蟾酥對Hep-2細(xì)胞系的體外生長及生存素、Caspase-9蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 惡性腫瘤一直是嚴(yán)重威脅人類生命安全的疾病之一。因此，尋求安全并且高效的抗腫瘤藥物以及治療方法，一直是科學(xué)界著重研究的熱點(diǎn)。
　　 蟾蜍是自然界的古老動物之一，蟾酥是蟾蜍科兩棲爬行動物的耳后及皮膚腺分泌物經(jīng)加工而成，為我國傳統(tǒng)名貴中藥。研究表明:蟾酥具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛和抗癲癇等多種醫(yī)學(xué)價(jià)值。而生存素(Survivin)以及Caspase分子，尤其是Survivin，由于其特殊的作用機(jī)制及其高度特異性的組織分布，

2、已經(jīng)成為惡性腫瘤的診斷及其治療的新靶點(diǎn)，Survivin的高表達(dá)是許多惡性腫瘤預(yù)后不良的標(biāo)志之一。近年研究表明，Survivin的分布不同于凋亡抑制蛋白家族的其他成員，生理狀態(tài)下，大多數(shù)組織均測不到生存素表達(dá)。而在絕大多數(shù)腫瘤組織中則檢測其高表達(dá)。有研究提示，Survivin主要是通過直接抑制Caspase-3和Caspase-7的活性，從而發(fā)揮抗凋亡作用。另有學(xué)者推測:Survivin的抗凋亡作用是通過抑制Caspase-9凋亡途徑實(shí)

3、現(xiàn)的。近些年來，雖然人們對蟾酥的抗腫瘤作用及其細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制和分子生物學(xué)機(jī)制都做出了廣泛的研究，但其具體的機(jī)制至今仍然不是十分清楚，故開展其相關(guān)機(jī)制研究具有重要的意義。
　　 本研究通過對體外培養(yǎng)的Hep-2細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞）進(jìn)行藥物干預(yù)，研究蟾酥水溶物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用及其對Survivin蛋白和Caspase-9蛋白表達(dá)的影響，探討蟾酥抗腫瘤的分子機(jī)制，為藥物的臨床應(yīng)用提供新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方

4、法:
　　 1、Hep-2細(xì)胞系的傳代培養(yǎng)。將Hep-2細(xì)胞系置于T-25培養(yǎng)瓶內(nèi)，用DMEM培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)。
　　 2、應(yīng)用MTT法，分別檢測不同作用時(shí)間(6 h、12h、24h)以及藥物濃度(18μg/ml、9μg/ml、4.5μg/ml)的蟾酥水溶物對Hep-2細(xì)胞系生長的抑制率。
　　 3、應(yīng)用Western blot法，檢測4.5μg/ml濃度藥物作用不同時(shí)間(0 h、6h、12h、24 h、48h)的

5、蟾酥水溶物對Hep-2細(xì)胞的Survivin蛋白和Caspase-9蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、蟾酥對Hep-2細(xì)胞生長狀況的影響。
　　 MTT結(jié)果顯示:蟾酥水溶物對體外培養(yǎng)的Hep-2細(xì)胞的生長具有抑制性作用，而且其抑制的程度與蟾酥的濃度的高低以及藥物作用的時(shí)間成正相關(guān)。
　　 2、蟾酥對Hep-2細(xì)胞系中Survivin及Caspase-9蛋白表達(dá)的影響。
　　 Western