多胺和表面活性劑對歐美楊107轉(zhuǎn)化的影響及sePEAMT、seCMO共表達載體構(gòu)建.pdf

1、在我國北方推廣種植的歐美楊107是優(yōu)良紙漿材和生態(tài)防護林品種，是基因工程育種研究中的優(yōu)良材料。在已有的歐美楊107組織培養(yǎng)條件基礎(chǔ)上，本實驗首先對該品種的卡那霉素敏感性進行了研究。結(jié)果表明歐美楊107外植體的再生、繼代和生根培養(yǎng)適宜的卡那霉素篩選濃度分別為30mg/L、30mg/L和20mg/L。為了提高歐美楊107的外源基因轉(zhuǎn)化效率，本試驗使用攜帶GUS和nptⅡ基因的pBI121表達載體轉(zhuǎn)化歐美楊107，對菌種、多胺和表面活性劑等影

2、響轉(zhuǎn)化效率的因素進行了研究。GUS瞬時表達檢測結(jié)果表明，經(jīng)5mM腐胺或亞精胺活化的農(nóng)桿菌侵染獲得的瞬時表達率提高到對照的2.4和1.8倍。表面活性劑PluronicF-68和SilwetL-77的使用同樣能提高侵染效率，其中添加0.01％(w/v)PluronicF-68獲得的效果最佳。在此基礎(chǔ)之上，實驗中利用卡那霉素篩選對侵染后外植體的再生和繼代進行了研究。抗生素篩選條件下的外植體再生和繼代出芽趨勢與GUS瞬時表達檢測的結(jié)果一致，表明

3、無論是腐胺還是PluronicF-68處理都可以提高歐美楊107遺傳轉(zhuǎn)化效率。 甜菜堿合成涉及多個酶的作用，磷酸乙醇胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶(PEAMT)是合成膽堿的關(guān)鍵酶，膽堿單加氧酶(CMO)則催化膽堿氧化為甜菜堿醛，最后由甜菜堿醛脫氫酶(BADH)作用氧化為甜菜堿，其中PEAMT和CMO對甜菜堿積累起著決定性作用。實驗中首先用卡那霉素抗性基因nptⅡ替換了載體pYLTAC747H上的潮霉素基因hpt，之后將兩段Mar序列與鹽角草的