法。多重比較當(dāng)方差齊性時(shí)采用LSD方法,當(dāng)方差不齊時(shí)采用Tamhane'sT2方法

27、。檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05.
　　 研究結(jié)果：
　　 倒置顯微鏡下形態(tài)學(xué)及MTT細(xì)胞活力染色結(jié)果可見(jiàn),RCMW保護(hù)液組及雙向反應(yīng)器組肝細(xì)胞數(shù)量及活力均明顯優(yōu)于相應(yīng)的RCMW組雙向反應(yīng)器組。生長(zhǎng)曲線(xiàn)結(jié)果及肝細(xì)胞功顯示,RCMW組、RCMW保護(hù)液組、雙向反應(yīng)器組及雙向反應(yīng)器保護(hù)液組四組肝細(xì)胞密度均為先升高后逐漸下降,四組分別于第2天、第4天、第5天及第5天達(dá)峰值:8.82±0.59×105/ml、13.60±1.00×105/m

28、l、32.62±2.68×105/ml和39.9±3.08×105/ml。RCMW保護(hù)液組細(xì)胞密度于第3至7天均明顯高于RCMW組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雙向反應(yīng)器保護(hù)液組細(xì)胞密度于第2至7天均明顯高于雙向反應(yīng)器組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RCMW保護(hù)液組上清尿素、白蛋白濃度于第1至7天均明顯高于RCMW組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雙向反應(yīng)器保護(hù)液組上清尿素、白蛋白濃度于第1至7天均明顯高于雙向反應(yīng)

29、器組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而RCMW保護(hù)液組ALT、AST濃度于第2至7天均明顯低于RCMW組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雙向反應(yīng)器保護(hù)液組ALT、AST濃度于第4至7天均明顯低于雙向反應(yīng)器組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 研究結(jié)論：
　　 本課題組研制的肝細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)保護(hù)液,可在同等條件下有效減輕規(guī)?；囵B(yǎng)中各種培養(yǎng)環(huán)境因素對(duì)肝細(xì)胞造成的損傷,以進(jìn)一步提高肝細(xì)胞規(guī)模化培養(yǎng)的密度