一株嗜鹽桿菌的溶藻特性及其溶藻活性物質(zhì)的分離純化.pdf

1、赤潮是全球性的海洋生態(tài)災(zāi)害問題之一，而其防治研究一直廣受關(guān)注。海洋溶藻細(xì)菌對(duì)赤潮藻類有高效的抑制作用，對(duì)環(huán)境負(fù)面影響較小，已成為赤潮防治研究的熱點(diǎn)之一，尤其是溶藻活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)，為赤潮治理提供了新的方法和思路，也是目前研究的難點(diǎn)和要突破的重點(diǎn)。
　　對(duì)中肋骨條藻（Skeletonema costatum）具有間接溶藻作用的嗜鹽桿菌溶藻菌株（Halobacillus sp. HSQAY1，GenBank登錄號(hào)為JX308828）由本

2、實(shí)驗(yàn)室從深圳大鵬灣赤潮爆發(fā)海域分離并保藏。本文研究了該嗜鹽桿菌的生長(zhǎng)特征，胞外溶藻物質(zhì)的理化特性，并對(duì)溶藻物質(zhì)進(jìn)行了初步的分離純化。主要結(jié)果如下：
　?。?）采用平板菌落法測(cè)定了溶藻細(xì)菌HSQAY1的生長(zhǎng)曲線，結(jié)果顯示0-8 h為遲緩期，8-40 h為對(duì)數(shù)期，40-72 h進(jìn)入穩(wěn)定期，72 h后進(jìn)入衰亡期；遲緩期期間細(xì)菌無菌濾液的溶藻作用不顯著，而進(jìn)入對(duì)數(shù)期后其溶藻作用顯著增強(qiáng)，此后溶藻率基本穩(wěn)定在80.4％～93.4%之間。

3、r>　?。?）細(xì)菌分別用pH為5.5，6.5，7.5，8.5和9.5的培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h后，其無菌濾液的溶藻率分別為20.62%，46.10%，61.14%，62.99%，74.41%，表明弱酸性條件不利于細(xì)菌生長(zhǎng)或合成分泌溶藻物質(zhì)，而堿性環(huán)境更有利于細(xì)菌的生長(zhǎng)或溶藻物質(zhì)的合成分泌；用鹽度分別為20，25，30，35，40培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌48h，其無菌濾液的溶藻率分別為53.03%，88.13%，87.94%，41.91%和17.25%，

4、表明鹽度為25~30時(shí)最有利于細(xì)菌生長(zhǎng)或合成分泌溶藻物質(zhì)，而鹽度過高（鹽度為40）則會(huì)抑制其生長(zhǎng)或溶藻物質(zhì)的合成。
　?。?）菌株HSQAY1產(chǎn)生的溶藻活性物質(zhì)在強(qiáng)酸性條件下（pH=3）喪失活性，而pH5~11時(shí)其溶藻率在83.4%～98.4%之間；溫度在30~110℃時(shí)，其溶藻率在71.7%～94.5%之間，表現(xiàn)出一定的酸堿穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性；此外，該溶藻物質(zhì)不受反復(fù)凍融（-20℃）的影響。說明溶藻活性物質(zhì)不耐強(qiáng)酸，但有較好的耐堿

5、性、熱穩(wěn)定性和不受反復(fù)凍融影響，有較強(qiáng)的環(huán)境穩(wěn)定性。
　?。?）無菌濾液經(jīng)乙醇沉淀分離獲得的沉淀相具有溶藻活性，溶藻率高達(dá)到65.6%，而浸提相無溶藻活性；硫酸銨飽和度為60%～80%時(shí)可析出具有顯著溶藻活性的粗蛋白沉淀，超濾法獲得溶藻活性組分的分子量大于10 kDa，表明該溶藻活性物質(zhì)可能是一種分子量大于10 kDa的蛋白類物質(zhì)。
　　（5）硫酸銨沉淀的粗蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示在15~40 kDa間有3條明顯的特