江蘇省HFMD病原譜研究及柯薩奇B3疫苗評(píng)價(jià)小鼠模型的初步建立.pdf

1、手足口?。℉and, foot and mouth disease, HFMD）是一種嬰幼兒人群常見(jiàn)的急性傳染病，近年來(lái)在世界范圍特別是亞太地區(qū)廣泛流行。腸道病毒（Enterovirus, EV）為引起 HFMD的主要病原體，其中人類腸道病毒71型(Enterovirus A71, EV-A71)和柯薩奇病毒A組16型(Coxsackievirus A16, CV-A16)因引發(fā)多個(gè)國(guó)家或地區(qū)的HFMD暴發(fā)而受到廣泛關(guān)注。然而HFMD病

2、原譜以及主要病原的疫苗學(xué)研究仍存在諸多亟需解決的問(wèn)題，主要表現(xiàn)為：1.目前缺乏HFMD發(fā)病率和基于發(fā)病率的病原譜資料，闡明HFMD發(fā)病率及病原譜對(duì)評(píng)估HFMD的疾病負(fù)擔(dān)，針對(duì)性的研發(fā)疫苗具有重要意義；2.腸道病毒的遺傳物質(zhì)在流行中易發(fā)生變異，導(dǎo)致流行毒株及其引發(fā)的HFMD癥狀的復(fù)雜性，因此需明確EV-A71/CV-A16以及其他腸道病毒的分子流行特征，以確定有效的疫苗株；3. EV-B組病毒除引起HFMD外，易導(dǎo)致病毒性心肌炎、腦炎等重

3、癥疾病，目前尚無(wú)針對(duì)CV-B組特別是CV-B3的疫苗，開展CV-B3動(dòng)物模型和疫苗研究，可為研發(fā)防控病毒性心肌炎疫苗提供數(shù)據(jù)。
　　針對(duì)上述HFMD病原學(xué)以及CV-B3的疫苗學(xué)研究方面存在的問(wèn)題，本研究采用主動(dòng)監(jiān)測(cè)和病例報(bào)告結(jié)合的方法對(duì)江蘇省 HFMD的發(fā)病率和病原譜進(jìn)行研究，同時(shí)分析HFMD主要病原的分子流行特征，初步建立CV-B3動(dòng)物模型，開展了滅活疫苗免疫保護(hù)效果研究。
　　1.對(duì)江蘇省EV-A71疫苗Ⅲ期臨床9442

4、例對(duì)象進(jìn)行為期兩年的前瞻性隊(duì)列研究，采用主動(dòng)監(jiān)測(cè)方法獲得了2012-2013年該人群中 HFMD的發(fā)病率為150.9/1000人年，前5位發(fā)病率（1000人年）的腸道病毒依次為CV-A16(54.5)、CV-B3(14.2)、CV-A10(8.5)、EV-A71(5.9)和CV-A6(5.7)；2012-2013年該人群HFMD病原譜為CV-A16(36.1％)、CV-B3(9.3%)、CV-A10(5.6%)、CV-A6(3.7%)、

5、E9(3.1%)、EV-A71(2.2%)、CV-A2/CV-A12/CV-A22/CV-A14/E16(1.9%)、CV-A8/CV-A9/E3/ E11/E24(1.2%)、CV-A1/CV-A4/CV-B5/CV-A21/E6/E18/E19(0.6%)、未分型腸道病毒(8.6%)和非腸道病毒(25.0%)。
　　2.采用病例報(bào)告研究獲得2013-2014年該人群中HFMD的發(fā)病率為29.9/1000人年，前5位發(fā)病率（10

6、00人年）的腸道病毒依次為EV-A71(4.2)、CV-A16(1.2)、CV-A22(1.1)、CV-A6(0.9)和CV-A24(0.7)。2013-2014年該人群HFM D病原譜：EV-A71(14.2%)、CV-A16(3.9%)、CV-A22(3.5%)、CV-A6(2.8%)、CV-A24(2.5%)、CV-A10/CV-B3/E6(2.1%)、CV-B5(1.8%)、E9(1.4%)、CV-A9/CV-B4(1.1%)、

7、CV-B2/E1/E11(0.7%)、CV-A1/CV-A2/CV-A20/E3/E7/E15/E16/E21/E25/EV-B69/EV-C99(0.4%)、未分型腸道病毒(6.4%)和非腸道病毒(51.8%)。應(yīng)用二代測(cè)序在腸道病毒陰性病例標(biāo)本中檢測(cè)到陽(yáng)性率較高的鏈球菌和人類皰疹病毒5型，在HFMD病原譜中構(gòu)成比分別為27.9%和47.8%。
　　3.對(duì)兩年間引起HFMD的主要腸道病毒進(jìn)行分離和序列分析，獲得EV-A71、CV

8、-A16、CV-A6等毒株的分子進(jìn)化特征：2012-2014年間EV-A71毒株為C4a亞型不同分支毒株共流行；兩年間流行的CV-A16毒株分別屬于B2a亞型不同分支；2012年CV-A6毒株為F2和F3亞型共流行，而2013年主要流行F3亞型毒株；2012年流行的CV-A10毒株屬于基因型C和D；2012年流行的CV-B3毒株屬于D2亞型不同分支。
　　4.應(yīng)用分離的CV-B3強(qiáng)毒株（286/CV-B3），初步建立了疫苗評(píng)價(jià)用小

9、鼠模型，并利用該模型對(duì)制備的CV-B3滅活疫苗的保護(hù)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示滅活疫苗免疫的小鼠在應(yīng)用強(qiáng)毒株286/CV-B3攻毒時(shí)，呈現(xiàn)較好的保護(hù)效果。
　　綜上所述，本研究獲得了2012-2014年江蘇省嬰幼兒人群 HFMD的發(fā)病率和病原譜，提出HFMD多價(jià)疫苗應(yīng)包括病原譜中比例較高且危害較大的CV-B3和CV-A6。為解決CV-B3疫苗研究中存在的瓶頸，初步建立了CV-B3疫苗評(píng)價(jià)的小鼠動(dòng)物模型，并對(duì)CV-B3滅活疫苗保護(hù)效果進(jìn)