鱗狀細胞癌抗原磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測試劑盒的研制與應(yīng)用.pdf

1、SCCA作為鱗狀細胞癌腫瘤標志物，具有較好的特異性，對于子宮頸癌、肺癌（非小細胞肺癌）等鱗狀上皮細胞起源的癌癥具有輔助診斷的意義。早期研究表明患有宮頸鱗狀細胞癌的婦女血清中的SCCA水平要高于健康人群的水平。SCCA水平的檢測可有助于鱗狀細胞癌、子宮頸癌等多種癌癥的早期診斷、檢測復(fù)發(fā)和疾病狀態(tài)監(jiān)測。目前國內(nèi)關(guān)于SCCA項目磁微粒試劑的研究處于初級階段，所需要的抗體大都依賴進口。
　　1.主要原材料研究：
　　通過免疫小鼠得到

2、三株SCCA系單克隆抗體，經(jīng)過篩選與優(yōu)化得到一對反應(yīng)性強、梯度反應(yīng)好的配對抗體，即2#包被抗體與HRP-3酶標抗體。并制定了用于控制原材料批間差的SCCA試劑盒的原材料質(zhì)量標準。
　　2.試劑盒各組分制備工藝研究：
　　磁微?；鞈乙旱闹苽涔に嚍轸然鶅刹椒?，包被濃度0.2μg/T，封保液配方為含1％的牛血清白蛋白、10%新生牛血清的 PBS緩沖液；酶結(jié)合物稀釋液的配方為含10%新生牛血清的MES緩沖液，酶標抗體的工作濃度為1：

3、2000；校準品稀釋液的配方為含1%牛血清白蛋白的硼酸鹽緩沖液（pH7.4）。
　　3.反應(yīng)體系研究：
　　本試劑盒檢測樣本為血清，反應(yīng)模式為兩步法，各試劑組分加樣量為50μL樣本+20μL磁微粒+50μL酶結(jié)合物，反應(yīng)條件為37℃溫育15 min+15 min。
　　4.試劑盒分析性能研究：
　　最低檢測限：≤0.2 ng/mL。
　　準確性（回收率）：85%-115%。
　　精密性：分析內(nèi)、分析間

4、變異均＜8%，批間變異＜12%。
　　特異性：膽紅素在25 mg/L、血紅蛋白在500 mg/dL、甘油三酯在50 mmoL/L時，對本試劑盒的影響均小于15%。
　　穩(wěn)定性：考核試劑盒的加速破壞穩(wěn)定性（37℃放置7天）、實時穩(wěn)定性（2-8℃儲存14個月）、模擬運輸穩(wěn)定性（37℃震蕩3天、7天）、模擬凍融穩(wěn)定性（反復(fù)凍融3次、7次）、載機穩(wěn)定性（載機28天），與2-8℃保存的試劑盒相比，臨床樣本回算值偏差小于10%，各項指標

5、均滿足要求。
　　5.參考值研究：
　　考核正常人體檢樣本156例，其中男性樣本98例，女性樣本58例。利用統(tǒng)計學(xué)方法對檢測結(jié)果進行分析，取95%的百分界線，得出試劑盒的參考值為1.5 ng/mL。
　　6.臨床分析研究：
　　該試劑盒與比對試劑盒共平行測定1297份臨床樣本，線性回歸方程為y=1.0229x-0.0259，相關(guān)系數(shù) R2=0.9554，陽性符合率97.66%，陰性符合率為98.02%，總符合率為