八氯苯乙烯酶聯(lián)免疫分析方法的建立.pdf

1、八氯苯乙烯(OCS)是一種高氯代芳香族化合物，具有持久性和生物積累性兩個(gè)特點(diǎn)，屬于潛在的持久性有機(jī)污染物。在過(guò)去的十幾年里已經(jīng)建立的檢測(cè)OCS方法主要有氣相色譜、高效液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜法連用(GC-MS)和凝膠滲透色譜法(GPC)。雖然這些方法具有廣泛的實(shí)用性、分析結(jié)果準(zhǔn)確度高，但是因成本高、儀器貴重和對(duì)操作人員的專業(yè)要求高等缺點(diǎn)不能滿足大批量樣品現(xiàn)場(chǎng)快速分析的要求。因此，OCS的檢測(cè)迫切需要一種新型的，簡(jiǎn)單的，靈敏的，費(fèi)用低的檢

2、測(cè)方法。新型，快速，費(fèi)用低，簡(jiǎn)單的OCS測(cè)定方法，為OCS的研究和控制提供了便利條件。
　　 Ercegovich等人于1971年第一次將免疫分析方法應(yīng)用到環(huán)境監(jiān)測(cè)，近年來(lái)，免疫分析技術(shù)在環(huán)境領(lǐng)域已得到了廣泛的認(rèn)可與應(yīng)用，同時(shí)新的方法和新的手段的不斷出現(xiàn)為環(huán)境持久性有機(jī)污染物的免疫分析方法的發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。免疫分析方法的特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作方法簡(jiǎn)單、分析容量大、檢測(cè)成本低、不需要昂貴儀器、前處理步驟簡(jiǎn)化等優(yōu)點(diǎn)是常規(guī)儀器

3、分析所不能比擬的，另外它所具備的選擇性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn)使之非常適合于復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分的分析檢測(cè)。目前，對(duì)環(huán)境持久性有機(jī)污染物免疫分析方法的研究，國(guó)內(nèi)外均報(bào)道，主要側(cè)重于ELISA法。據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研結(jié)果，目前沒(méi)有關(guān)于OCS物質(zhì)的免疫檢測(cè)報(bào)道。
　　 本論文將八氯苯乙烯進(jìn)行衍生化，合成半抗原，然后將他們分別與兩種不同的蛋白質(zhì)偶聯(lián)合成免疫原和包被原。用人工抗原免疫大白兔，制各出具有高親和力的抗八氯苯乙烯抗體，最后以抗八氯苯乙烯血清為基

4、礎(chǔ)建立檢測(cè)八氯苯乙烯的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法。具體研究?jī)?nèi)容如下:
　　 (1)八氯苯乙烯半抗原和人工抗原的合成及鑒定
　　 為了建立針對(duì)八氯苯乙烯的免疫分析方法，本文以五氯硝基苯為出發(fā)點(diǎn)，逐步合成了八氯苯乙烯半抗原，再用活化酯法將八氯苯乙烯半抗原分別與牛血清白蛋白偶聯(lián)合成免疫原OCS-BSA，與卵白蛋白偶聯(lián)合成包被原OCS-OVA。經(jīng)過(guò)徹底透析后，通過(guò)紫外光譜鑒定得知人工抗原已成功合成。最后粗略計(jì)算免疫原OCS-BS

5、A中半抗原與BSA的結(jié)合比為25∶1，包被原OCS-OVA中半抗原與OVA的結(jié)合比為22∶1。
　　 (2)八氯苯乙烯多克隆抗體的制備和效價(jià)的測(cè)定
　　 用免疫原OCS1-BSA、OCS2-BSA和OCS3-BSA分別免疫兩只大白兔，制備抗血清，平行兩只兔子取效價(jià)高的血清備用，最后得抗血清的最高效價(jià)分別為1∶128000,1∶256000和1∶64000。
　　 (3)八氯苯乙烯間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的建立<

6、br>　　 通過(guò)對(duì)包被原、抗血清、緩沖溶液的pH值、Tween-20的含量和有機(jī)溶劑的種類及含量進(jìn)行優(yōu)化，得到了ic-ELISA檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線、靈敏度和線性范圍。結(jié)果顯示最優(yōu)條件為:以10μg/mL的OCS1-OVA作為包被原，用OCS2-BSA作為免疫原，獲得的最佳抗血清稀釋倍數(shù)為1∶128000，稀釋待測(cè)物的溶液為含有15％乙腈的pH7.4，0.05 M PBS緩沖溶液并含有0.005％的Tween-20。
　　 在這